이 방법은 토끼에 개재 정 맥 이식의 배치, 이식, 변환 및 내구성 transgene 식의 성과 설명합니다. 이로써 transgenes 이식할된 혈관에 단백질 제품의 생리 및 병 적인 역할 및 정 맥 이식 질병에 대 한 유전자 치료의 테스트의 조사.
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방법 논문
일반적인 경 동맥 중재 이식 정 맥 경에서에서 튼튼한 Transgene 식의 토끼 모델
* These authors contributed equally
이 논문에서
요약
초록
정 맥 이식 수술은 폐색 동맥 질환;에 대 한 일반적인 치료 그러나, 장기적인 성공은 이식 실패 혈전 증, 내 증식 및 동맥 경화에 의해 제한 됩니다. 이 문서의 목표는 토끼, 양측 정 맥 개재 이식 배치 다음 시험 튼튼한 transgene 식 달성 유전자 전달 벡터와 이식 하는 방법을 보여 줍니다. 메서드를 사용 하면 정상적인 정 맥 이식 항상성에서 유전자와 단백질 제품의 생물 학적 역할의 조사 수 있습니다. 그것은 또한 transgenes 예정 맥 이식 실패를 막을 수 있는 활동에 대 한 테스트 수 있습니다., 여부는 transgene의 표현 neointimal 성장을 방지, 혈관 염증 감소 또는 토끼에 있는 아 테 롬을 감소 먹이 와 고 지방 다이어트. 초기 생존 수술 하는 동안 왼쪽과 오른쪽 외부 경 정 맥의 세그먼트 excised 고 반전된 엔드-투-사이드 일반적인 경 동맥 중재 이식으로 양측 배치. 두 번째 생존 수술, 28 일 후, 수행 하는 동안 각는 이식 혈관 클립 순환에서 격리 이며 루멘 채워진다 (는 arteriotomy)를 통해 도우미 종속 adenoviral (HDAd) 벡터를 포함 하는 솔루션. 20 민 부 화 후 벡터 솔루션 발음 하 고는 arteriotomy 수리 흐름 복원 됩니다. 혈관 각 실험 프로토콜에 의해 결정 하는 시간 포인트에서 수확. 28 일 간격으로 이식 배치 및 변환 동맥 순환에 정 맥 이식의 적응을 위해 필요 하다. 이 적응 정 맥 이식 불리고 전이나 접목 직후에 발생 하는 transgene 식의 급속 한 손실을 방지 합니다. 메서드는 고유한 이식할된 혈관에 내구성, 안정적인 transgene 식을 달성 하는 능력. 다른 큰 동물 정 맥 이식 모델에 비해, 토끼는 저가 및 쉬운 취급의 이점이 있다. 쥐 나 정 맥 이식 모델에 비해, 토끼 크고 조작에 쉽게 혈관이 풍부한 조직 분석을 위해 제공 하는 있다.
서론
동맥 경화는 지질 축적과 혈관 벽에 염증 배 루멘, 심장 마비, 뇌졸중, 및 사지1,2의 손실의 축소로 이어질 만성 염증 성 질병 이다. 경 피 적인 내정간섭 (예., 혈관 및 stenting) 및 의료 치료 (예., 스타 틴과 항 에이전트) 아 테 롬;에 대 한 유용한 치료법 그러나, 그들은 하지 종종 관상동맥 및 말 초 순환에 모두 심각한 폐쇄성 질환 치료에 효과적입니다. 우회 접목, 자생 정 맥 세그먼트를 사용 하 여 심각한, 확산 관상 동맥 및 주변 혈관 질병3,4환자 치료에 대 한 일반적인 절차 남아 있다. 그러나, 모두는 관상에 이식 정 맥 그리고 주변 순환 가난한 장기 patency 요금. 관상 동맥 순환에 있는 정 맥 이식 1 년 50%에서 가려진는의 대략 10-20%는 10 년5,6에 의해 가려진. 주변 순환에서 정 맥 이식 실패 속도 5 년7에서 30-50%.
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프로토콜
모든 동물 프로토콜 및 연구는 동물 복지의 워싱턴 사무실의 대학에 의해 승인 되었다.
1입니다. 사전 작업 (모든 수술)에 대 한
- Paraspinous 근육에 근육 주사 (IM)으로 30 mg/kg 케 타 민 및 1.5 mg/kg xylazine와 토끼를 anesthetize.
참고: 수술 전에 음식과 물을 제한 되지 않습니다 됩니다. - 기다리는 동안 마 취의 충분 한 깊이, 준비 실 및 수술 실 (OR)에 테이블을 설정 합니다.
- 준비 실 면도 토끼의 목과 귀 (생존 수술만)에 정 맥 (IV) 포트의 위치에 대 한 준비. 준비 테이블에 눈 연 고, 펜타닐 패치 (생존 수술), 발기, 알코올 준비 패드, 24 G x ¾"카 테 터, 주사 포트, 외과 테이프를 놓습니다.
- 또는에서 모니터링 장비를 설정 하 고 관련 프로브 (심전도 (EKG), 펄스 프로브가 (SpO2), 및 온도). 18-19-G 또는 바늘 100 mL 염 IV 부대로 IV 펌프를 준비 하 고 10 mL/h로 유량을 설정/kg (생존 수술에만). (정 맥 접목 또는 수확 수술) nosecone와 산소와 isoflurane 장비를 설정 합니다.
- 토끼에 nosecone를 보호 하....
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결과
New 연산자의 기술 능력 연산자 실험 데이터를 생성 하려면이 메서드를 사용할 수 있습니다 확인 해야 합니다. New 연산자를 달성 해야 합니다 첫 번째 이정표는 일관 정 맥 이식 patency 초기 정 맥 이식 수술과 이후 지연 변환 수술 후. 이상 90 %patency 각 수술의 바람직한 이며 달성 후. patency 비 접촉 우리가 일반적으로 수술 후 하루 5-7에서 수행 하는 경 피 성 초음파를 사용 하 여 평가 될 수 있다. 특허 혈관과 토끼, 초음파 시험 활발 한 꼬리-두개골 혈액 흐름 (그림 3A) 앞쪽 목의 양쪽에 큰 혈관을 발표할 예정 이다. 정 맥 이식 중 차단 되 면 폐색된 이식으로 붙이는에 아무 감지 꼬리-두개골 혈이 됩니다 합니다. 그러나, 두개골-꼬리 혈 여전히 내부 경 정 맥 (그림 3B
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토론
이 프로토콜의 중요 한 단계에는 마 취 관리, anticoagulation, 외과 동맥/투입 정 맥의 조작과 이식할된 정 맥의 hemodynamic 측정 포함 됩니다. 마 취의 적절 한 관리는 포함 하는 두 개의 비교적 긴 작업 (일반적으로 3-3.5 h 양자 정 맥 접목 및 양측 이식 변환에 대 한 1.5-2.5 h)이 여러 생존 수술 모델에에서 중요 한. 우리 마 취는 nosecone 통해 고 endotracheal 삽 관 법에 의해 관리 하 고는 삽 관 법 가능성이 긍정적인 압력 환기는 atelectasis를 방지 하기 때문에 이식 변환 수술 후 생존을 개선 하 고 관련 된 발견 호흡 실패입니다. 토끼를 넣어야 하 고, 도전 그리고 기도 삽 관 법 관련 외상 수술 stridor 발생할 수 있습니다. 그러나, 도전과 삽 관 법의 합병증은 수술 사망률 및 정 맥 이식 수술 연관 사망률의 대부분을 제거 하는 위하여 지불할 작은 가격.
Anticoagulation 중 생존 수술 후.......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| Disposables | |||
| 3mL 주사기와 24G 바늘 | Becton Dickinson | 309571 | 정맥 이식 수술용 2x; 유전자 전달용 2x; 수술용 |
| 1 mL 주사기 27G 바늘 | Becton Dickinson | 309623 | 정맥 이식 수술용 2x, 유전자 이식 수술용 5x |
| 유전자 19G 바늘 | Becton Dickinson | 305187 | 유전자 이식 수술 |
| 20mL 주사기, 루어 잠금 | Nipro Medical Corp | JD+20L | |
| 카테터, 24Ga x 3/4" | Terumo Medical Products | SROX2419V | |
| 21G 바늘 | Becton Dickinson 305165 | 유전자 전달 수술 및 식염수 | |
| 거즈 4 "x 4" | Dynarex | 3242 | ~ 10-15 수술 |
| 당 3-0 실크 봉합 | Covidien Ltd. | S-244 | |
| 5-0 실크 봉합 | Covidien Ltd. | S-182 | |
| 7-0 폴리프로필렌 봉합사 | CP Medical | 8703P | 정맥 이식 수술 |
| 7-0 폴리프로필렌 봉합 | CP Medical | 8648P | 유전자 전달 수술 |
| 5-0 폴리글리콜산 봉합 | CP Medical | 421A | |
| 3-0 폴리글리콜산 봉합사 | CP Medical | 398A | |
| 알코올 면봉 | Covidien Ltd. | 6818 | IV 라인 |
| 카테터 플러그 | Vetoquinol | 411498 | |
| Ketamine HCl, 100 mg/mL | Vedco Inc. | ||
| 자일라진, 100mg/mL | Akorn Inc. | 4821 | |
| 리도카인, 20mg/mL | 화이자 | 409427702 | |
| 마르카인 0.5% | 화이자 | 409161050 | |
| Beuthanasia D-Special | Intervet Inc. | NDC 00061047305 | 수확 수술만 가능 |
| 부프레노르핀 HCl, 0.3 mg/mL | Patterson 수의학 | 12496075705 | |
| 식염수 IV 백, 0.9% 염화나트륨 | Baxter | 2B1309 | |
| Heparin (5000U/mL) | APP 제약 | NDC 63323-047-10 | |
| 파파베린(3.5mg/ml) | 미국 시약 Inc. | NDC 0517-4002-25 | 30mg / mL 재고에서 희석; 최대 1mL |
| 펜타닐 패치, 25mcg/h | Apotex Corp. | NDC 60505-7006-2 | |
| Isoflurane | 여러 공급업체 | 카탈로그 번호를 사용할 수 | |
| 바이러스 벡터 | 유전자 전달 수술 전용 | ||
| <강한>수술 기구 | |||
| Metzenbaum 바늘 홀더 7" 스트레이트 | Roboz | RS-7900 | |
| 수술 가위 6.5" 스트레이트 블런트/블런트 | Roboz | RS-6828 | |
| 바늘 홀더 /w 봉합 가위 | Miltex | 8-14-IMC | |
| Castroviejo 가위 | Roboz | RS-5658 | |
| Castroviejo 바늘 홀더, 5.75" 스트레이트 잠금 | 장치 Roboz | RS-6412 | |
| Stevens 가위 4.25" 곡선 무딘/무딘 | Roboz | RS-5943 | |
| Alm 견인기 4" 4X4 5mm 무딘 단자 | Roboz | RS-6514 | 2x |
| Backhaus 수건 클램프 3.5" | Roboz | 4x | |
| 마이크로 클립 설정 집게 4.75" | Roboz | RS-6496 | |
| 마이크로 혈관 클립, 11mm | Roboz | ||
| Surg-I-Loop | Scanlan International | 1001-81M | 5cm 길이 |
| Bonaccolto 집게, 4" (10 cm) 긴 세로 톱니, 크로스 톱니 팁, 1.2mm 팁 너비 | Roboz | RS-5210 | |
| Dumont #3 펜치 Inox 팁 크기 .17 × .10 mm | Roboz | RS-5042 | |
| Graefe 펜치, 4" (10 cm) 긴 톱니 모양의 직선, 0.8 mm 팁 | Roboz | RS-5280 | |
| Halstead 모기집게, 5" 직선, 1.3 mm 팁 | Roboz | RS-7110 | 2x |
| Halstead 모기집게, 5" 곡선형, 1.3mm 팁 | Roboz | RS-7111 | |
| Jacobson 모기집게 5" 곡선형, 섬세한, 0.9 mm 팁 | Roboz | RS-7117 | |
| Kantrowitz 집게, 7.25" 90도 섬세함, 1.7mm 팁 | Roboz | RS-7305 | |
| 조직 집게 5", 1X2 이빨, 팁 너비 2mm | Roboz | RS-8162 | |
| Allis-Baby 집게, 12cm, 4x5 이빨, 팁 너비 3mm | Fine Science Tools | 11092-12 | 2x |
| Adson 집게, 12cm, 톱니, 직선 | Fine Science Tools | 11006-12 | |
| 수의학 전기 수술 핸드피스 및 전극 | MACAN 제조 | HPAC-1; R-F11 | |
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| Isoflurane 기화기 및 청소부 | 공급업체 | 카탈로그 번호 사용 불가 | |
| 수의학 멀티 파라미터 모니터 | Surgivet | Surgivet Advisor | |
| 수의학 전기수술 유닛 | MACAN Manufacturing | MV-9 | |
| 수술용 현미경 | D.F. Vasconcellos | M900 | 정맥 이식 수술을 위한 25X 배율; 유전자 이식 수술을 위한 16X 배율 |
참고문헌
- Libby, P., Bornfeldt, K. E., Tall, A. R. Atherosclerosis: Successes, Surprises, and Future Challenges. Circ Res. 118, 531-534 (2016).
- Fowkes, F. G., et al. Comparison of global estimates of prevalence and ris....
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재인쇄 및 허가
