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화학

단일 셀 대사체학 라이브 개구리 (Xenopus laevis) 배아에 대 한 현미경 모 세관 전기 이동 법 질량 분석

Published: December 22, 2017
doi:
10.3791/56956
, , ,
1Department of Chemistry,George Washington University, 2Department of Anatomy & Regenerative Biology,George Washington University, 3Department of Chemistry & Biochemistry,University of Maryland, College Park

Summary

우리는 빠른 시내 현장 샘플링의 높은 정밀도와 최소한의 침공에 신진 대사 활동의 스냅샷의 화학 특성을 촉진 하기 위하여 모 세관 기반 마이크로-샘플링를 사용 하 여 개별 셀의 작은 부분을 사용할 수 있는 단계를 설명 배아를 사용자 단일 셀 모 세관 전기 이동 법 질량 분석 플랫폼을 사용 하 여 라이브.

Abstract

단일 셀에 작은 분자의 정량화 더 나은 이해 배아 개발의 기반이 되는 기본 프로세스에 대 한 새로운 전위를 발생 시킵니다. 사용 단일 셀 조사에 직접 라이브 배아, 새로운 분석 접근 필요, 특히 그 민감한, 선택적, 양적, 강력 하며 확장 가능한 다른 셀 크기를. 여기, 선물이 자유롭게 개발 남쪽 아프리카 발톱된 개구리 (Xenopus laevis), 세포 및 개발 생물학에서 강력한 모델의 배아에 단일 셀에 대사의 분석 제자리에 있도록 하는 프로토콜. 이 방법은 모 세관 현미경을 사용 하 여 후속 분석을 위해 인접 셀 그대로 태아에 단일 식별 된 셀에서 정의 된 부분을 발음. 수집 된 셀 내용은 고해상도 탠덤 질량 분석기를 결합 하는 미 모 세관 전기 이동 법 분무 이온화 (CE-ESI) 인터페이스에 의해 분석 된다. 이 방식은 다양 한 셀 크기를 확장 하 고 발전 태아의 복잡 한 3 차원 구조와 호환 합니다. 예를 들어, 단일 셀 CE-ESI-MS 조상 세포 생겨나게 자손에 게 태아의 개발로 펼쳐져 대사 셀이 해명 수는 있지만을 설명 합니다. 세포 및 발생 생물학, 게다가 여기에 설명 된 단일 세포 분석 프로토콜은 의무가 다른 세포 크기, 세포 유형, 또는 동물 모델입니다.

Introduction

배아 발달에 대 한 포괄적인 이해 특성화를 발전 유 기체의 모든 세포에 전개 된 모든 분자 변경 필요 합니다. 수 분자 확대와 차세대 시퀀싱 하는 동안 깊은 측정 개발 시스템2,3, 상당히 적은 단일 셀 transcriptomes1 의 작은 분자의 집합에 대 한 알려져 있다 단백질 및, 특히, 대사 산물을 포함 하 여 단일 배아 세포에서 생산 (분자 질량 < ~ 1500 다). 내부 및 외부 이벤트에 신속 하 고 동적 응답,는 대사체 셀의 분자 상태의 강력한 설명자 역할을 합니다. 단일 셀 대사체 따라서 셀이 초기 배아에서의 공간 및 시간 개발을 추적 하 고 기능 연구에 대 한 새로운 분자 식별 가능성이 발생 합니다. 그러나,이 분자에 사용할 수 있는 분자 증폭, 없이 대사체의 뛰어난 감도 사용 하 여 질량 분석 (MS), 대사 산물 분석에 대 한 선택의 기술 요구.

단일 셀 MS (참조 리뷰 4,,56,7,8,9 단 세포 대사 산물을 측정 하기 위해 충분 한 감도와 기술의 모음입니다. ,10,11,12,13,,1415). 셀의 재현 샘플링 및 대사 산물의 효율적 추출 단일 세포에서 대사 산물의 성공적인 탐지에 필수적입니다. Xenopus 배아에서 식별 된 셀의 전체 셀 해 부는 작은 분자의 펩 티 드16특성을 활성화 하 고 있다. 다른 접근 탐지 분무 이온화 (ESI) MS 사용 하 여 다음 개별 라이브 셀 샘플을 micropipettes를 사용 합니다. 예를 들어 대사 산물 단일 셀 비디오 MS17, 압력 프로브18, 단일 프로브19, 및 유체 힘 현미경20, 다른 기술21, 중 식물이 나 포유류 세포에서 측정 했다 22,,2324. 또한, 단일 셀 MS 워크플로에 이온화 전에 화학 분리의 효율적으로 대사체, 따라서 검색 하기 전에 이온 생성 하는 동안 잠재적인 간섭 경감을 단순화 합니다. 중요 한 것은, 분리는 또한 분자 식별을 지원 하기 위해 화합물 관련 정보를 제공 합니다. 모 세관 전기 이동 법 (세 륨) 단일 해 부25,26 또는 microsampled27뉴런, 신경 고기 작은 분자 차이 캡처 metabolites를 감지에 사용 되었습니다. 우리는 최근 ESI 탠덤 Xenopus laevis16,28의 초기 배아에서 해 부 했다 개별 셀에 대사 산물의 수백의 추적 수준 검색 사용 하려면 MS에 CE를 적응. 이러한 연구 개발의 초기 단계에서 배아 세포 간의 놀라운 변화 차이 공개 하 고 알 수 없는 발달에 미치는 영향16와 대사 산물의 발견에 지도 했다.

여기 우리는 살아있는 척추 동물 배아 있지만 단일 셀 CE-ESI-MS29,30을 사용 하 여 직접 단일 셀에 대사 산물의 탐지를 사용 하는 프로토콜을 제공 합니다. 선택한 모델 유기 체는 8-하-32-셀 X. laevis 배아 접근 개발 및 모델 생물의 다른 종류의 나중의 단계에 적용 됩니다. 이 프로토콜 ~ 10 nL 부분 확인 된 셀에 제자리에 형태학 상으로 복잡 한 발전 태아에서의 발음을 고해상도 이미징 시스템으로 지도 다축 변환 제어 날카롭게 모세를 사용 합니다. 이 있지만 작은 셀에 확장 하 고는 태아에서 세포 계보를 추적 하기 위해 충분히 빨리 초 이내에, 작동 한다. 극 지 추출 또는 apolar 작은 분자 대사 산물 등 4 ~ 5에서 수집 된 샘플에서 펩 티 드 후 µ L 추출 솔루션, ~ 10 결과 추출의 nL ESI 질량 분석기에 하이픈이 맞춤식 CE 플랫폼에서 분석 된다. 건설 및 CE-ESI-MS 플랫폼의 다른 곳에서 설명 하는 프로토콜에 작성 합니다. 31 , 32 동축 CE ESI 인터페이스 설명 되어 있는 대로 구성 되어 있습니다. 31 이 플랫폼은 4-5 로그 순서 동적 범위 (상대28,29,30 추적 수준 감도 정량화에 대 한 기능을 달성 하기 위해 콘 제트 분사 정권 유지 또는 절대16). CE-ESI-MS 플랫폼 정량에 10의 테스트 범위는 60-박 한 8% 상대 표준 편차 (RSD)와 탐지의 제공 nM 1 µ m 작은 분자16, X에에서 내 인 성 대사 산물의 특성을 충분 한입니다. laevis 셀. Microprobed 셀 분할 개발30, 세포질 물질 대사의 해결된 일시적으로 그리고 공간 분석에 대 한 허용을 통해 배아 진행으로 계속. 실제로, 단일 셀 CE-ESI-MS 대사 차이 복 부 등16,29, 동물 식물16, 그리고 왼쪽 오른쪽28 개발 축으로 셀을 차지 하는 셀을 찾는 데 사용할 수 있습니다. 그 X. laevis30에서 일반적인 조상 세포에서 신경 조직 운명 등 계보를 형성 한다. 우리는 여기에 설명 된 프로토콜 생체의 광범위 한 배열에 적용 되는 예상 쿼리 X. laevis 배아30의 다른 발달 단계에서 개별 배아 세포의 대사 차이, 외 고 단일 셀 셀 및 모델 생물의 배아 발달의 다른 단계에서 microsampled. 또한, 다른 플랫폼 호환-조금만 샘플 분리 및 생체의 특성에 사용할 수 있습니다.는 있지만 microsampling에 사용 될 수 있습니다.

Protocol

유지 보수에 관련 된 모든 프로토콜 및 Xenopus laevis 의 취급 기관 동물 관리 및 사용 위원회 조지 워싱턴 대학에 의해 승인 되었다 (IACUC 없습니다. A311)입니다. 1. 악기, 미디어, 용 매, 샘플링 하 고 샘플링 요리 준비 다음 순서로 초순 (25 ° C에서 ~18.2 MΩ.cm)에 다음과 같은 염을 용 해 하 여 스타의 솔루션 (SS) x 1을 준비 하 고 표준에 따라 지정 된 농도에서<sup class="x…

Representative Results

우리는 최근 있지만 단일 셀 고용 CE-ESI-MS 자유롭게 Xenopus laevis 배아29,30개발에 개별 확인 된 셀에 대사 산물의 특성. 있지만 빨리 가능 (~ 5 초/셀), 제자리에 ~ 10의 포부 nL 개별 셀, 같은 셀의 여러 포부 또는 라이브 배아 (그림 1b)의 개발의 동일한 이상 단계 내의 여러 다른 셀에서. Aspirated 셀룰?…

Discussion

현미경 CE-ESI-MS 라이브, 자유롭게 개발 배아에 단일 세포에서 대사 산물의 직접 특성을 수 있습니다. 접근 방법의 핵심은 두 가지 기술 하위 구성 요소, 즉 제자리에서 모 세관 microsampling 및 높은 감도 CE-ESI-양 전체 셀 절 개에 비해, 모 세관 microsampling는 빠른 작업 (몇 초 5 분 대의 이점이 있다 / 해 부에 의해 셀), 배아, 그리고 개발의 나중 단계에서 형성 하는 작은 세포를 확장성의 복잡 한 3 ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 국립 연구소의 건강 보조금 GM114854 (P.N.)에 의해 지원 되었다 및 (P.N.)에 CA211635, 아놀드와 벨 베크만 재단 베크만 영 탐정 부여 (P.N.)는 듀 폰 영 교수 수상 (P.N.), 질량에 대 한 미국 사회 분석 연구 수상 (P.N.), 그리고 (R.M.O. E.P.P.)를 우주 클럽 재단 장학. 의견 및이 책에서 표현 하는 결론은 전적으로 그 저자 고 반드시 자금 출처의 공식 의견을 대표 하지는 않습니다.

Materials

Reagents for Embryo Culture Media
Potasium chloride Fisher Scientific BP 366-1
Magnesium sulfate Fisher Scientific M 65-3
Calcium nitrate Sigma Aldrich C1396
Cysteine MP Biomedicals 101444
Trizma hydrochloride Sigma Aldrich T3253
Trizma base Sigma Aldrich T1503
Sodium chloride Fisher Scientific 5641-212
Name Company Catalog Number Comments
Metabolite Extraction Solvents
Acetonitrile (LC-MS-grade) Fisher Scientific A955
Methanol (LC-MS-grade) Fisher Scientific A456
Water (LC-MS-grade) Fisher Scientific W6
Name Company Catalog Number Comments
Solvents and Standards for CE-ESI-MS
Formic acid (LC-MS-grade) Fisher Scientific A11710X1-AMP
Methanol (LC-MS-grade) Fisher Scientific A456-4
Water (LC-MS-grade) Fisher Scientific W6
Sodium chloride Fisher Scientific 5641-212
Acetylcholine chloride Acros Organics 159170050
Name Company Catalog Number Comments
Microprobe Fabrication Setup
Micropippette puller Sutter Instrument Co. P-1000
Borosilicate capillaries Sutter Instrument Co. B100-50-10
Fine sharp forceps: Dumont #5, Biologie/Dumoxel Fine Science Tools (USA) Inc 11252-30 Corrosion resitant and autoclavable.
Name Company Catalog Number Comments
Microprobe Sampling Setup
Micromanipulator Eppendorf, Hauppauge, NY TransferMan 4r
Stereomicroscope Nikon SMZ18 Should be vibrationally isolated.
Illuminator e.g. Goosenecks Nikon C-FLED2
Microinjector Warner Instrument, Handem, CT PLI-100A
Transfer pipettes (Plastic, disposable) Fisher Scientific 13-711-7M
Petri dish 60 mm and 80 mm Fisher Scientific S08184
Glass Pasteur Pipets ( Borosilicate, disposable) Fisher Scientific 13-678-20A
Centrifuge Thermo Scientific Sorvall Legend X1R
Name Company Catalog Number Comments
CE-ESI-MS Setup
High voltage power supply Spellman CZE1000R The HVPS may be controlled remotely using a low-voltage program generated by a personal computer. Caution: High voltage presents electrical shock hazard; all connective parts must be grounded or carefully shielded to prevent users from accidental exposure.
Syringe pumps (2) Harvard Apparatus 704506
Stereomicroscope Amscope SM-3BZZ Stereomicroscope capable of 4.5× magnification, equipped with an illuminator to monitor the spraying mode of the CE-ESI interface.
XYZ translation stage Thorlabs PT3
XYZ translation stage Custom-built This platform is capable of loading nanoliter-amounts of sample into the separation capillary via hydrodynamic injection and supplying the BGE for CE. Both interfaces described in this work were able to inject 6–10 nL of sample within 1 min into a 1 m separation capillary
Stainless steel sample vials Custom-built
Stainless steel BGE vial Custom-built
Fused silica capillary (40 µm/105 µm ID/OD; 100 cm) Polymicro technologies TSP040105
Fused silica capillary (75 µm/360 µm ID/OD; 100 cm) Polymicro technologies TSP075375
Stainless steel emitter with blunt tips (130/260 µm ID/OD) Hamilton Co. 21031A For better performance, laser-cleave and fine-polish the emitter tip.
Syringes (gas-tight): 500 – 1000 µL Hamilton Co. 1750TTL
Digital multimeter Fluke Fluke 117
High-resolution Mass Spectrometer Bruker Daltonics Maxis Impact HD High-resolution tandem mass spectrometer equipped with an atmospheric-pressure interface configured for ESI
Tunning mixture for mass spectrometer calibration Agilent technologies ESI-L G1969-85000
Data Analysis ver. 4.3 software Bruker Daltonics
Name Company Catalog Number Comments
Ancillary Equipment
Vacuum concentrator capable of operation at 4–10°C Labconco 7310022
Analytical microbalance (XSE105DU) Fisher Scientific 01911005
Freezer (-20 °C) Fisher Scientific 97-926-1
Freezer (-80 °C) Fisher Scientific 88300ASP
Refrigerated Incubator Fisher Scientific 11475126
Vortex-mixer Benchmark BS-VM-1000
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References

  1. Tang, F. C., Lao, K. Q., Surani, M. A. Development and applications of single-cell transcriptome analysis. Nat. Methods. 8 (4), S6-S11 (2011).
  2. Veselovska, L., et al. Deep sequencing and de novo assembly of the mouse oocyte transcriptome define the contribution of transcription to the DNA methylation landscape. Genome Biol. 16 (209), (2015).
  3. Tran, D. A., Bai, A. Y., Singh, P., Wu, X. W., Szabo, P. E. Characterization of the imprinting signature of mouse embryo fibroblasts by RNA deep sequencing. Nucleic Acids Res. 42 (3), 1772-1783 (2014).
  4. Wang, D. J., Bodovitz, S. Single cell analysis: the new frontier in ‘omics’. Trends Biotechnol. 28 (6), 281-290 (2010).
  5. Svatos, A. Single-cell metabolomics comes of age: new developments in mass spectrometry profiling and imaging. Anal. Chem. 83 (13), 5037-5044 (2011).
  6. Rubakhin, S. S., Romanova, E. V., Nemes, P., Sweedler, J. V. Profiling metabolites and peptides in single cells. Nat. Methods. 8 (4), S20-S29 (2011).
  7. Bodenmiller, B., et al. Multiplexed mass cytometry profiling of cellular states perturbed by small-molecule regulators. Nat. Biotechnol. 30 (9), 858-889 (2012).
  8. Rubakhin, S. S., Lanni, E. J., Sweedler, J. V. Progress toward single cell metabolomics. Curr. Opin. Biotechnol. 24 (1), 95-104 (2013).
  9. Kleparnik, K., Foret, F. Recent advances in the development of single cell analysis: A review. Anal. Chim. Acta. 800, 12-21 (2013).
  10. Zenobi, R. Single-cell metabolomics: Analytical and biological perspectives. Science. 342 (6163), 1243259 (2013).
  11. Gholipour, Y., Erra-Balsells, R., Nonami, H. In situ pressure probe sampling and UV-MALDI MS for profiling metabolites in living single cells. Mass Spectrom (Tokyo). 1 (1), A0003 (2012).
  12. Comi, T. J., Do, T. D., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. Categorizing cells on the basis of their chemical profiles: progress in single-cell mass spectrometry. J. Am. Chem. Soc. 139 (11), 3920-3929 (2017).
  13. Lombard-Banek, C., Portero, E. P., Onjiko, R. M., Nemes, P. New-generation mass spectrometry expands the toolbox of cell and developmental biology. Genesis. 55, e23012 (2017).
  14. Yang, Y. Y., et al. Single-cell analysis by ambient mass spectrometry. Trac-Trends Anal. Chem. 90, 14-26 (2017).
  15. Lanni, E. J., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. Mass spectrometry imaging and profiling of single cells. J. Proteomics. 75 (16), 5036-5051 (2012).
  16. Onjiko, R. M., Moody, S. A., Nemes, P. Single-cell mass spectrometry reveals small molecules that affect cell fates in the 16-cell embryo. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 112 (21), 6545-6550 (2015).
  17. Mizuno, H., Tsuyama, N., Harada, T., Masujima, T. Live single-cell video-mass spectrometry for cellular and subcellular molecular detection and cell classification. J. Mass Spectrom. 43 (12), 1692-1700 (2008).
  18. Nakashima, T., et al. Single-cell metabolite profiling of stalk and glandular cells of intact trichomes with internal electrode capillary pressure probe electrospray ionization mass spectrometry. Anal. Chem. 88 (6), 3049-3057 (2016).
  19. Pan, N., et al. The single-probe: A miniaturized multifunctional device for single cell mass spectrometry analysis. Anal. Chem. 86 (19), 9376-9380 (2014).
  20. Guillaume-Gentil, O., et al. Single-cell mass spectrometry of metabolites extracted from live cells by fluidic force microscopy. Anal. Chem. 89 (9), 5017-5023 (2017).
  21. Saha-Shah, A., Green, C. M., Abraham, D. H., Baker, L. A. Segmented flow sampling with push-pull theta pipettes. Analyst. 141 (6), 1958-1965 (2016).
  22. Hu, J., et al. Synchronized polarization induced electrospray: Comprehensively profiling biomolecules in single cells by combining both positive-ion and negative-ion mass spectra. Anal. Chem. 88 (14), 7245-7251 (2016).
  23. Zhang, L. W., Vertes, A. Energy charge, redox state, and metabolite turnover in single human hepatocytes revealed by capillary microsampling mass spectrometry. Anal. Chem. 87 (20), 10397-10405 (2015).
  24. Zhang, L. W., et al. In Situ metabolic analysis of single plant cells by capillary microsampling and electrospray ionization mass spectrometry with ion mobility separation. Analyst. 139 (20), 5079-5085 (2014).
  25. Lapainis, T., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. Capillary electrophoresis with electrospray ionization mass spectrometric detection for single-cell metabolomics. Anal. Chem. 81 (14), 5858-5864 (2009).
  26. Nemes, P., Knolhoff, A. M., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V. Metabolic differentiation of neuronal phenotypes by single-cell capillary electrophoresis electrospray ionization mass spectrometry. Anal. Chem. 83 (17), 6810-6817 (2011).
  27. Aerts, J. T., et al. Patch clamp electrophysiology and capillary electrophoresis mass spectrometry metabolomics for single cell characterization. Anal. Chem. 86 (6), 3203-3208 (2014).
  28. Onjiko, R. M., Morris, S. E., Moody, S. A., Nemes, P. Single-cell mass spectrometry with multi-solvent extraction identifies metabolic differences between left and right blastomeres in the 8-cell frog (Xenopus) embryo. Analyst. 141 (12), 3648-3656 (2016).
  29. Onjiko, R. M., Plotnick, D. O., Moody, S. A., Nemes, P. Metabolic comparison of dorsal versus ventral cells directly in the live 8-cell frog embryo by microprobe single-cell CE-ESI-MS. Anal. Methods. , (2017).
  30. Onjiko, R. M., Portero, E. P., Moody, S. A., Nemes, P. In situ microprobe single-cell capillary electrophoresis mass spectrometry: Metabolic reorganization in single differentiating cells in the live vertebrate (Xenopus laevis) embryo. Anal. Chem. 89, 7069-7076 (2017).
  31. Nemes, P., Rubakhin, S. S., Aerts, J. T., Sweedler, J. V. Qualitative and quantitative metabolomic investigation of single neurons by capillary electrophoresis electrospray ionization mass spectrometry. Nat. Protoc. 8 (4), 783-799 (2013).
  32. Knolhoff, A. M., Nemes, P., Rubakhin, S. S., Sweedler, J. V., Wevers, R., Lutz, N., Sweedler, J. V. . Methodologies for Metabolomics. , 119-139 (2013).
  33. Sive, H. L., Grainger, R. M., Harland, R. M. . Early development of Xenopus laevis: a laboratory manual. , (2000).
  34. Moody, S. A. Cell lineage analysis in Xenopus embryos. Methods Mol Biol. 135, 331-347 (2000).
  35. Bowes, J. B., et al. Xenbase: a Xenopus biology and genomics resource. Nucleic Acids Res. 36, D761-D767 (2008).
  36. Karpinka, J. B., et al. Xenbase, the Xenopus model organism database; new virtualized system, data types and genomes. Nucleic Acids Res. 43 (D1), D756-D763 (2015).
  37. James-Zorn, C., et al. Xenbase: expansion and updates of the Xenopus model organism database. Nucleic Acids Res. 41 (D1), D865-D870 (2013).
  38. Moody, S. A. Fates of the blastomeres of the 16-cell stage Xenopus embryo. Dev. Biol. 119 (2), 560-578 (1987).
  39. Moody, S. A. Fates of the blastomeres of the 32-cell-stage Xenopus embryo. Dev. Biol. 122 (2), 300-319 (1987).
  40. Dale, L., Slack, J. M. W. Fate map for the 32-cell stage of Xenopus laevis. Development. 99 (4), 527-551 (1987).
  41. Klein, S. L. The first cleavage furrow demarcates the dorsal-ventral axis in Xenopus embryos. Dev. Biol. 120 (1), 299-304 (1987).
  42. Rollman, C. M., Moini, M. Ultrafast capillary electrophoresis/mass spectrometry of controlled substances with optical isomer separation in about a minute. Rapid Commun. Mass Spectrom. 30 (18), 2070-2076 (2016).
  43. Moini, M., Martinez, B. Ultrafast capillary electrophoresis/mass spectrometry with adjustable porous tip for a rapid analysis of protein digest in about a minute. Rapid Commun. Mass Spectrom. 28 (3), 305-310 (2014).
  44. Huhn, C., Ramautar, R., Wuhrer, M., Somsen, G. W. Relevance and use of capillary coatings in capillary electrophoresis-mass spectrometry. Anal. Bioanal. Chem. 396 (1), 297-314 (2010).
  45. Nemes, P., Marginean, I., Vertes, A. Spraying mode effect on droplet formation and ion chemistry in electrosprays. Anal. Chem. 79 (8), 3105-3116 (2007).
  46. Zhu, Z. J., et al. Liquid chromatography quadrupole time-of-flight mass spectrometry characterization of metabolites guided by the METLIN database. Nat. Protoc. 8 (3), 451-460 (2013).
  47. Wishart, D. S., et al. HMDB 3.0 The Human Metabolome Database in 2013. Nucleic Acids Res. 41 (D1), D801-D807 (2013).
  48. Liu, J. X., Aerts, J. T., Rubakhin, S. S., Zhang, X. X., Sweedler, J. V. Analysis of endogenous nucleotides by single cell capillary electrophoresis-mass spectrometry. Analyst. 139 (22), 5835-5842 (2014).
  49. Hubrecht, L., Nieuwkoop, P. D., Faber, J. . Normal table of Xenopus laevis (Daudin). A systematical and chronological survey of the development from the fertilized egg till the end of metamorphosis. , (1967).
  50. Grant, P. A., Herold, M. B., Moody, S. A. Blastomere explants to test for cell fate commitment during embryonic development. J. Vis. Exp. (71), (2013).
  51. Sellick, C. A., Hansen, R., Stephens, G. M., Goodacre, R., Dickson, A. J. Metabolite extraction from suspension-cultured mammalian cells for global metabolite profiling. Nat. Protoc. 6 (8), 1241-1249 (2011).

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