세포 외 기질 식 및 선 형태 분석을 그대로, 전체 마우스 유 방 땀 샘의 절연

Christopher Thompson; Katherine Keck; Abigail Hielscher

doi:10.3791/56512

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방법 논문

세포 외 기질 식 및 선 형태 분석을 그대로, 전체 마우스 유 방 땀 샘의 절연

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DOI:

10.3791/56512

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2017년 10월 30일

Christopher Thompson¹ , Katherine Keck² , Abigail Hielscher²

¹Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of Nebraska Medical Center, ²Department of Biomedical Sciences, GA-PCOM

이 논문에서

요약

여기, 우리는 전체, 그대로 마우스의 격리에 대 한 프로토콜 세포 외 기질 (ECM) 식과 ductal 형태를 조사 하는 유 방 땀 샘을 제시. 마우스 #4 복 부 동맥은 8 10 주 오래 된 여성 미 쥐, 중립 버퍼링 된 포 르 말린에 고정, 단면화 및 immunohistochemistry ECM 단백질에 대 한 사용 하 여 스테인드에서 추출 되었다.

초록

이 절차의 목표는 ECM 표현과 ductal 아키텍처 평가 #4 복 유 방 동맥 여성 미 쥐에서 수확 했다. 여기, 피부 아래 작은 주머니 메이 요가 위, 수 있도록 기본 복 막에서 피하 조직 내 분 비의 분리를 사용 하 여 만들었습니다. 땀 샘의 시각화 3.5의 사용에 의해 주 었 했다 x-R 수술 마이크로 loupes. 펠트 반전 했다 그리고 고정 다시 그대로 유 방 지방 패드의 허용 식별. #4 복 부 동맥의 각각 퉁 명 스럽게 옆으로 피하 층과 동맥 사이 메스 블레이드를 슬라이딩 하 여 해 부 했다. 수확 후 즉시 분 비 10% 중립 버퍼링 된 포 르 말린 후속 조직 처리에 배치 했다. 전체 체의 절단은 주로 제외 ductal 상피 세포 및 다른 microenvironmental 세포 인구 부분 생 검에 놓친 수 간의 중요 한 조직 차원의 상호 작용의 위험을 제거 하기 때문에 유리 하다. 방법론의 1 결점은 동맥 내의 개별 위치로 ductal morphogenesis 고 단백질 식의 분석을 제한 하는 고정된 조직에서 직렬 섹션의 사용. 이와 같이, 3 차원 (3D) ductal 건축과 단백질 식에 변경 쉽게 얻을 수 아니다. 전반적으로, 기술 발달 ductal morphogenesis 또는 유 방 암 등 하류 조사에 대 한 전체 그대로 murine 유 방 땀 샘을 요구 하는 연구에 적용 됩니다.

서론

유방암 조직 섬유 증¹^,²^,^,³⁴의 상당한 정도 의해 특징입니다. ECM,이 아닌 휴대 엔터티 모든 조직에서 다양 한 각도에서 발견 하며 주로 원 및 원 비 collagens, 엘라 스 틴, 그리고 다양 한 신호 분자는 뿐만 아니라 glycoproteins의 복잡 한 채널의 구성 이 매트릭스에서 격리. 항상성 조건에서 증 착 및 ECM의 긴밀 하 게 제어 됩니다. ⁵ 유 방 tumorigenesis, 동안 ECM 증 착 및 저하의 균형은 중단 됩니다. 이와 같이, 유 방 종양 collagens, fibronectin 다른 tenascin C 등 풍부한 ECM 단백질 표현 하 보고 되었습니다. ⁶ 매트릭스 가교의 증가 패턴 뿐만 아니라이 단백질의 비정상적인 식 유 방 종양 진행, 전이 및 치료 저항¹^,³^, 를 홍보 하기 위해 문서화 되었습니다