В этом исследовании мы описываем задняя полукружных канала подход как надежный метод доставки генов внутреннего уха у новорожденных мышей. Мы показывают, что ген доставки через задний полукружных канала возможность perfuse всего внутреннего уха.
Abstract
Внутреннее ухо генной терапии предлагает большие перспективы для потенциального лечения потеря слуха и головокружение. Одним из решающих факторов успеха внутреннего уха генной терапии является найти метод доставки, который приводит к постоянной трансдукции эффективности типов целевых клеток при сведении к минимуму потери слуха. В этом исследовании мы описываем задняя полукружных канала подход как действенного метода доставки генов внутреннего уха у новорожденных мышей. Мы показывают, что ген доставки через задний полукружных канала возможность perfuse всего внутреннего уха. Легко анатомические идентификации задняя полукружных канала, а также минимальная манипуляция височной кости требуется, сделать это хирургический подход привлекательным вариантом для доставки генов внутреннего уха.
Introduction
Внутреннее ухо генная терапия является быстро развивающейся области расследования. Она применялась в различных моделях животных к борьбе с ототоксичность, шум травмы и наследственный слуха потери1. Несколько недавних исследований показали функциональное восстановление слуха и равновесия функций мутантных мышей после внутреннего уха генной терапии доставки2,3,4,5,6,7. одним из ключевых факторов в определении успеха внутреннего уха генной терапии является хирургический метод, используемый для доступа к внутреннему уху. Идеально хирургический подход будет легко выполнять, анатомические ориентиры будут последовательно и легко идентифицировать, и результирующая трансдукции типов целевых клеток будет высоким.
В недавнем исследовании мы показали, что при вирусных генной терапии было впрыснуто через задний полукружных канала черная мутант мыши (модель потери слуха и вестибулярной дисфункции), эффективный трансдукции Сензорные клетки волос был замечен в вестибулярного органы, а также как и улитки5. Высокая эффективность сенсорные клетки волос трансдукции привело к улучшению слуховые и вестибулярные функции в этих мутантных мышей.
В этой статье мы подробно описать подход задняя полукружных канала для доступа к неонатальной мыши внутреннего уха.
Protocol
Все животные процедуры были утверждены животное уход и использование Комитета при Национальном институте по глухота и других расстройств коммуникации (NIDCD ASP1378-15). 1. Процедура установки и подготовки Простерилизуйте все инструменты, окись этилена в начале экспериме…
Representative Results
Инъекции AAV8-whirlin генной терапии в неонатальной черная мышей через задний полукружных канала привело к whirlin выражение (зеленый) в утрикулярной волосковых клеток (рис. 2), с общей эффективности инфекции 53,1% (SD 38.1, n = 28)5 . Transduced клетки волос удлине…
Discussion
Для доступа к грызунов внутренний уши были описаны несколько хирургических вмешательств. Cochleostomy и круглое окно подходов наиболее часто используются для доступа к улитки, тогда как задняя полукружных канала и endolymphatic мешок подходы обычно используются для доступа к вестибулярных орган?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана средств из NIDCD Отдела по очной исследования /NIH (DC000082-02 W.W.C.), а также DC000081 в передовых тепловизионных ядро. Мы благодарны за NIDCD животных фонда персонала для заботить для наших животных.
Materials
Operating microscope
Zeiss
OPMI Pico ENT microscope. Other dissection microscopes would also work.
Isgrig, K., Chien, W. W. Posterior Semicircular Canal Approach for Inner Ear Gene Delivery in Neonatal Mouse. J. Vis. Exp. (133), e56648, doi:10.3791/56648 (2018).