הערכת בדרכי השתן צומת פגמים חסימה על ידי הזרקת מתילן כחול צבע
Summary
הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה מקלה את הערכת ליקויי חסימה בדרכי השתן צומת במהלך התפתחות דלקת בדרכי השתן עובריים בעכבר. . הנה, עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה פרוטוקול המתואר.
Abstract
פגמים חסימה בדרכי השתן צומת הם מולדים גרימת hydronephrosis ו- hydroureter. פגמים חסימה בדרכי השתן מאתר צומת יכול להיות מוערך על ידי מעקב אחר זרימת לצבוע מתילן כחול בתוך מערכת השתן. צבע כחול מתילן מוזרק לתוך אגן הכליה הכליות עובריים הלידה ונשאר צבע זרימת להשגחה של אגן הכליה הכליה וגרגר ו לתוך לומן שלפוחית השתן לאחר הפעלת לחץ הידרוסטטי. צבע הצטברות יהיה ניכר לומן שלפוחית השתן בדרכי השתן הלידה הרגילה, אך מוגבל בין אגן הכליה את נקודת הסיום של שופכן נורמלי, אם התרחשה חסימות בדרכי השתן. שיטה זו מקלה על האישור של חסימות בדרכי השתן צומת והדמיה של hydronephrosis ו- hydroureter. כתב יד זה מתאר פרוטוקול עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך האגן הכליה לאשר חסימות בדרכי השתן צומת.
Introduction
מערכת השתן מורכב זוג של הכליות ו ureters ו נפוץ שלפוחית השתן לשופכה. הפונקציה העיקרית של מערכת השתן היא לשמור על הומאוסטזיס בגוף על-ידי ניהול יתרת אלקטרוליט והמים של הדם. הכליות לסנן את הדם שליטה אלקטרוליט ריכוזים, מאזן חומצה בסיס, לייצר שתן כדי במעים עודף מים ופסולת כולל מומסים בגבול מטבוליטים. השתן מועבר מכן וגרגר מ אגן הכליה עד bladderin באופן חד כיווני איפה זה מאוחסן, בסופו של דבר מסולק דרך השופכה1.
Ureters הם צינורות ישרים שמקורו התעלה nephric. לאחר להנץ מן התעלה nephric ביום עובריים 10.5 (E10.5) העכבר, הקנה שופכן לתרמיל, מבדיל בין לתוך מבנה מרובה שכבות בשם urothelium אשר הוא אטום בין עכבר, E12.5 ו- E16.5. התאים mesenchymal סביב הקנה שופכן מובדלים גם לתוך שלוש שכבות המורכבת תאי סטרומה הפנימי, תאי השריר החלק העבה ביניים ו fibroblasts adventitial החיצוני. Ureteral גלי ממברנות ייזום באגן הכליה מופצים דרך השכבה שריר חלק של הקיר שופכן שלפוחית השתן להובלת שתן2,3, אשר מיוצר החל מ- E16.5 העכבר1.
מולדים של כליות ודרכי השתן (CAKUT) הם בין מחלות גנטיות בתדירות הגבוהה ביותר, נוכח סביב 1% של עוברים אנושיים1,4, המורכבת מגוון פנוטיפים כולל hydronephrosis ו- hydroureter. הצטברות חריגה של שתן בתוצאות שופכן וכליות במבנה כליה, hydroureter hydronephrotic. אחד סיבת היווצרות hydronephrosis ו/או hydroureter היא חסימה של דרכי השתן. חסימת צומת Ureteropelvic (UPJO) נגרמת על ידי זרימת השתן aberrant עקב סתימה בין השופכן הפרוקסימלית של אגן הכליה, וכתוצאה מכך hydronephrosis וצמצום hydroureter הפרוקסימלית אפוזיציה או מתקפלים מתמיד5, 6. בנוסף, חוץ רחמי ההוספה של השופכן דיסטלי לתוך הקיר בשלפוחית השתן או במערכת הרבייה נקרא חסימה בצומת ureterovesical (UVJO). UVJO יכול גם לגרום hydronephrosis ו hydromegaureter היווצרות7,8. פגם צומת (UVJ) ureterovesical נוסף הוא vesicoureteric ריפלוקס (VUR). VUR מאופיין על ידי זרימת השתן רטרוגרדית משלפוחית לכיוון הכליה-UVJ. בהשוואה ל- UVJO, העוברים הלידה עם VUR בפירוש מציג של כליות hydronephrotic נפוחה או hydroureter חמורה פנוטיפ9.
העכבר מעבדה, זרימת השתן יכול להיבדק על ידי הזרקה של צבע, כגון כחול מתילן, לתוך אגן הכליה9. הפתרון injectedmethylene הכחול יהיה להתחקות אחר מסלול שתן מן האגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן. Hydronephrosis ניתן לזהות על ידי הרחבה של לצבוע בתוך הכליה. UPJO ניתן יהיה מזוהה כמו סתימה של צבען זורם השופכן צינתור עם אגן הכליה נפוחה5. כל התרחבות של השופכן שצוין על-ידי קוטר המוגדלות מדגים דוגמה hydroureter. לבסוף, הצטברות צבע לקיר שלפוחית השתן או באתר של מערכת הרבייה מציינת UVJO עם כליה hydronephrotic נפוחה, מורחבים7,hydromegaureter10. כדי לזהות VUR, הפתרון לצבוע מוזרק לתוך שלפוחית השתן, זרימה רטרוגרדית עוקבות מנוטר ב כליות9.
כאן מוצג עבור הזרקת מתילן כחול צבע לתוך אגן הכליה העובר הלידה פרוטוקול. פרוטוקול זה מאפשר את העקיבה של זרימת השתן מ אגן הכליה וגרגר ו לתוך שלפוחית השתן ומוודא פוטנציאליים חסימות צומת דרכי השתן כגון UPJO או UVJO.
Protocol
Representative Results
Discussion
העכבר כליות פונקציונלי החל E16.5, מבחן הזרקת צבע אפשרי תיאורטית, מנקודת זמן זו. עם זאת, הכליה הוא קטן מדי כדי להיות מוזרק עם הפתרון לצבוע, פנוטיפים hydronephrosis ו hydroureter שאינם קיימים בבירור מאז פנוטיפים אלה הם השפעה משנית של שתן בנוי עקב שתן נורמלי תחבורה. פנוטיפים אלה, מן המכשולים כגון UPJO או UVJO, ניכ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
תודה ד ר אלן או Perantoni (CDBL NCI NIH) לתמיכה הגשת כתב היד הזה. אני גם מודה ד ר מייקל הול (CDBL NCI NIH) ו- Nirmala שארמה (CDBL NCI NIH) עבור עריכת כתב היד הזה. אני אסיר תודה עד לאי טהאנג (SAIC) על גידול עכבר מעולה שלו. עבודה זו נתמכה על ידי המכונים הלאומיים לבריאות, מכון הסרטן הלאומי ומרכז לחקר הסרטן.
Materials
| Methylene blue | Sigma-Aldrich | M9140 | |
| Quality Biological Inc. NORMAL SALINE – 500ML | Fisherscientific | 50-983-204 | |
| 3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip | BD | 309657 | |
| Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane | Pall corporation | 4614 | |
| Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12" | EXELINT | 26709 | |
| Delicate Operating Scissors | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-6702 | |
| Micro Dissecting Forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5135 | |
| Dumont Tweezers; Pattern #5 | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5045 | |
| BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" | BD | 305106 |
References
- Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
- Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
- Bohnenpoll, T., Kispert, A. Ureter growth and differentiation. Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).
- Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT. Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).
- Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction. J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).
- Aoki, Y., et al. Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans. Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).
- Yun, K., Perantoni, A. O. Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection. Differentiation. 94, 1-7 (2017).
- Uetani, N., Bouchard, M. Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts. Clin Genet. 75, 307-317 (2009).
- Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction. Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).
- Weiss, A. C., et al. Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme. Development. 141, 3420-3430 (2014).
