Engraftment de tumor en un modelo de ratón de xenoinjerto de linfoma de manto humano
Summary
Linfoma del manto (MCL) es un difícil de tratar el trastorno de la célula de B y es igualmente difícil establecer un modelo de ratón de xenoinjerto de MCL primaria a estudiar y desarrollar la terapéutica. Aquí, describimos el establecimiento acertado de xenoinjertos MCL en ratones para ayudar a comprender su biología subyacente.
Abstract
Los linfocitos B son actores clave en la circulación de células inmunitarias y principalmente hogar y residen en los órganos linfoides. Mientras que las células B normales sólo proliferan cuando estimulados por los linfocitos T, células B oncogénicas sobrevivirán y amplían autónomamente en nichos de órgano indefinido. Linfoma del manto (MCL) es un tal trastorno de la célula de B, donde la tasa mediana de supervivencia de los pacientes es 4-5 años. Esto requiere la necesidad de mecanismos efectivos por que se bloquean el autoguiado hacia el blanco y el injerto de estas células con el fin de aumentar la supervivencia y longevidad de los pacientes. Por lo tanto, el esfuerzo para desarrollar un modelo de ratón de xenoinjerto para estudiar la eficacia de la terapéutica MCL bloqueando la recalada mecanismo en vivo es de suma importancia. Desarrollo de receptores animales para xenotransplante de células humanas para probar drogas etapa temprana largo han sido perseguido, como modelos de ratón preclínicos relevantes son cruciales para nuevos agentes terapéuticos pantalla. Este modelo animal se desarrolla para evitar el rechazo al injerto humano y establecer un modelo para enfermedades humanas, y puede ser una herramienta extremadamente útil para el estudio de progresión de la enfermedad de tipos diferentes de linfoma y para efectuar la prueba preclínica de fármacos candidatos para malignidades hematológicas, como MCL. Hemos establecido un modelo de ratón de xenoinjerto que servirá como un excelente recurso para estudiar y desarrollar nuevos enfoques terapéuticos para MCL.
Introduction
Linfocitos por naturaleza un papel importante en la vigilancia inmune, y trata de linfocitos es un paso crítico en la inmunidad específica de antígeno1,2de montaje. Este proceso incluye la migración de linfocitos T del timo al torrente sanguíneo y de allí a los órganos linfoides secundarios, incluyendo los ganglios linfáticos, placas de Peyer y bazo, donde se encuentran los antígenos afines. Los linfocitos B diferencian en la médula ósea y migran como ingenuo células en los folículos de los órganos linfoides secundarios3. Algunas de estas células B antígeno con su receptor unen y son activados por células T específicas. Proliferación y diferenciación de estas células B empuja las células Naive B desactivado, en la zona del manto del folículo. Las células activadas pueden distinguir entonces en memoria B las células, que patrullan el cuerpo, o maduran en inmunoglobulinas secretoras de las células plasmáticas que migran a la médula ósea4.
MCL se produce cuando los linfocitos B en la zona del manto se transforman en un tumor. Estas células de linfoma residen en el microambiente de los órganos linfoides y proliferan independientemente de linfocitos T específicos de control. Sin embargo, en un determinado momento de densidad escapan de este nicho y recirculan en el torrente sanguíneo en búsqueda de nichos en otros órganos. Teniendo en cuenta la complejidad de las moléculas de adhesión y la promiscuidad de quimiocinas y sus receptores, el mecanismo de este celular trata en vivo es mal entendido y por lo tanto dificulta la terapia. Se necesitan métodos nuevos para bloquear este proceso de migración para evitar que las células del linfoma B llegando a microambientes nuevo.
MCL es uno de los más difíciles para el tratamiento de tumores malignos de células B. El desarrollo de un fenotipo neoplásico de MCL es el resultado de una cascada multietapa, caracterizado por la adquisición de propiedades biológicas únicas. En el momento del diagnóstico, mayoría (70%) de los pacientes ya presentan una enfermedad diseminada, con una mayoría de casos exponiendo implicación extranodal en bazo, médula ósea, y en el tracto gastrointestinal5,6. En los pacientes tratados, recaídas de tumores resistentes dentro de unos años es común, a pesar de la quimioterapia convencional induce tasas de remisión alta a corto plazo7,8. Aquí presentamos un nuevo modelo de enfermedad que puede ayudar a entender su biología subyacente y difusión MCL: establecimos un modelo humano del ratón del xenoinjerto MCL que se originaron en las células del tumor primario de los pacientes. Esperamos que este modelo ayudará a desarrollar estrategias terapéuticas contra difusión de MCL y posiblemente proporcionar nuevas perspectivas clínicas para óptimo diagnóstico y tratamiento de los pacientes recaídos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Los ensayos clínicos son posibles para los medicamentos que están en una etapa avanzada de desarrollo pero no se puede utilizar para el descubrimiento de medicamentos. Esfuerzos para desarrollar a animales destinatarios para xenotransplante de células humanas para probar drogas etapa temprana largo han sido llevadas a cabo. Aquí presentamos un modelo animal que evita el rechazo al injerto humano y puede establecer un modelo para enfermedades humanas, como MCL. Esto es en la actualidad un modelo de xenoinjerto de vang…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por el Ligue Genevoise contre le Cancer, Fundación Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 y 2914-02-2012 y subvención de Fundación de ciencia nacional suizo 31003A_156760 y 310030-153456.
Materials
| Ficoll-paque media | GE Healthcare | 17-1440-02 | for separation of mononuclear cells |
| RPMI Medium 1640 | Gibco-Life technologies | 61870-010 | for dilution of blood sample |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537 | washing of cells |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Sigma-Aldrich | A8412 | for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation |
| CD19-APC700 | Beckman Coulter | B49212 | human pan-B cell marker |
| CD20-APC | Beckman Coulter | A21693 | human pan-B cell marker |
| CD20-ECD | Beckman Coulter | IM3607 | human pan-B cell marker |
| CD5-PC 5.5 | Beckman Coulter | PN A70203 | human T cell marker |
| CD23-PE | Pharmingen | 555711 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| CD45 KO | Beckman Coulter | B36294 | Pan-leucocyte marker |
| CD200-PE | Pharmingen | 552475 | Cell surface protein typically absent in MCL |
| NOD scid gamma (NSG) mice | Charles River Laboratories | 5557 | used to develop MCL xenografts in this study |
| Easy sep Human B cell enrichment kit | Stem cell technologies | 19054 | used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice |
| FACS | Beckman Coulter | Navios | used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment |
| 1X ammonium chloride potassium buffer | red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2·2H2O 3.722 mg/l ) |
References
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