이 비디오는 후반 배아와 초기 출생 후의 마우스 피질에서 문화의 연결을 생성하는 절차를 보여줍니다. 이러한 문화가 immunocytochemistry, 생화학, 전기 생리학, 칼슘, 나트륨 이미징에 사용되며 출생 후의 치명적인 유전자 변이를 가지고 유전자 변형 동물의 개발의 연결을 연구하는 플랫폼을 제공하실 수 있습니다.
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이 논문에서
요약
초록
이 비디오는 후반 배아와 초기 출생 후의 마우스 두뇌의 대뇌 피질의 연결을 문화를 생성하는 과정을 통해 여러분을 안내할 것입니다. 이러한 문화가 immunocytochemistry, 생화학, 전기 생리학, 칼슘, 나트륨 이미징, 단백질 및 / 또는 RNA 격리를 포함하여 다양한 어플 리케이션에 사용될 수 있습니다. 이 문화는 또한 늦은 배아 또는 출생 후의 치명적인 유전자 변이를 가지고 유전자 변형 동물의 개발의 연결을 연구하는 플랫폼을 제공합니다. 절차는 상대적으로 바로 전달됩니다 조직 문화 기술의 경험을 필요로하고 당신이 제대로 준비가되어있다면 더 이상보다 두세 시간 걸릴 안됩니다. thalamo - 피질 섬유 트랙트에서 대뇌 피질의 껍질주의 분리 원치 않는 비의 연결을 세포의 수를 줄일 수 있습니다. 의 연결을 세포의 수율은 효소 인큐베이션 단계 뒤에 부드럽게 피질 조직의 조각을 씹다 증가합니다. 그것이 세포 상조의 연결을 세포 죽음에 불필요한 부상을 방지 등이 필수적입니다. 이러한 문화가 glia 피더 세포의 부재로 유지되므로, 그들은 또한 뉴런에서 풍부한 성장 문화의 추가 혜택을 제공합니다.
프로토콜
culturing의 하루 전에 준비 :
- 무균 해부 솔루션 (DS)를 준비합니다.
- NBM/B27 (B27 보충제로 Neurobasal Mediom)를 준비합니다.
- 필요한 경우 압력솥 ddH 2 O가 있으며, 유리 coversilps을 소독.
- 폴리 - D - 라이신과 코트 조직 문화 요리 또는 유리 coverslips.
폴리 - D - 라이신 코팅 :
무균 조건 하에서 culturing 전에 하루를 준비합니다.
- 얼음 10X PDL 장소의 해동의 나누어지는.
- PDL 1 ML 9 ML 살균 울트라 필터 물을 추가하고 (1X) 잘 섞는다.
- 다음과 같이 실온에서 하룻밤 1X PDL로 코트 표면 :
- 유리 coverslips (Bellco 유리 주식 회사 캣 # 1943-00012.) : 75 μl / coverslip
또는 - 24 잘 문화 플레이트 : 잘 300 μl /
또는 - 35mm 문화 요리 : 1ml/dish
- 유리 coverslips (Bellco 유리 주식 회사 캣 # 1943-00012.) : 75 μl / coverslip
- 멸균 물 (액체를 대기음....
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공개 사항
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 5-Fluoro-2’-deoxyuridine | Sigma-Aldrich | F0503 | |
| 염화나트륨 | Sigma-Aldrich | S9625 | |
| Vibraslicer | Campden Instruments | ||
| 염화칼륨 | Sigma-Aldrich | P4504 | |
| 인산이나트륨 | Sigma-Aldrich | S0876 | |
| 인산일칼륨 | Sigma-Aldrich | P5379 | |
| Hepes | Sigma-Aldrich | H3375 | |
| D (+)-포도당 | Sigma-Aldrich | G8270 | |
| 자당 | Sigma-Aldrich | S0389 | |
| Poly-D-Lysine | Sigma-Aldrich | P7280 | |
| B27 보충제 | Invitrogen | 17504-044 | |
| Neurobasal 배지 (NBM) | Invitrogen | 21103-049 | |
| 2-Amino-5-phosphonopentanoic acid | Sigma-Aldrich | A5282 | |
| 우혈청 알부민 | Sigma-Aldrich | A7030 | |
| 트립신 억제제 | Sigma-Aldrich | T9253 | |
| 수산화나트륨, 1N 용액 | Fisher Scientific | SS266-1 | |
| L-시스테인 | Sigma-Aldrich | C7755 | |
| Bacto Agar | Difco Laboratories | 0140-01 | |
| 파파인 | Worthington Biochemical | LS 03126 | |
| 멸균 0.2 μm 시린지 필터 | Fisher Scientific | DDA02025S0 | |
| 유리 커버슬립, No1, 12mm | Bellco Glass | 1943-00012 | |
| 최소 필수 배지 (MEM) | Invitrogen | 11090-081 | Earle’ 염을 포함하고 L-글루타민이 제외된 배지로, 비신경세포 배양에 필요함 |
| 페니실린/스트렙토마이신 | Invitrogen | 15070-063 | 비신경세포 배양용 |
| 소태아혈청 | Invitrogen | 16140-071 | 비신경세포 배양에 필요함 |
| Nunclon "Triple Flask" 조직 배양 병 | Fisher Scientific | 12-565-25 | 비신경세포 배양에 사용함. 이 플라스크는 "조건화 Neurobasal 배지/B27"를 제조할 때 매우 편리하지만, 다른 조직 배양 플라스크나 디쉬로 대체 가능함. |
| 유리 바닥 "이미징 디쉬" | MatTek Corp. | P35G-1.5-10-C | 유리 바닥의 35mm 배양 디쉬로, 도립 이미징 설정을 사용할 때 칼슘 또는 나트륨 이미징에 이상적임. 단, 가격이 비쌈! |
재인쇄 및 허가
