JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
의학

Evaluering af stamceller behandlinger i en Bilateral Patellar senen skade Model i rotter

Published: March 30, 2018
doi:
10.3791/56810
, , , ,
1College of Veterinary Medicine,Western University of Health Sciences, 2Applied Medical, 3College of Veterinary Medicine,Iowa State University

Summary

Dette papir beskriver forberedelse og evaluering af navlestreng matrix-afledte mesenkymale stamceller spheroids med en bilateral patellar senen defekt model i en rotte. Denne model blev var forbundet med en acceptabel sygelighed og fundet til at opdage forskelle mellem ubehandlet og behandlede sener, og mellem de to behandlinger testet.

Abstract

Regenerativ medicin giver nye alternativer til forhold, der udfordrer traditionelle behandlinger. Prævalens og sygelighed af tendinopati på tværs af arter, har kombineret med de begrænsede helbredende egenskaber af dette væv, bedt om søgning efter cellulære terapier og fremdrives udviklingen af eksperimentelle modeller at studere deres effektivitet. Navlestrengen matrix-afledte mesenkymale stamceller (UCM-MSC) er tiltalende kandidater, fordi de er rigelige, nem at samle, omgå de etiske bekymringer og risikoen for teratom dannelse, men ligner primitive embryonale stamceller tættere end voksen væv-afledte MSCs. betydende interesse har fokuseret på chitosan som en strategi til at forbedre egenskaberne af MSCs gennem klumpformet dannelse. Dette papir detaljer teknikker til at isolere UCM-MSC’er, forberede spheroids på chitosan film, og analysere effekten af klumpformet dannelse på overfladen markør udtryk. Derfor er skabelsen af en bilateral patellar senen skade model i rotter beskrevet for i vivo implantation af UCM-MSC spheroids dannet på chitosan film. Ingen komplikation blev observeret i undersøgelsen med hensyn til morbiditet, understreger stigende effekter, eller væv infektion. Den samlede funktionelle score på de opererede rotter på 7 dage var lavere end normale rotter, men vendte tilbage til normal inden for 28 dage efter operationen. Histologiske snesevis af væv-healing bekræftet tilstedeværelsen af en blodprop i behandlede defekter evalueres på 7 dage, manglende udenlandske krop reaktion, og forløbet helbredende på 28 dage. Denne bilaterale patella senen defekt model var styrer Inter individuel variation via oprettelsen af en intern kontrol i hver rotte, forbundet med acceptabel sygelighed, og tilladt registrering af forskelle mellem ubehandlet sener og behandlinger.

Introduction

Senen skade er en af de mest almindelige årsager til betydelige smerter og muskel atrofi på tværs af arter1. I veterinærmedicin er sener og ledbånd skader af særlig interesse for heste, som 82% af alle personskader i væddeløbsheste indebærer bevægeapparatet, og 46% af dem påvirker sener og ledbånd2,3. Arvæv dannelse påvirker de biomekaniske egenskaber af helede sener og forklarer bevogtet prognosen for tilbagevenden til athletic brug efter flexor senen skader; re-skade, der opstår i løbet af 2 år op til 67% af heste behandles konservativt4. Regenerativ medicin giver nye alternativer til en betingelse, der udfordrer traditionelle behandlinger. Autolog stamcelleterapi har produceret nogle opmuntrende resultater5,6 , men er begrænset af de sygelighed forbundet med væv samling, forsinket administration som følge af forarbejdning/omprogrammering af celler og påvirkning af den patientens sundhedstilstand (f.eks. alder) på egenskaber af stamceller-celler7,8. Disse begrænsninger give et rationale for at undersøge allogene stamceller som off-the-shelf alternativ. Føtal adnexa-afledte celler er tiltalende kandidater, fordi de omgå de etiske bekymringer og risikoen for teratom formation forbundet med embryonale stamceller. Blandt føtal adnexa er navlestrengen matrix (UCM), også kaldet Wharton’s Jelly, rigelig og let at samle.

Uanset celle kilde er forbedring af stemness afgørende at etablere en celle bank for allogen regenerativ medicin. Fra et funktionelt synspunkt, kan stemness defineres som potentialet for selvfornyelse og multi lineage differentiering9. Dokumentation af stemness bygger på spredning og differentiering assays, sammen med udtryk af genet markører Oct4, Sox2, og Nanog9. En strategi til at forbedre stemness er baseret på brugen af biomaterialer at tjene som ugyldige fyldstoffer og luftfartsselskaber forbedre spredning og differentiering af UCM-MSCs. Denne fremgangsmåde fjerner bekymringer med hensyn til manipulation af transcriptional faktorer til at omprogrammere voksne celler inducerede pluripotente celler. Blandt biomaterialer betragtes som potentielle smittebærere for stamceller, er chitosan tiltrækkende for sin biokompatibilitet og nedbrydelighed10. Denne naturlige aminopolysaccharide er dannet af alkalisk deacetylation af kitin, den anden mest rigelige naturlige polysaccharid, primært fremstillet som et subproduct skaldyr10. Vi har tidligere undersøgt samspillet mellem MSCs og chitosan stilladser og observeret dannelsen af spheroids11,12,13,14,15, 16. vi også rapporteret om overlegenhed af chondrogenesis chitosan matricer12,13,14,15,16,17, 18. For nylig, to uafhængige undersøgelser beskrevet spheroids dannelsen af fedtvæv og moderkage væv udvundet MSCs kulturperler på en chitosan film19,20. Denne dannelse af spheroids ikke kun forbedret stemness, men også forbedret fastholdelse af stamceller efter i vivo implantation20.

Prævalens og sygelighed af tendinopati på tværs af arter har bedt om udviklingen af eksperimentelle modeller til at studere Patofysiologi af tendinopathies og teste nye behandlinger såsom stamcelle injektioner. I heste er collagenase-induceret senebetændelse en fælles model til at påvise effektiviteten ved hjælp af MSCs i senen reparation21. Relevansen af denne tilgang er begrænset, da injektioner forårsage akut inflammatoriske forandringer, der henviser til, at klinisk tendinopathies sædvanligvis et resultat af kronisk overanstrenger22,23. Derudover kemiske induktion af senen sygdom inducerer en healing svar og replikerer ikke nedsat helingsprocessen i kliniske tilfælde22,23. Excision af et segment af overfladiske digital flexor senen er blevet beskrevet som en kirurgisk model af senebetændelse i heste24. For nylig, en minimalt invasiv metode blev brugt til at begrænse de traumatiske skader til den centrale kerne af overfladiske digital flexor sene25. Kirurgisk modeller ikke simulere den træthed mekanisme, der kan føre til naturlige senen sygdom, og har tendens til at mangle reproducerbarhed i omfanget af skader oprettet25. Uanset model, sygelighed og omkostningerne forbundet med equine modeller af senen er sygdomme yderligere begrænsninger, som berettiger en interesse i gnavere modeller som et første skridt i vivo evaluering af nye behandlingsformer.

En af de vigtigste fordele ved eksperimentelle modeller i gnavere består af omkostninger og muligheden for at styre mellem individuelle variation. Gnavere kan være standardiseret med hensyn til forskellige fysiologiske faktorer på grund af deres hurtige vækst og korte relativt levetider, begrænse kilder til variation og derfor reducerer antallet af dyr, der kræves til at opdage forskelle. Strategier til at fremkalde senen sygdomme hos gnavere har stolet på kemiske induktion, men også på kirurgisk oprettelsen af delvis senen defekter21. Kirurgisk modeller kan simulere naturlige tendinopathies bedre end kemiske modeller, men kan føre til højere sygelighed og katastrofale svigt af beskadigede senen. I henseende synes rotter bedre kandidater end mus for disse modeller, da deres størrelse giver mulighed for skabelse af større fejl, derved at lette evalueringen af væv healing. Sprague-Dawley rotter har været brugt i eksperimentelle studier af tendinopathies i fire store senen grupper: rotator cuff, flexor, Achilles og patella sener26. Blandt disse er modeller der involverer patellar senen særligt tiltrækkende på grund af den større størrelse af denne sene og nem adgang til den27. Patellar senen tillægger den tibial tuberositas quadriceps muskler. Inden for denne extensor mekanisme er patella en sesamoid knogle, der dirigerer handlingen af quadriceps og skildrer det proksimale omfanget af patellar senen. Tilstedeværelsen af benede ankre på de proksimale og distale udvidelser af patellar senen letter biomekaniske tests. Modeller der involverer patellar senen typisk stole på ensidig kirurgisk defekter, med en kontralaterale intakt senen tjener som en kontrol28,29. Den mest almindelige patellar senen defekt model indebærer udtagelse den centrale del (1 mm i bredden) af patellar senen fra den distale spids af knæskallen til indsættelsen af den tibial tuberositas, mens de kontralaterale patellar senen er overladt intakt. Foranstaltninger af resultater har inkluderet histologi, ikke-destruktiv biomekaniske prøvning eller biomekaniske test fiasko, ultrasound imaging, ex vivo fluorescens imaging, brutto observation og funktionsprøver28,30 ,31. Ensidige modeller tillader ikke sammenligning af en foreslået behandling med konservative ledelse for en lignende skade inden for de samme dyr. Tilsvarende kræver sammenligning mellem flere behandlinger separate dyr. En bilaterale model ville eliminere mellem individuelle variationer og reducere antallet af dyr, der kræves for en undersøgelse32. Imidlertid bilaterale skader kan øge sygelighed, og bilaterale halthed kunne hindre behandling evaluering. Et par undersøgelser rapport kort brugen af bilaterale patellar senen defekter i rotter, men fokuserer på virkningerne af behandlinger i stedet for peri-operative ledelse og sygelighed af model33,34.

Denne undersøgelse langsigtede mål er at udvikle en strategi for at forbedre stemness og i vivo overlevelse af UCM-MSCs bestemt til allogen transplantation. For at nå dette mål har vi for nylig rapporteret forbedret stemness af UCM-MSCs ved dannelsen af spheroids på chitosan film og inkubering under hypoksiske miljø35. Disse in vitro- egenskaber var forbundet med forbedret biomekaniske egenskaber af patellar senen defekter behandles med konditioneret UCM-MSCs. baseret på disse resultater, rotte bilaterale patellar senen defekt model synes passende at teste kandidat behandlinger for senen skader36. Formålet med undersøgelsen rapporterede her er at give detaljerede protokoller til isolering og karakterisering af UCM-MSC’er, forberedelse af en biologiske leveringssystemet for stamceller, oprettelse og behandling af bilaterale patella senen defekter og postoperativ Recovery og evaluering af væv, healing inden for fejl.

Protocol

Alle metoder beskrevet her er blevet godkendt af institutionelle Animal Care og brug udvalg (IACUC) af Western University of Health Sciences. 1. isolering og udvidelse af MSCs fra Equine navlestrengen Matrix Få moderkagen fra en voksen mare (gravid) efter observeret foedselslandets og aseptisk isolere navlestreng fra moderkagen. Holde navlestrengen i fosfatbufferet saltopløsning (PBS) med 1% penicillin-streptomycin (P/S) ved 4 ° C under overførsel indtil behandling. Vas…

Representative Results

Resultaterne præsenteres i den aktuelle undersøgelse, da betyde ± SD (standardafvigelse). Celler blev isoleret fra umbilical snore af 6 hopper, og procentdelen af isolerede cellelinjer udtrykker hver celle overflade markør under standard eller chitosan conditioning blev sammenlignet med en Friedman test, som en ikke-parametrisk variansanalyse med gentagne foranstaltninger. For sene defekt modeloprettelse, 8 rotter blev brugt til 7 dage efter operationen vurdering og 12 rotter blev bru…

Discussion

Equine celler blev udvalgt til dette projekt, fordi vi i sidste ende har til hensigt at teste kandidat tilgange i forvaltningen af naturlige tendinopathies i heste. Senen skader hos heste er faktisk tiltrækkende som naturlige modeller af tendinopati i mand på grund af den biologiske lighed mellem equine overfladiske digital flexor og achillessenen i mennesker41. Celle celleoverflademarkører CD44, CD90, CD105, CD34 og MHC II blev udvalgt til Immunofænotypning af celler, i overensstemmelse med d…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Forfatterne vil gerne anerkende Dr. Su, ph.d., for hendes statistisk analyse af data. Forfatterne også takke Dr. McClure, DVM, ph.d.-DACLAM, for hendes råd om anæstesi og pain management protokoller bruges i undersøgelsen. Dette projekt blev støttet af tilskud fra Western University of Health Sciences Office af Vice President for forskning (12678v) og USDA afsnit 1433 midler (2090).

Materials

PBS 10X Hyclone SH30258.01 Consumable
Collagenase type IA Worthington LS004197 Consumable
DMEM low glucose Hyclone SH30021.FS Consumable
Fetal Bovine Serum Hyclone SH30910.03 Consumable
Penicillin/Streptomycin 100X Hyclone SV30010 Consumable
Trypsin 0.25% Hyclone SH30042.01 Consumable
Accutase Innovative Cell Technologies AT104 Consumable
Trypan blue Hyclone SV30084.01 Consumable
Dimethyl Sulfoxide Sigma D2650 Consumable
Chitosan Sigma C3646 Consumable
Sodium Hydroxide Sigma S8045 Consumable
Bovine Serum Albumin Hyclone SH30574.01 Consumable
Round bottom polystyrene tube Corning 149591A Consumable
Mouse anti-horse CD44 (FITC) AbD serotec MCA1082F Consumable
Mouse anti-rat CD90 (FITC) AbD serotec MCA47FT Consumable
Mouse anti-horse MHC-II (FITC) AbD serotec MCA1085F Consumable
Mouse IgG1 (FITC) – Isotype Control AbD serotec MCA928F Consumable
Mouse monoclonal [SN6] to CD105 (FITC) abcam ab11415 Consumable
Mouse IgG1 (FITC) – Isotype Control abcam ab91356 Consumable
Mouse anti-human CD34 (FITC) BD BDB560942 Consumable
Mouse IdG1 kappa (FITC) BD BDB555748 Consumable
7-AAD BD BDB559925 Consumable
BD Accuri C6 Flow Cytometer BD Equipment
Vacutainer 5ml Med Vet International RED5.0 Consumable
Acid-citrate-dextrose Sigma C3821 Consumable
Calcium Chloride Sigma C5670 Consumable
Sevoflurane JD Medical 60307-320-25 Consumable
Rats Charles River Strain code: 400 Experimental animal
Rat surgical kit Harvard apparatus 728942 Equipment
Surgical Blade #15 MEDLINE MDS15115 Consumable
Rat MD's Baytril (2 mg/Tablet),
Rimadyl (2 mg/Tablet)		 Bio Serv F06801 Consumable
Polyglactin 910, 5-0 Ethicon J436G Consumable
Eosin alchol shandon Thermo scientific 6766007 Consumable
Harris Hematoxylin Thermo scientific 143907 Consumable
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rossdale, P. D., Hopes, R., Digby, N. J., offord, K. Epidemiological study of wastage among racehorses 1982 and 1983. Vet Rec. 116 (3), 66-69 (1982).
  2. Black, D. A., Tucci, M., Puckett, A., Lawyer, T., Benghuzzi, H. Strength of a new method of achilles tendon repair in the rat – biomed 2011. Biomed Sci Instrum. 47, 112-117 (2011).
  3. Lake, S. P., Ansorge, H. L., Soslowsky, L. J. Animal models of tendinopathy. Disabil Rehabil. 30 (20-22), 1530-1541 (2008).
  4. Frank, C. B. Ligament structure, physiology and function. J Musculoskelet Neuronal Interact. 4 (2), 199-201 (2004).
  5. Godwin, E. E., Young, N. J., Dudhia, J., Beamish, I. C., Smith, R. K. Implantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells demonstrates improved outcome in horses with overstrain injury of the superficial digital flexor tendon. Equine Vet J. 44 (1), 25-32 (2012).
  6. Smith, R. K., et al. Beneficial effects of autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells in naturally occurring tendinopathy. PLoS One. 8 (9), e75697 (2013).
  7. Fossett, E., Khan, W. S., Longo, U. G., Smitham, P. J. Effect of age and gender on cell proliferation and cell surface characterization of synovial fat pad derived mesenchymal stem cells. J Orthop Res. 30 (7), 1013-1018 (2012).
  8. Zaim, M., Karaman, S., Cetin, G., Isik, S. Donor age and long-term culture affect differentiation and proliferation of human bone marrow mesenchymal stem cells. Ann Hematol. 91 (8), 1175-1186 (2012).
  9. Leychkis, Y., Munzer, S. R., Richardson, J. L. What is stemness?. Stud Hist Philos Biol Biomed Sci. 40 (4), 312-320 (2009).
  10. VandeVord, P. J., et al. Evaluation of the biocompatibility of a chitosan scaffold in mice. J Biomed Mater Res. 59 (3), 585-590 (2002).
  11. Griffon, D. J., Abulencia, J. P., Ragetly, G. R., Fredericks, L. P., Chaieb, S. A comparative study of seeding techniques and three-dimensional matrices for mesenchymal cell attachment. J Tissue Eng Regen Med. 5 (3), 169-179 (2011).
  12. Schwartz, Z., Griffon, D. J., Fredericks, L. P., Lee, H. B., Weng, H. Y. Hyaluronic acid and chondrogenesis of murine bone marrow mesenchymal stem cells in chitosan sponges. Am J Vet Res. 72 (1), 42-50 (2011).
  13. Ragetly, G., Griffon, D. J., Chung, Y. S. The effect of type II collagen coating of chitosan fibrous scaffolds on mesenchymal stem cell adhesion and chondrogenesis. Acta Biomater. 6 (10), 3988-3997 (2010).
  14. Ragetly, G. R., Griffon, D. J., Lee, H. B., Chung, Y. S. Effect of collagen II coating on mesenchymal stem cell adhesion on chitosan and on reacetylated chitosan fibrous scaffolds. J Mater Sci Mater Med. 21 (8), 2479-2490 (2010).
  15. Ragetly, G. R., et al. Effect of chitosan scaffold microstructure on mesenchymal stem cell chondrogenesis. Acta Biomater. 6 (4), 1430-1436 (2010).
  16. Ragetly, G. R., Slavik, G. J., Cunningham, B. T., Schaeffer, D. J., Griffon, D. J. Cartilage tissue engineering on fibrous chitosan scaffolds produced by a replica molding technique. J Biomed Mater Res A. 93 (1), 46-55 (2010).
  17. Slavik, G. J., Ragetly, G., Ganesh, N., Griffon, D. J., Cunningham, B. T. A replica molding technique for producing fibrous chitosan scaffolds for cartilage engineering. Journal of Materials Chemistry. 17 (38), 4095-4101 (2007).
  18. Griffon, D. J., Sedighi, M. R., Schaeffer, D. V., Eurell, J. A., Johnson, A. L. Chitosan scaffolds: interconnective pore size and cartilage engineering. Acta Biomater. 2 (3), 313-320 (2006).
  19. Huang, G. S., Dai, L. G., Yen, B. L., Hsu, S. H. Spheroid formation of mesenchymal stem cells on chitosan and chitosan-hyaluronan membranes. Biomaterials. 32 (29), 6929-6945 (2011).
  20. Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities. Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).
  21. Webster, R. A., Blaber, S. P., Herbert, B. R., Wilkins, M. R., Vesey, G. The role of mesenchymal stem cells in veterinary therapeutics – a review. N Z Vet J. 60 (5), 265-272 (2012).
  22. Khan, M. H., Li, Z., Wang, J. H. Repeated exposure of tendon to prostaglandin-E2 leads to localized tendon degeneration. Clin J Sport Med. 15 (1), 27-33 (2005).
  23. Sullo, A., Maffulli, N., Capasso, G., Testa, V. The effects of prolonged peritendinous administration of PGE1 to the rat Achilles tendon: a possible animal model of chronic Achilles tendinopathy. J Orthop Sci. 6 (4), 349-357 (2001).
  24. van Schie, H. T., et al. Monitoring of the repair process of surgically created lesions in equine superficial digital flexor tendons by use of computerized ultrasonography. Am J Vet Res. 70 (1), 37-48 (2009).
  25. Schramme, M., Kerekes, Z., Hunter, S., Labens, R. Mr imaging features of surgically induced core lesions in the equine superficial digital flexor tendon. Vet Radiol Ultrasound. 51 (3), 280-287 (2010).
  26. Hast, M. W., Zuskov, A., Soslowsky, L. J. The role of animal models in tendon research. Bone Joint Res. 3 (6), 193-202 (2014).
  27. Warden, S. J. Animal models for the study of tendinopathy. Br J Sports Med. 41 (4), 232-240 (2007).
  28. Murrell, G. A., et al. Achilles tendon injuries: a comparison of surgical repair versus no repair in a rat model. Foot Ankle. 14 (7), 400-406 (1993).
  29. Ozer, H., et al. Effect of glucosamine chondroitine sulphate on repaired tenotomized rat Achilles tendons. Eklem Hastalik Cerrahisi. 22 (2), 100-106 (2011).
  30. Chan, B. P., Fu, S. C., Qin, L., Rolf, C., Chan, K. M. Pyridinoline in relation to ultimate stress of the patellar tendon during healing: an animal study. J Orthop Res. 16 (5), 597-603 (1998).
  31. Ni, M., et al. Tendon-derived stem cells (TDSCs) promote tendon repair in a rat patellar tendon window defect model. J Orthop Res. 30 (4), 613-619 (2012).
  32. Orth, P., Zurakowski, D., Alini, M., Cucchiarini, M., Madry, H. Reduction of sample size requirements by bilateral versus unilateral research designs in animal models for cartilage tissue engineering. Tissue Eng Part C Methods. 19 (11), 885-891 (2013).
  33. Kajikawa, Y., et al. Platelet-rich plasma enhances the initial mobilization of circulation-derived cells for tendon healing. J Cell Physiol. 215 (3), 837-845 (2008).
  34. Xu, W., et al. Human iPSC-derived neural crest stem cells promote tendon repair in a rat patellar tendon window defect model. Tissue Eng Part A. 19 (21-22), 2439-2451 (2013).
  35. Taguchi, T., et al. Influence of hypoxia on the stemness of umbilical cord matrix-derived mesenchymal stem cells cultured on chitosan films. J Biomed Mat Res B: Appl Biomat. , (2017).
  36. Griffon, D. J., et al. Effects of Hypoxia and Chitosan on Equine Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells Int. , 2987140 (2016).
  37. Roughan, J. V., Flecknell, P. A. Evaluation of a short duration behaviour-based post-operative pain scoring system in rats. Eur J Pain. 7 (5), 397-406 (2003).
  38. Sotocinal, S. G., et al. The Rat Grimace Scale: a partially automated method for quantifying pain in the laboratory rat via facial expressions. Mol Pain. 7, 55 (2011).
  39. Rosenbaum, A. J., et al. Histologic stages of healing correlate with restoration of tensile strength in a model of experimental tendon repair. HSS J. 6 (2), 164-170 (2010).
  40. Vidal, M. A., Walker, N. J., Napoli, E., Borjesson, D. L. Evaluation of senescence in mesenchymal stem cells isolated from equine bone marrow, adipose tissue, and umbilical cord tissue. Stem cells and development. 21 (2), 273-283 (2011).
  41. Patterson-Kane, J., Becker, D., Rich, T. The pathogenesis of tendon microdamage in athletes: the horse as a natural model for basic cellular research. J Compar Pathol. 147 (2), 227-247 (2012).
  42. Dominici, M., et al. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. Cytotherapy. 8 (4), 315-317 (2006).
  43. Bartosh, T. J., et al. Aggregation of human mesenchymal stromal cells (MSCs) into 3D spheroids enhances their antiinflammatory properties. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (31), 13724-13729 (2010).
  44. Zhang, K., Yan, S., Li, G., Cui, L., Yin, J. In-situ birth of MSCs multicellular spheroids in poly(L-glutamic acid)/chitosan scaffold for hyaline-like cartilage regeneration. Biomaterials. 71, 24-34 (2015).
  45. Montanez-Sauri, S. I., Beebe, D. J., Sung, K. E. Microscale screening systems for 3D cellular microenvironments: platforms, advances, and challenges. Cellular and molecular life sciences : CMLS. 72 (2), 237-249 (2015).
  46. Butler, D. L., et al. The use of mesenchymal stem cells in collagen-based scaffolds for tissue-engineered repair of tendons. Nat Protoc. 5 (5), 849-863 (2010).
  47. Brennan, M. P., Sinusas, A. J., Horvath, T. L., Collins, J. G., Harding, M. J. Correlation between body weight changes and postoperative pain in rats treated with meloxicam or buprenorphine. Lab Anim (NY). 38 (3), 87-93 (2009).
  48. Ramon-Cueto, A., Cordero, M. I., Santos-Benito, F. F., Avila, J. Functional recovery of paraplegic rats and motor axon regeneration in their spinal cords by olfactory ensheathing glia. Neuron. 25 (2), 425-435 (2000).
  49. Arculus, S. L. Use of meloxicam as an analgesic in canine orthopaedic surgery. Vet Rec. 155 (24), 784 (2004).
  50. Bervar, M. Video analysis of standing–an alternative footprint analysis to assess functional loss following injury to the rat sciatic nerve. J Neurosci Methods. 102 (2), 109-116 (2000).
  51. Perry, S. M., Getz, C. L., Soslowsky, L. J. Alterations in function after rotator cuff tears in an animal model. J Shoulder Elbow Surg. 18 (2), 296-304 (2009).
  52. Stoll, C., et al. Healing parameters in a rabbit partial tendon defect following tenocyte/biomaterial implantation. Biomaterials. 32 (21), 4806-4815 (2011).
  53. Hankemeier, S., et al. Bone marrow stromal cells in a liquid fibrin matrix improve the healing process of patellar tendon window defects. Tissue Eng Part A. 15 (5), 1019-1030 (2009).
  54. Silver, I. A., et al. A clinical and experimental study of tendon injury, healing and treatment in the horse. Equine Vet J Suppl. (1), 1-43 (1983).
  55. Enwemeka, C. S. Inflammation, cellularity, and fibrillogenesis in regenerating tendon: implications for tendon rehabilitation. Phys Ther. 69 (10), 816-825 (1989).
  56. Goldin, B., Block, W. D., Pearson, J. R. Wound healing of tendon–I. Physical, mechanical and metabolic changes. J Biomech. 13 (3), 241-256 (1980).
  57. Lyras, D. N., et al. The effect of platelet-rich plasma gel in the early phase of patellar tendon healing. Arch Orthop Trauma Surg. 129 (11), 1577-1582 (2009).
  58. Oshiro, W., Lou, J., Xing, X., Tu, Y., Manske, P. R. Flexor tendon healing in the rat: a histologic and gene expression study. J Hand Surg Am. 28 (5), 814-823 (2003).
  59. Visser, L. C., Arnoczky, S. P., Caballero, O., Gardner, K. L. Evaluation of the use of an autologous platelet-rich fibrin membrane to enhance tendon healing in dogs. Am J Vet Res. 72 (5), 699-705 (2011).

Tags

Stem Cell TherapyBilateral Patellar Tendon InjuryRat ModelOrthopedic ResearchTendinopathyEquine Umbilical CordWharton’s JellyCollagenaseCell Culture
check_url/kr/56810?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Wagner, J. R., Taguchi, T., Cho, J. Y., Charavaryamath, C., Griffon, D. J. Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats. J. Vis. Exp. (133), e56810, doi:10.3791/56810 (2018).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image