为了通过 ES 细胞方法提高转基因小鼠的效率, 我们提出了一种对目前囊胚注射协议的适应。在这里, 我们报告, 胚胎的简单旋转, 并通过跨内细胞质量 (TICM) 的注射增加了嵌合体小鼠的百分比从31% 到 50%, 没有额外的设备或进一步的专门训练。在9月内注射了26种不同的近交无性系克隆和35株总无性系。传统注射技术与 TICM 的妊娠率、胚胎恢复率均无显著性差异。因此, 如果没有任何重大改变的注射过程和简单的定位胚泡和注射通过 ICM, 释放 ES 细胞进入囊胚腔可以有可能提高嵌合生产的数量和随后生殖传输。
Introduction
近25年来, 基因靶向小鼠的产生一直是一个缓慢的过程, 经常受到胚胎干细胞微注射阶段的瓶颈的阻碍, 生殖传送合体的产生。最近的进展, 包括 CRISPR/Cas91、2针对 ES 细胞和高吞吐量 es 细胞生成联盟 (如 KOMP), 改善了基因改良 ES 细胞的生成/可用性。然而, 生殖合体的产生仍然是从这些 ES 细胞中创建基因修饰小鼠的瓶颈3,4。高吞吐量 es 细胞生成项目受到 es 细胞质量高变异性的困扰, 这对于成功创建生殖合体至关重要。此外, 一些常用 ES 细胞系以高体检著称, 生殖主管合体5难以生产。
Scott, G. J., Gruzdev, A., Hagler, T. B., Ray, M. K. Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates. J. Vis. Exp. (135), e56955, doi:10.3791/56955 (2018).