CRISPR/Cas9를 사용 하 여 유전자 돌연변이 Calreticulin Cytokine 종속 조 혈 모 세포에서의 종양 활동을 조사 하기 위해 편집

Nouran S. Abdelfattah; Ann Mullally

doi:10.3791/56726

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방법 논문

CRISPR/Cas9를 사용 하 여 유전자 돌연변이 Calreticulin Cytokine 종속 조 혈 모 세포에서의 종양 활동을 조사 하기 위해 편집

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DOI:

10.3791/56726

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2018년 1월 5일

Nouran S. Abdelfattah¹ , Ann Mullally¹^,²^,³

¹Division of Hematology, Department of Medicine, Brigham and Women's Hospital, Harvard Medical School, ²Broad Institute, ³Dana-Farber Cancer Institute, Harvard Medical School

이 논문에서

요약

타겟된 유전자 CRISPR/Cas9를 사용 하 여 편집 크게 유전자의 생물 학적 기능에 대 한 이해를 촉진 했다. 여기, 우리가 그들의 종양 활동을 공부 하기 위하여 모델 calreticulin 돌연변이 cytokine 종속 조 혈 모 세포에서에 CRISPR/Cas9 방법론을 활용 합니다.

초록

클러스터 된 정기적으로 interspaced 짧은 구조 반복 (CRISPR)는 CRISPR 관련 (Cas) 9 사이트별 진 핵 게놈에 대 한 같은 RNA 기반 nucleases 생성을 과학자 들에 의해 다른 용도로 원핵생물에서 적응 면역 시스템 편집. Cas9에 의해 게놈 엔지니어링 효율적으로 쉽고 튼튼하게 많은 biomedically 관련 된 포유류 세포와 유기 체에 내 생 유전자를 수정 하는 데 사용 됩니다. 여기 우리가 특정 유전자 변이의 생물 학적 기능을 이해 하는 CRISPR/Cas9 방법론을 활용 하는 방법의 예를 보여줍니다. 우리는 특정 지역에서 생 Calr 소재 시를 대상으로 한 가이드 RNAs (sgRNAs)의 전달에 의해 murine 인터 루 킨-3 (밀-3) 종속 프로 B (Ba/F3) 셀에 calreticulin (CALR) 돌연변이 모델 어디 삽입 또는 삭제 (indel ) CALR 돌연변이 myeloproliferative 신생 (MPN), 혈액 암의 일종을 가진 환자에서 발생. sgRNAs 비 동종 끝 결합 (NHEJ) 다양 한 크기의 indels를 주고 수리는 대상된 지역에 두 배 물가 틈 (DSBs)을 만듭니다. 우리 다음 조 혈 모 세포 변환에 Calr 돌연변이의 생리 적 수준 식이의 영향을 이해 하 표준 바/F3 세포 변환 분석 결과 사용 합니다. 이 방법은 다양 한 포유류 세포 라인에 그들의 생물학 기능을 공부 하기 다른 유전자에 적용할 수 있습니다.

서론

CRISPR/Cas9 기술 최근 살아있는 세포와 유기 체에서 편집 하는 타겟된 게놈 혁명 있다. 그것은 생물 의학 연구를 위한 매우 강력한 도구가 되고있다 고 현재¹유전자 질환 치료에 대 한 잠재적인 애비뉴로 널리 사용 되 고 있다. 모든 게놈 편집 도구에 대 한 기초 수정할 genomic 소재 시에 nuclease 유도 DNA 두 배 좌초 휴식 (DSB)의 생성에 의존 합니다. DSBs 비 동종 끝-결합 (NHEJ) 또는 상 동 감독 수리 (HDR)²^,³에 의해 수리 수 있습니다. Cas9 nuclease 엔지니어링 nucleases 아연 손가락 nucleases (ZFNs) 같은 다른 게놈에 녹음 방송 활성 제 같은 이펙터 nucleases (TALENs)의 장점은 RNA에 대 한 그것의 의존 대상 비교 원하는 DNA 시퀀스를 nuclease에 대 한 에 ZFNs 및 TALENs²^,³에 단백질 DNA 상호 작용.

Prokaryotic 세포⁴