치료 조직 (TXL) 근 시에 대 한 교차 연결의 평가 위한 도구로 토끼 Sclera에 제 2 고조파 발생 신호

요약

이 프로토콜의 둘째로 고조파 생성 이미징 및 차동 주사를 사용 하 여 토끼 sclera cross-linking 화학 평가 기법을 설명 합니다.

초록

치료에 대 한 구조 단백질 (원 collagens)로 화학 채권 (비 효소 cross-linking)을 도입 하 여 조직을 강화 하는 방법 등 광화학 cross-linking 조직 cross-linking (TXL) 방법. 유도 하는 기계적 조직 속성 변경에 대 한 이러한 메서드는 고용 되 고 각 막에 원추 각 막으로 진보적인 근 시에서 sclera (기계적으로 약화) 각 막 숱이 장애에 숱이 고 뒷부분의 약화 공 막과 가능성이 축 신장에 기여 한다. 이러한 조직 강화에 대 한 기본 대상 단백질은 원 collagens 각 막과 공 막에 건조 중량 단백질의 대다수를 구성 하는. 우연히, 원 collagens 조직 세포 외 공간에서 제 2 고조파 발생 신호의 주요 원천입니다. 따라서, 콜라겐 단백질 요법, cross-linking를 통해 유도 등의 수정 수 잠재적으로 감지 되며 두 번째 고조파 세대 현미경 (SHGM) 통해 quantitated. 레이저 적외선 여기 가벼운 현미경 시스템을 스캔을 사용 하 여 신호 모니터링 SHGM 소스는 즐기고 생명 과학 분야에서 광범위 하 게 사용 하는 흥미로운 현대 이미징 방법입니다. 따라서, 현재 연구 에이전트 하위-장부의 공간 (sT), cross-linking 화학 물질의 주입에 따라 토끼 sclera, ex vivo에서 에서 가교 효과 유도 하는 측정 하는 수단으로 SHGM 현미경 검사 법의 사용을 평가 하기 위하여 착수 했다는 사출 접근 즉 안구 마 취 안과 임상 절차 동안에 원인에 대 한 표준 연습. 에이전트 cross-linking 화학 나트륨 hydroxymethylglycinate (서울시), 에이전트 (FARs)를 방출 하는 포름알데히드로 알려진 화장품 방부 제의 클래스입니다. SMG와 반응에 따라 scleral 변경 SHG 신호 증가 귀착되 고 열 변성 온도에 변화를 서로 평가 하는 표준 방법을 유도 효과 cross-linking 조직.

서론

으로 콜라겐 효소 cross-linking 차단 실험 양식 부족 (FD)을 증가 시킬 수 있습니다 (광화학 또는 화학), 비 효소 scleral cross-linking를 통해 치료할 수에 진보적인 근 시 가정은-유도 근¹. Elsheikh 및 필립스² 최근 타당성과 표준 A 자외선 방사선 (UVA)를 사용 하 여의 가능성 논의-리 보 플 라빈 광화학 cross-linking (드레스덴 프로토콜 라고도 함), 약식 중재 (리 보 플 라빈 CXL) 여기 근 시 축 신장 중단 후부 scleral 안정화. 이 광화학 방법 keratoconus와 포스트 LASIK keratectasia에서 본 앞쪽 글로브 표면 (즉, 불 룩 한 각 막)의 불안을 치료에 성공적으로 사용 되었습니다. 그러나,의 공 막이 CXL 프로토콜 응용 프로그램 액세스는 자외선 (UV) 광원, 뿐만 아니라 훨씬 더 조직 표면 영역을 수정 하려면 필요 후부 sclera에 어려움에 관련 된 문제에 의해 방해 된다. 비록 후부 sclera의 여러 지역 여러 별도 방사선 조사 영역 그 연구³에 필요한 토끼 (tarsorrhaphy)에 의해 박탈 그 말했다 되는, CXL 접근 사용 되었습니다 시각....

프로토콜

모든 절차는 그대로 outbred 토끼 머리에서 싱가포르로 토끼 눈을 사용 하 여 수행 되었다. 관리 및 실험 동물의 사용에 대 한 모든 기관 및 국가 지침 따라 했다.

1입니다. 솔루션의 준비

1. 서울시 의회에 대 한 준비:
   1. 나트륨 중 탄산염 솔루션 (NaHCO₃) 솔루션 NaHCO3 파우더는 증류수의 1 mL에 용 해의 0.0165 g를 사용 하 여 0.2 M 농도의 1 mL를 준비 합니다.
   2. 800 mM SMG의 최종 농도를 증류수의 1 mL에 가루 나트륨 hydroxymethylglycinate (서울시)의 0.1016 mg을 디졸브. 나트륨 중 탄산염 해결책 0.1 M NaHCO₃ 및 400 mM SMG의 최종 농도를 조정 합니다. 원하는 상호 효과 따라 서울시의 농도. 여기에 설명 된 프로토콜에서 우리 사용 40, 100, 400 mM 서울시.

2. subTenon의 주입 SMG를 사용 하 여 의회에 대 한

1. 400 µ L 제어와 SMG 솔루션 두 1 mL 인슐린 주사기 (바늘 25 G)를 각각 작성.
2. 쿠션의 도움으로 프로 파일 평....

결과

광장 cross-linking 효과 평가 하는 시험 방법으로 열 변성 온도 (Tm): 토끼 눈의 16 쌍의 총 의회 절차에 대 한이 실험에서 사용 되었다. 이 연구의 초기 부분으로 싱가포르로 토끼 머리에 세인트 공간 통해 SMG 상호 에이전트의 단일 주사에 의해 유도 된 가교 효과의 지역화 평가 했다. 실험의이 유형은 하나 이상의 위치에 주사 sclera의 원하는 영역을 안정화 하는 데 필요한 수 때문에 환자의 임상 치료에 관련이 있다.

것입니다 기본적인 확산 원리에 따라 예측할 수, 효과가 했다 큰 주사의 사이트에서 솔루션의 농도 따라 인접 한 지역 뿐만 아니라, 유도 하는 효과 함께. 그림 1A scleral 분야 (빨간색 빈 번호 글꼴에서 1-4) (더 사각형 (1-16 검은.......

토론

실시 실험 콜라겐 cross-linking sclera, cross-linking 치료에 대 한 모니터링 도구로이 기법을 사용 하 여 미래의 가능성 제기에 효과의 평가 위한 방법으로 SHG 신호 현미경의 사용을 지 원하는 증거를 나타났습니다. 그는 콜라겐 단백질을 대상. 메모의 악기는 이미 잠재적으로이 SHG 신호를 캡처할 수 있는 임상 사용 중에서입니다. 이 악기는 주로 이미징 피부 인간의 피에 대 한 설계, 이미지 각 막과 공 막²³성공적으로 사용 되어 있다.

동일한 검색 및 제어를 비교할 때 조건 이미지를 유지 하기 위해 필요한 샘플을 처리 하 고. 2 고조파 세대 sclera 조직에 콜라겐의 현미경 필요 호환 다 광자 영상, 형광 현미경 펄스 적외선 레이저는 GaAsP 등 매우 민감한 검출기에 800-900 nm 파장 범위 조정 비 descanned (NDD) 감지기입니다. 이 원고에 설명 된 지침에는 시작 지점입니다. 조건 또는.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
MILLI-Q SYNTHESIS A10 120V	EMD Millipore, Massachusetts, USA		이중 증류수, 탈이온수. - 프로토콜 단계 1.1.1
나트륨 하이드록시메틸글리시네이트	Tyger Chemicals Scientific, Inc. Ewing, NJ, USA		가교 시약 - 프로토콜 단계 1.1.2
루어락 주사기가 있는 주사 바늘	BD Eclipse, NJ, USA		서브 테논 주사기용 주사기. - 프로토콜 단계 2.1
토끼 머리	La Granja 가금류	Outbred	토끼 머리는 사후 1시간 이내에 분리되어 전달됩니다. - 프로토콜 단계 2.2
Tono-pen	Reichter Technologies Depew, NY		IOP 측정 - 프로토콜 단계 2.4
DSC 6000 자동 샘플러	Perkin-Elmer Waltham, MA, USA		열 변성 분석기 - 프로토콜 단계 7.4
Pyris 소프트웨어	Perkin-Elmer, Waltham, MA, USA	버전 11.0	프로토콜 단계 7.5
CFI75 Apochromat LWD 25X/1.10 W MP	Nikon Instruments, Melville, NY, USA		거리가 2.0mm인 높은 IR 투과율을 가진 침수 대물렌즈 - 프로토콜 단계 8.1.1.
겐틸	알콘, 포트워스, 텍사스	B000URVDQ8	증발을 방지하기 위해 물 대신 객관적인 침수 매체로 사용되는 수성 젤 - 8.1.1
Chameleon Vision II	Coherent, Santa Clara, CA, USA		Ti:80MHz에서 140fs 펄스 폭과 680nm에서 1080nm까지 조정 가능한 범위를 가진 사파이어 펄스 레이저. - 프로토콜 단계 8.1.11
AttoFluor cell chamber	Thermo Fisher Scientific Inc	A7816	커버 슬립 고정 - 프로토콜 단계 8.1.3
25mm 원형 커버 슬립, #1.5	Neuvitro Corporation, Vancouver, WA, 미국	GG-25-1.5	프로토콜 단계 8.1.3
Eclipse Ti-E	Nikon Instruments, Melville, NY, USA		프로토콜 단계 8.1.4.
Non-descanned (NDD) GaAsP 검출기	Nikon Instruments, Melville, NY, USA		400-450 nm 대역 통과 필터 장착 - 프로토콜 단계 8.1.7
A1R-MP 레이저 스캐닝 시스템	Nikon Instruments, Melville, NY, USA		적외선(IR) 다광자 여기와 호환됩니다. - 프로토콜 단계 8.1.8
NIS Elements software	Nikon Instruments, Melville, NY, USA	Ver 4.3	본문에서 "소프트웨어"로 언급됨 - 프로토콜 단계 8.1.9
Fiji/ImageJ	National Institute of Health		프로토콜 단계 9.1.2
NeuronJ	Eric Meijering, Erasmus University Medical Center, Rotterdam, The Netherlands		https://imagescience.org/meijering/software/neuronj/, 프로토콜 단계 9.2.2
Microsoft Excel	Microsoft Corporation, Redmond, WA, USA	Ver 14	프로토콜 단계 9.2.8

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