Grubuyla Fare Kortikal Nöron Kültürler hazırlanması
Summary
Bu video geç embriyo ve erken postnatal fare kortekste nöronal kültürlerin üretmek için bir prosedür gösterir. Bu kültürler immünsitokimya, biyokimya, elektrofizyoloji, kalsiyum ve sodyum görüntüleme için kullanılan ve doğum sonrası ölümcül bir gen mutasyonu taşıyan transgenik hayvanlar nöronal geliştirme çalışması için bir platform sağlamak olabilir.
Abstract
Bu video geç embriyo ve erken postnatal fare beyin kortikal nöronal kültürlerin üretmek için süreç boyunca size rehberlik edecektir. Bu kültürler immünsitokimya, biyokimya, elektrofizyoloji, kalsiyum ve sodyum görüntüleme, protein ve / veya RNA izolasyon da dahil olmak üzere çok çeşitli uygulamalar için de kullanılabilir. Bu kültürler de, geç embriyonik ya da doğum sonrası ölümcül bir gen mutasyonu taşıyan transgenik hayvanlar nöronal gelişim çalışması için bir platform sağlar. Bu prosedür, nispeten düz ileri doku kültürü tekniği biraz tecrübe gerektirir ve düzgün bir şekilde hazırlanır 2-3 saat daha uzun sürmemelidir. Talamo-kortikal fiber kanaldan kortikal kabuklu dikkatli olarak ayrılması istenmeyen non-nöronal hücrelerin sayısını azaltacaktır. Nöronal hücrelerin verimi enzim inkübasyon adımdan sonra yavaşça kortikal doku parçalarını çiğnemek artırmak için. Hücreleri ve erken nöronal hücre ölümü gereksiz hasarı önlediğini Bu zorunludur. Bu kültürlerin glia besleyici hücrelerin yokluğunda korunur, aynı zamanda nöronlarda zenginleştirilmiş büyüyen kültürlerin ilave bir avantaj sağlayacaktır.
Protocol
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 5-Fluoro-2′-deoxyuridine | Sigma | F0503 | ||
| Sodium Chloride | Sigma | S9625 | ||
| Vibraslicer | Campden Instruments Ltd. | |||
| Potassim Chloride | Sigma | P4504 | ||
| Sodium Phosphate Dibasic | Sigma | S0876 | ||
| Potassium Phosphate Monobasic | Sigma | P5379 | ||
| Hepes | Sigma | H3375 | ||
| D (+)-Glucose | Sigma | G8270 | ||
| Sucrose | Sigma | S0389 | ||
| Poly-D-Lysine | Sigma | P7280 | ||
| B27 Supplement | Invitrogen (Gibco) | 17504-044 | ||
| Neurobasal Media (NBM) | Invirtogen (Gibco) | 21103-049 | ||
| 2-Amino-5-phosphonopentanoic acid | Sigma | A5282 | ||
| Bovine Albumin | Sigma | A7030 | ||
| Trypsin Inhibitor | Sigma | T9253 | ||
| Sodium Hydroxide, 1N solution | Fisher | SS266-1 | ||
| L-Cysteine | Sigma | C7755 | ||
| Bacto Agar | Difco | 0140-01 | ||
| Papain | Worthington | LS 03126 | ||
| Sterile 0.2 µm Syringe Filter | Fisher | DDA02025S0 | ||
| Glass Coverslips, No1, Ø12mm | Bellco Glass Inc. | 1943-00012 | ||
| Minimum Essential Media (MEM) | Invitrogen (Gibco) | 11090-081 | with Earle’s salts without L-glutamine, needed for growing non-neuronal cultures | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen (Gibco) | 15070-063 | for non-neuronal culture | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen (Gibco) | 16140-071 | needed for non-neuronal cultures | |
| Nunclon “Triple Flask” Tissue Culture Bottle | Fisher | 12-565-25 | Use for non-neuronal cultures. these flasks are very convenient when producing “conditioned Neurobasal Media/B27”, but any other tissue culture flasks or dishes can be used instead. | |
| Glass bottom “Imaging dishes” | MatTek Corp. | P35G-1.5-10-C | Glass bottomed, Ø35mm culture dishes ideal for Calcium or Sodium Imaging when using an inverted imaging setup. But expensive! |
