飽和脂肪酸は、セラミド関連マクロファージの細胞死を誘導します。
Summary
骨髄細胞からマウスのプライマリ マクロファージを派生させるストレートなメソッドを示すし、BSA 脂肪酸を準備する簡単な方法が抱合体します。示す飽和脂肪酸がマクロファージの細胞死を引き起こすことができる、このような細胞死はセラミド レベルの細胞集積に積極的に関連付けられました。
Abstract
マクロファージは高い表皮の脂肪酸結合蛋白質と脂肪の脂肪酸結合蛋白質を表現します。彼ら積極的に吸収飽和と不飽和脂肪酸、免疫機能の調節に重要な役割を担う。様々 な脂肪酸が飽和している数多くの研究が示しているなったり不飽和、細胞の成長と機能に関する別の影響を持っています。しかし、脂肪酸の準備に使用する方法が異なります、非生理学的な結果につながる可能性があります。脂肪酸石鹸の毒性を最小限に抑える哺乳類細胞における脂肪酸関数を勉強する共役脂肪酸のナトリウム塩との複合体を形成するため、血清アルブミン、哺乳類の末梢血液中の脂肪酸のための自然なキャリアをお勧めします。したがって、単純な比較的短時間加熱・ sonicating メソッドの開発・ BSA 脂肪酸の酸の共役形成はここで説明しました。飽和脂肪酸、特にステアリン酸マウス骨髄由来マクロファージにおける深刻な細胞死を誘導するためを使用してプロトコルについて述べる。さらに飽和脂肪酸が誘導する細胞死が積極的に蓄積された細胞のセラミド レベルに関連付けられていることを示します。このメソッドは、他の哺乳類細胞の脂肪酸の影響の研究を拡張できます。
Introduction
脂肪酸は、異なる種類の細胞膜リン脂質の合成、エネルギー代謝に重要な役割を果たします。脂肪酸には、低水溶解度があります。脂肪酸の適切な準備は、哺乳類細胞における脂肪酸の生物学的機能を研究するため非常に重要です。脂肪酸はエタノールを使用して、多くの脂肪酸が比較的低濃度1でも細胞膜への有毒な石鹸 (洗剤) 影響が表示されます。血清中遊離脂肪酸の自然、主要なトランスポーター、血清アルブミンは脂肪酸配信体外用脂肪酸機能試金2,3,4良いキャリアが考慮されます。しかし、脂肪酸組成と血清アルブミンの共役の準備の詳細通常ご利用いただけませんにもかかわらず、脂肪酸を使用して多くの研究論文が公開されています。
マクロファージには、表皮の脂肪酸結合蛋白質と脂肪脂肪酸結合タンパク質5,6,7,8高い表現します。彼ら積極的に吸収飽和と不飽和脂肪酸、免疫機能を調節する可能性があります。マクロファージや他の細胞に脂肪酸の影響を研究するには、脂肪酸の準備のさまざまな方法は応用1,7,9.生物学的意味のあるデータを得ることは非常に重要です適切に準備された脂肪酸/血清アルブミン複合体を使用して、マクロファージに脂肪酸の影響を調査します。マクロファージに脂肪酸の影響に関する研究は、基本的な知識とマクロファージが関与する疾患における脂肪酸代謝に関する潜在的な治療上のターゲットを提供できます。
Protocol
Representative Results
Discussion
脂肪酸ソリューションの適切な準備は、脂肪酸の生物学的機能を研究する非常に重要です。脂肪酸の中和は、水溶液中での溶解性を増加します。ただし、特に飽和脂肪酸、脂肪酸のナトリウム塩は、水または PBS に難溶のまだ見ました。1 つの方法は、脂肪酸1を溶解するために 95-100% エタノールを使用することです。このメソッドを使用して、高い細胞毒性毒性が低く不飽?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品はルイビル大学スタートアップ資金によって部分的に支えられた、国立癌研究所 (メリーランド州ベセスダ) は、R01CA177679、R01CA180986 を許可します。
Materials
| CPX Ultrasonic Bath | Bransonic | Model 2800 | |
| Sodium palmitate (PA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1109 | M.W. 278 |
| Sodium stearate (SA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1111 | M.W. 306 |
| Bovine serum albumin (BSA), fatty acid-free | Fisher Scientific | 9048-46-8 | |
| Mouse macrophage colony stimulating factor (mM-CSF) | Cell Signaling Technology, Inc. | 5228 | |
| RPMI 1640 | VWR International | 71002-878 | |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 conjugate | Fisher Scientific | A13201 | |
| 7-AAD | BD Biosciences | 559925 | |
| Monoclonal anti-ceramide antibody (mouse IgM) | Sigma | C8104-50TST | Clone: MID 15B4 |
| Goat Anti-Mouse IgM Antibody, µ chain, FITC conjugate | Sigma | AP128F | |
| Fixation buffer | Biolegend | 420801 | |
| Permeabilization buffer | Ebioscience | 4307693 | |
| Red Blood Cell Lysis Buffer | Sigma | 11814389001 | |
| Annexin V Binding Buffer | BD Biosciences | 556454 | |
| L929 cells | ATCC | CCL-1 | |
| Corning Cell Lifter | Fisher Scientific | 07-200-364 | |
| Note: M.W. is for molecular weight. |
References
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