أرتيرياليزيد إعادة "زرع الكبد الجزئي الفئران" مع في فيفو المنحى السفينة 70% ظهرت
Summary
ويرد هنا، بروتوكول التي تنطوي على الفئران أرتيرياليزيد إعادة زرع الكبد الجزئي. على وجه التحديد، كان الكبد 70% مستأصل في فيفو باستخدام أسلوب تحديث لظهرت السفينة المنحى. الشريان الكبدي الذي أعيد بطريقة نهاية-إلى-جانب. تعديل أسلوب الكفة لتقصير وقت ملامسة الأجوف فينا إينفراهيباتيك.
Abstract
تم وضع تقسيم زرع الكبد وزرع الكبد الكبد المانحين الذين يعيشون في العيادة استخدام أجهزة الكبد بطريقة أكثر كفاءة. أنشئ نموذج فأر زرع كبد جزئي (بلتكس) لفهم أفضل لهذه الآلية وراء هذه الإجراءات الجراحية، دراسات الجراحية ذات الصلة. بسبب تعقيد الطراز بلتكس الفئران، مطلوب بروتوكولا مع أوصاف مفصلة. وأفادت مقال نشر سابقا بروتوكول الذي كان يستخدم السابقين فيفو ظهرت لتحقيق 50% الفئران بلتكس. وعلى النقيض من هذا البروتوكول، قدمنا بلتكس إعادة أرتيرياليزيد مع ظهرت 70% في فيفو . تحديث ظهرت السفينة المنحى أدمج في الفئران بلتكس صقل هذا الإجراء ميكروسورجيكال. بوابة الأوردة والشرايين الكبدية الفص الجانبي الأيسر والفص المتوسط تم تشريح منفردة ومتصلة قبل إزالة لحمه الكبد، مما يقلل من احتمال النزيف في عقب السيجارة بقايا الكبد. وعلاوة على ذلك، بدأ ملامسة نهاية إلى جانب سفينة بين الشريان الكبدي شيوعاً والشريان الكبدي السليم الموسع إعادة أرتيرياليزي الشريان الكبدي. باستخدام هذا الأسلوب ملامسة نهاية إلى جانب السفينة، وتم توسيع قطر ملامسة، وبالتالي تقليل صعوبة خياطة اليد والحفاظ على معدل مرتفع من سالكيه أناستوموتيك. وعلاوة على ذلك، تعديل طفيف ملامسة الكفة من الأجوف فينا إينفراهيباتيك. وقد حافظت قسم من حمة الكبد كفافى حولها الوريد الأجوف مستلم أثناء ملامسة الكفة للحفاظ على الشكل ثلاثي الأبعاد التجويف الأوعية الدموية. تمت إزالة هذا المقطع للحمة الكبد بعد الانتهاء ملامسة. مع هذا التعديل، أسقطت بالخطوة التي تنطوي على وضع خيوط البقاء، وبالتالي تقصير الوقت ملامسة الكفة. باستخدام هذا البروتوكول للفئران بلتكس، تحققت على مستوى منخفض من إنزيم كبد وبنية مفصص كبد سليمة ومعدل بقاء عالية بعد الجراحة.
Introduction
وهناك حاليا تفاوت كبير بين عدد الأجهزة الكبد المتبرع بها وعدد المرضى الذين ينتظرون كبد المتبرع بها. النقص في أجهزة الكبد مشكلة عالمية. لتوسيع قاعدة المانحين، وتقسيم زرع الكبد (LTx) والمانحين الذين يعيشون LTx وضعت لاستخدام كبد جزئي ك الاختلاس1.
لمواصلة التحقيق الآلية وراء زرع الكبد الجزئي (بلتكس)، كانت نماذج حيوانية ذات الصلة المنشأة2،3،،من45. في الفئران بلتكس، هي الفصوص الكبد مستأصل في فيفو و السابقين فيفو تحاكي ظروف المعيشة المانحة LTx وتقسيم LTx، على التوالي، في الإنسان. قدمت ورقة نشرت في مجلة تجارب تصور بروتوكول مفصلة التي تنطوي على الفئران 50% بلتكس استخدام السابقين فيفو ظهرت5. ومع ذلك، فأر بلتكس مع ظهرت في فيفو لا بعد أبلغ في الأدب تصور.
بالإضافة إلى الفرق بين هيباتيكتوميس في فيفو و السابقين فيفو ، أسلوب أداء ظهرت نفسها تلعب أيضا دوراً هاما في تحديد نتائج بلتكس. حاليا، في العديد من دراسات العمليات الجراحية باستخدام الفئران تل النموذجي، والكبد كانت مستأصل الفصوص بعد وضع ربط بسيط في بيديكلي للكبد الفص2،3،6،7،،من89. ومع ذلك، وضع ربط بسيط قبل بتر ليست مناسبة لجميع الفصوص الكبد، الفصوص الكبد مختلفة قد أشكال وأحجام مختلفة. ربط بسيط في القاعدة من الفص المتوسط ينطوي على مخاطر عالية تسبب انقباض من الأجوف فينا، مما قد يؤثر في نهاية المطاف على تدفق10،الفساد الكبد الجزئي11. ولذلك، مطلوب أسلوب ظهرت تحديث استناداً إلى المعرفة بتشريح الكبد في الفئران في ميدان فأر تل.
في البروتوكول، المذكورة في هذه الدراسة، أدمج المنحى السفينة ظهرت 70% حدثت في إجراء الفئران بلتكس. بوابة الأوردة والشرايين الكبدية الفص الجانبي الأيسر (التعلم مدى الحياة) والفص المتوسط (ML) تم تشريح وتقسيم على حدة قبل إزالة لحمه الكبد. ثم، كانت متصلة الأوردة الكبدية للتعلم مدى الحياة ومل بثقب خياطة الجروح. باستخدام ليجيشنز الفردية وخيوط خارقة متعددة بدلاً من وضع ربط بسيط، تمكن السيجارة بقايا مل منتشرة الوريد الأجوف. ومن ثم، تم تفادي انقباض الأجوف فينا إينفراهيباتيك تسببها ربط العمليات جراحية. بالإضافة إلى ذلك، انسداد إمدادات الدم للتعلم مدى الحياة، ومل من ليجاتيونس الفردية قبل إزالة لحمه الكبد انخفض معدل النزيف في عقب السيجارة بقايا الكبد، وبالتالي تقليل تأثير فقدان الدم على تجارب11.
ميكروسورجيونس، يشكل تحديا كبيرا لإعادة بناء الشريان الكبدي السليم (فا) من طعم الكبد بسبب قطر صغير للغاية من هذه السفينة. على الرغم من أن مسألة ما إذا كانت إعادة أرتيرياليزاتيون في LTx ضروري حقاً لا يزال قيد المناقشة12،،من1314، كان العديد من التقنيات ميكروسورجيكال لإعادة بناء الشريان الكبدي المقترحة14 . وهنا، نقدم تقنية جديدة لإعادة أرتيرياليزيشن للابتزاز الكبد، الذي أناستوموسيس الشريان الكبدي الشائعة (تشأ) فا الموسع بطريقة نهاية-إلى-من جانب. باستخدام هذا الأسلوب في النهاية إلى جانب، اثنين من الشرايين الكبدية مرتبطة ملامسة قطرها أكبر. قطر ملامسة أكبر وخياطة اليد أسهل من القيام بأكبر يصبح التحسن الذي طرأ السالكيه لملامسة.
Protocol
Representative Results
Discussion
بلتكس الجرذ هو إجراء microsurgical متطورة مع برنامج تدريب الذي ارتفاع في التكلفة وطويل في مدة20. تعقد الفئران بروتوكول بلتكس منعت الباحثين من استخدام هذا النموذج الحيواني. بالمقارنة مع الحجم الكامل الفئران LTx، يعرض الفئران بلتكس ميكروسورجيون ليس فقط مع التحدي المتمثل في إجراء الزرع…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
هذا البحث ودعم مؤسسة العلوم الطبيعية الصينية الوطنية (المنحة رقم 81501382) وتشجيانغ المقاطعة العلوم الطبيعية مؤسسة من الصين (رقم المنحة LQ13H100003 و LQ16H100002).
Materials
| Surgical microscope | Möller-Wedel, Germany | 654359 | |
| Light source | OSRAM (China) Lighting Co., Ltd | 64627 | |
| Isoflurane Vaporizer | MIDMARK Corporation | VIP3000 | |
| Isoflurane | Baxter Healthcare Corporation | 40032609 | For Inhalation anesthesia |
| Normal Saline | Zhejiang Tianrui Pharmaceutical Co., Ltd. | 716092103 | |
| Povidone Iodine Solution | HANGZHOU MINSHENG PHARMACEUTICAL | H33021567 | For disinfection |
| Hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J31020 | |
| Surgical scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | JC2116 | |
| Needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J32030 | |
| Dressing Forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | J42020 | |
| Mosquito hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40340 | For liver resection; For retracting the stay sutures. |
| Micro-scissors | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA1040 | |
| Micro needle-holder | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA2060 | |
| Curved micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3061 | |
| straight micro typing forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3060 | |
| Micro hemostatic forceps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | WA3020 | |
| Bulldog clamp | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | XEC350 | |
| Vessel clamps | Shanghai Medical Instruments(Group) Ltd | W40160 | |
| Micro Serrefine-curved | Fine Science Tools, Inc | 18055-05 | |
| Dacryosyrinx | Shi Zhuo medical instruments Co., Ltd. | 5# curve | Use as the curved needle for forcing out the air bubbles in the vascular lumen |
| Sterilized gauze swabs | Fuqing Health & Integral Medical | 20230R | |
| 5mL syringe | Zhejiang Yusheng Medical Instrument Co.,Ltd | 811932416 | |
| 18G needles | Shanghai Kindly Enterprise Development Group Co., Ltd | 01-014 | For fixing the upper abdomen wall |
| Intima II 22G intraveous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 383207y | For making biliary stent; For infusing perfusate |
| 7-0 polypropylene sutures | Ningbo Medical Needle Co., Ltd | 151026 | For SHVC anastomsis |
| 6-0 silk suture | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | 2650182 | For ligation |
| Culture dish (100mm) | Corning Incorporated | 430165 | used in back table for storage ice. The back table dish was placed on it. |
| Culture dish (30 mm) | Corning Incorporated | 3296 | As a vessel for organ preservation |
| Angiocath 12G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382277 | For making a IHVC cuff |
| Angiocath 14G intravenous catheter | Becton Dickinson Medical Devices (Shanghai) Co Ltd. | 382269 | For making a PV cuff |
| Buprenorphine (hydrochloride) | Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Pharmaceutical Co., Ltd | H12020275 | For analgesic |
| Cefuroxime sodium for injection | Esseti FarmaceuticiS.r.l | H20160013 | As an antibiotics |
References
- Yan, J. Q., Becker, T., Peng, C. H., Li, H. W., Klempnauer, J. Split liver transplantation: a reliable approach to expand donor pool. Hepatobiliary Pancreat Dis Int. 4, 339-344 (2005).
- Xia, R., Emond, J. C. Orthotopic partial liver transplantation in the rat: a model of 70% hepatectomy and reduced size liver transplantation. Transplantation. 56, 1041-1043 (1993).
- Omura, T., Ascher, N. L., Emond, J. C. Fifty-percent partial liver transplantation in the rat. Transplantation. 62, 292-293 (1996).
- Foss, A., et al. Function of reduced-size liver transplant in the rat. Res Exp Med (Berl). 197, 91-99 (1997).
- Nagai, K., Yagi, S., Uemoto, S., Tolba, R. H. Surgical procedures for a rat model of partial orthotopic liver transplantation with hepatic arterial reconstruction. J Vis Exp. , e4376 (2013).
- Sun, J., Qin, G., Wu, L., Wang, C., Sheil, A. G. Antigenic load and peripheral chimeric levels in entire and partial liver allograft recipients. Microsurgery. 21, 183-187 (2001).
- Ninomiya, M., et al. Deceleration of regenerative response improves the outcome of rat with massive hepatectomy. Am J Transplant. 10, 1580-1587 (2010).
- Yamanaka, K., et al. Effect of olprinone on liver microstructure in rat partial liver transplantation. J Surg Res. 183, 391-396 (2013).
- Wang, W., et al. Mesenchymal stem cells promote liver regeneration and prolong survival in small-for-size liver grafts: involvement of C-Jun N-terminal kinase, cyclin D1, and NF-kappaB. PLoS One. 9, e112532 (2014).
- Madrahimov, N., Dirsch, O., Broelsch, C., Dahmen, U. Marginal hepatectomy in the rat: from anatomy to surgery. Ann. Surg. 244, 89-98 (2006).
- Martins, P. N., Theruvath, T. P., Neuhaus, P. Rodent models of partial hepatectomies. Liver Int. 28, 3-11 (2008).
- Kamada, N., Sumimoto, R., Kaneda, K. The value of hepatic artery reconstruction as a technique in rat liver transplantation. Surgery. 111, 195-200 (1992).
- Steger, U., Sawitzki, B., Gassel, A. M., Gassel, H. J., Wood, K. J. Impact of hepatic rearterialization on reperfusion injury and outcome after mouse liver transplantation. Transplantation. 76, 327-332 (2003).
- Huang, H., et al. A novel end-to-side anastomosis technique for hepatic rearterialization in rat orthotopic liver transplantation to accommodate size mismatches between vessels. Eur Surg Res. 47, 53-62 (2011).
- Bernal, J., et al. Guidelines for rodent survival surgery. J.Invest Surg. 22, 445-451 (2009).
- Johnson, A. J., Stulting, R. D., Macsai, M. S. . Ophthalmic Microsurgical Suturing Techniques. , 21-28 (2007).
- Delriviere, L., et al. Detailed modified technique for safer harvesting and preparation of liver graft in the rat. Microsurgery. 17, 690-696 (1996).
- Oldani, G., Lacotte, S., Morel, P., Mentha, G., Toso, C. Orthotopic liver transplantation in rats. J Vis Exp. , (2012).
- Delriviere, L., et al. Technical details for safer venous and biliary anastomoses for liver transplantation in the rat. Microsurgery. 18, 12-18 (1998).
- Jin, H., et al. Preliminary experience of a PDCA-cycle and quality management based training curriculum for rat liver transplantation. J Surg Res. 176, 409-422 (2012).
- Selzner, N., Selzner, M., Tian, Y., Kadry, Z., Clavien, P. A. Cold ischemia decreases liver regeneration after partial liver transplantation in the rat: A TNF-alpha/IL-6-dependent mechanism. Hepatology. 36, 812-818 (2002).
- Tanaka, H., Hashizume, K., Enosawa, S., Suzuki, S. Successful transplantation of a 20% partial liver graft in rats: a technical innovation. J Surg Res. 110, 409-412 (2003).
- Bockhorn, M., et al. Erythropoietin treatment improves liver regeneration and survival in rat models of extended liver resection and living donor liver transplantation. Transplantation. 86, 1578-1585 (2008).
- Martins, P. N., Neuhaus, P. Surgical anatomy of the liver, hepatic vasculature and bile ducts in the rat. Liver Int. 27, 384-392 (2007).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28, 47-50 (1979).
- Kashfi, A., et al. A review of various techniques of orthotopic liver transplantation in the rat. Transplant.Proc. 37, 185-188 (2005).
- Wain, R. A. J., Hammond, D., McPhillips, M., Whitty, J. P. M., Ahmed, W., Ahmed, W., Jackson, M. J. . Surgical Tools and Medical Devices. , 545-562 (2016).
- Huang, H., et al. Hepatic arterial perfusion is essential for the spontaneous recovery from focal hepatic venous outflow obstruction in rats. Am J Transplant. 11, 2342-2352 (2011).
- Czigany, Z., et al. Improving Research Practice in Rat Orthotopic and Partial Orthotopic Liver Transplantation: A Review, Recommendation, and Publication Guide. Eur Surg Res. 55, 119-138 (2015).
