독감 조류 특정 항 체에 의해 유도 된 Fc 중재 Effector 기능을 평가 하는 방법

Summary

항 체에 의해 그 대상 인플루엔자 바이러스 조류 Fc 중재 effector 기능 활성화를 측정 하는 방법을 설명 합니다. 이 분석 결과 또한 Fc 중재 면역 유도의 단일 클론 항 체 또는 polyclonal 세라 다른 바이러스 표면 glycoproteins를 대상으로 능력을 평가 하기 위해 적응 수 있습니다.

Abstract

항 체 항 원 바인딩 도메인 Fc 영역을 통해 바이러스 성 병원 체에 대 한 타고 난 및 적응형 면역 응답 커플링에 중요 한 역할을 한다. 여기, 우리가 활성화를 측정 하는 방법에 설명 Fc의 단일 클론 항 체는 활성화 표현 유전자 조작된 Jurkat 세포 라인의 사용으로 인플루엔자 바이러스 조류를 대상으로 하 여 이펙터 기능 입력 1 Fc-FcγR. 전송 시각:이 메서드를 사용 합니다 특정 Fc-FcγR 상호 작용 면역 글로불린에 의해 수 여의 생체 외에서 분석 결과 사용 하 여 확인할 수 있습니다.

Introduction

계절 독감 백신에서 제공 하는 면역은 전통적으로 hemagglutination 억제 (HI) 분석 결과¹, 대상으로 하는 조류의 수용 체 바인딩 사이트 항 체의 존재를 측정 하 여 평가 되었습니다. 이러한이 활성 항 체 살 균 면역을 부여 수 있습니다 하지만 일반적으로 인플루엔자 바이러스의 단지 선택 몇 가지 계통에 면역을 제공 하는 보호의 그들의 범위에서 좁은. 격리 및 조류 (HA)를 인식 하는 광범위 하 게 반응 단일 클론 항 체의 특성화 제안 범용 인플루엔자 백신의 개발은 도달 시간^{2,,34, 5 , 6 , 7 , 8}. 인플루엔자 바이러스^9,10,,11

Protocol

이 원고에서 preformed 실험 윤리 및 규정의 다음 아이 칸의 학부의 기관 코드를 완료 했다.

1. 인플루엔자 바이러스 조류 Transfection 또는 감염의 표현

Transfection:

1. 플레이트 인간 미 발달 신장 (HEK 293T) 셀 셀/잘 백색 조직 문화에서에서 2 x 10⁴ 의 밀도에서 96 잘 접시를 처리 하 고 (와 함께 5% CO₂) 37 °C 배양 기에서 4 h 동안 앉아 보자.
2. 100 셀 transfect DNA 바이러스 조류 및 50 μ의 전체 볼륨에 잘 당 transfection 시 약 0.2 μ에 대 한 코딩의 ng.
   참고: 모두 Opti-최소 필수 미디어 (MEM) 감소 된 혈 청 매체 x 1에 플라스 미드 그리고 transfectant 시 약 희석 하.
3. 플레이트 18 h 5% CO₂ 와 37 °C 배양 기에서 배양 후 transfection 미디어를 제거 합니다.

2입니다. 감염

<....

Results

우리는 시연 스토킹 전용 mAb, 6F12, 하지만 하지 머리 전용 머리 전용 mAb, PY102, upregulating CD107a 및 인터페론 γ¹⁹에 의해 기본 자연 킬러 세포를 활성화할 수 있었습니다. 모델링 기본 인간 NK 세포를 활성화 하는 스토킹 특정 항 체의 능력, 우리 스토킹 관련 mAb, 6F12, 튼튼하게 의해 murine FcγRIV 표현 수정된 Jurkat 세포를 활성화할 수 있습니다 보여 ~ 14-fold. 다른 한편으로, 머리 전용 mAb, PY102 및 제어 IgG (그림 2)²⁸하지 않습니다.

X31 (reassortant 인플루엔자 바이러스는 조류와 응집의 A/Hong 홍콩/1/68 (H3N2)와 MDCK 세포 감염 우리 조사 감염 (MOI)의 다양성 murine FcγRIV 표현 Jurkat 세포의 유도 영.......

Discussion

여기에 설명 된 메서드를 사용 하면 murine FcγRIV 참여 하 특정 단일 클론 항 체의 능력을 측정 하 수 있습니다. 대상 항 인플루엔자 바이러스 조류 바이러스 또는 플라스 미드 DNA의 transfection 감염 후 세포의 표면에 표현 된다. 분석 결과 (인간 또는 murine) 다른 FcγRs와 함께에서 다른 표면 표현 바이러스 성 단백질을 사용 하 여 의무가 더 이다. 또한, 우리는 세라 샘플 사용 Fc effector 기능 (데이터 표시 되지 않음), 유도 컨텍스트를 polyclonal 항 체의 능력을 평가 하기 위해 감염에 의해 유도 된 적합 한 면역 반응 공부 때 보다 관련성이 높은 정보를 제공할 수 있습니다 또는 예방 접종입니다. 우리는 또한 직접 수용 성 단백질으로 플레이트를 코팅 하 여 내부 바이러스 성 단백질을 인식 하는 항 체의 유도 측정 하는 분석 결과 수정할 수 있습니다 추측 하고있다. 그러나,이 방법론은 엄격 하 게 테스트 되지.

유도의 항 체 .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
A549 셀	ATCC	CCL-185	선암성 인간 폐포 기저 상피 세포
HEK 293T 세포	ATCC	CRL-3216	인간 배아 신장 세포
Lipofectamine 2000	Life Technologies	11668019	Transfection 시약
1X Opti-MEM Reduced Serum Medium	ThermoFisher Scientific	51985-034
백색 조직 배양 처리된 96-웰 플레이트	Corning, Inc.	3917	분석 플레이트
10X MEM	Gibco	11430-030
쥐를 발현하는 Jurkat 세포 FcgRIV	Promega	M1201	키트는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈청
Jurkat 세포를 제공합니다. 인간 FcgRIIIa	Promega	G7010	키트는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈청
을 제공합니다.인간 FcgRIIa	Promega	G9901	에는 세포, Bio-Glo Luciferase 분석 시스템, 1X RPMI 및 저 IgG 혈
광도계	BioTek	Synergy H1 다중 모드 리더	발광 플레이트 리더
Bio-Glo Luciferase 분석 시스템	Promega	G7940	luciferase 분석 버퍼와 luciferase 분석 기질
Madin Darby 송곳니 세포	.ATCC	CCL-34	개 신장 세포