不可逆エレクトロポレーションの効果を研究する同系膵癌マウス モデル
Summary
不可逆エレクトロポレーション (IRE) は、局所進行膵癌の治療に使用される非熱的アブレーション技術です。比較的新しい技術であること、怒りの腫瘍増殖に及ぼす影響はよくわかっていません。膵臓癌に怒りの効果の研究を容易にする同系マウス モデルを開発しました。
Abstract
膵臓癌 (PC)、米国では、約 40,000 の患者は毎年を殺す病気正常に有望な免疫療法戦略を含むいくつかの治療的アプローチを拒み。不可逆エレクトロポレーション (IRE) は、腫瘍血管の近くで実行されるプロシージャを可能に隣接の膠原線維構造物の破壊を伴わない腫瘍細胞死を誘導する非熱的アブレーション手法です。熱アブレーションとは異なり IRE を誘発即時アブレーション壊死とともに、段階的なアポトーシス細胞死における結果、ローカル高度な PC と選択した患者の臨床使用されています。切除非ターゲットの怒りのような特定のプロシージャは無数の腫瘍微小環境における応答を引き起こすことができます。いくつかの研究は、他の種類の腫瘍における腫瘍増殖に及ぼす怒りを対処しているが、どれも PC に焦点を当てています。様々 な縦断研究 post プロシージャを促進する、高度に制御設定で怒りの皮下 (SQ) と同所性同種腫瘍を正常に扱うことができる PC の同系マウス モデルを開発しました。この動物モデルは、怒りと怒りの臨床効果を改善する方法の効果を研究する堅牢なシステムとして提供しています。
Introduction
膵管腺癌 (PC) は 2020年1のまわりの米国のがんによる死亡の 2 番目の主要な原因になると予想されます。遠隔転移疾患2から PC と診断された患者の大半は死んでしまいます。PC 環境は悪名高い免疫抑制・化学療法耐性。その線維形成性間質 (抗腫瘍) エフェクター T 細胞の希少性と腫瘍関連マクロファージ (Tam) を含む免疫抑制の白血球の卓越性、骨髄性の派生サプレッサー細胞 (MDSCs) を含み、レギュラトリー T 細胞 (Treg)3.これらの根底にある、微小環境のこれらの効果を打ち消すマルチ モーダルの戦略を開発する必要があります。
怒りが腫瘍の非熱的手法として開発されました。熱アブレーションとは異なり怒りは急速凝固壊死は発生しませんが、代わりに段階的なアポトーシス細胞死4の結果します。膵臓の腫瘍の重要な怒りが脆弱になり「ヒートシンク」効果と血管5のすぐ隣に実行することができます。この技術6 FDA から 510 (k) のクリアランスがあり選択したローカル高度なまたは境界性膵癌症例に対する臨床的に使用されている現在。公開シリーズ最多の怒りの PC7怒りを受ける患者の生存期間中央値約切除8,9なしで単独で近代的な化学療法で治療された患者の生存ダブルだった。
その熱凝固 (チューらの見直しその他の腫瘍型全身性免疫反応を誘導するいくつかの研究が示しています。10). ラジオ波焼灼術 (RFA) 動物腫瘍モデルつながる T 細胞の浸潤11,12、肝細胞がん患者13、アクティブ化されたナチュラル キラー (NK) 細胞の増加を含む 14、および肺がん患者15免疫自己寛容の減少。研究の少数は、免疫、アイソレータケージと怒り16傷害応答を検討しています。怒りは、セカンダリ (反対側) の腎移植の成長が減少または 2 週間原発の怒りによって防ぐ免疫マウスモデルの全身性免疫反応を刺激するために示されている以前17。また免疫マウスに免疫不全マウスがより完全な回帰のため以下の電圧が必要なことがわかりました。熱焼灼凝固壊死と比較して改善された抗原提示に怒りがありますが、この具体的には検討されていないえられています。
男性の LSL Kra で開発した腫瘍から派生した KPC リュック 4580 のセル行 (j. j. 葉はノースカロライナ大学からの贈り物) から PC の同系マウス モデルを開発しているG12D/+;LSL Trp53R172H/+;PDX1Cre/+;LSL ROSA26リュック/+マウス、怒り18,19の局所的・全身的効果を研究します。このルシフェラーゼ発現細胞株を免疫原性あり、SQ やがんを注入し、確実に脾臓に注入する肝転移を生成したとき免疫 c57bl/6 マウスにも発癌性。2 針アレイ プローブ (5 mm で区切られた) または SQ または同所性同種腫瘍にプラチナ ピンセット trodes を使用した 1,500 V/cm の電圧/距離比で電気の 100 μ s のパルスを提供するプログラミング可能な方形波のパルス発生器を利用してそれぞれの小動物における怒りの効果をモデル化するマウス。
Protocol
Representative Results
Discussion
本研究で我々 は、IRE の腫瘍増殖に及ぼす影響を研究するために使用できる PC 用免疫マウスモデルを実証しました。現在、怒りは高い選択ローカル高度な PC の患者に術前療法のヶ月後遠い病気の進行していない非熱的アブレーション技術として使用されています。ローカル高度な PC のほとんどの患者は遠隔転移疾患20成長するのでその使用したがって制限されています。こ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
RRW はこれが原因 (#PTC2017) サンディエゴ C3 パドレス ペダルによって資金を供給共同トランスレーショナルリサーチ研究助成から作業の支援を受けた。
Materials
| ECM 830 square wave electroporator | Harvard Apparatus | BTX # 45-0002 ( 58018-004 ) | |
| 2 needle array electrode | Harvard Apparatus | 45-0167 | |
| Safety foot switch | Harvard Apparatus | 45-0211 | |
| Platinum Tweezer-trode | Harvard Apparatus | 45-0486 | |
| DMEM-F12 media | ThermoFisher Scientific | 11320-033 | |
| Fetal Bovine Serum | ThermoFisher Scientific | 10437028 | |
| Trypsin | ThermoFisher Scientific | 25200056 | |
| Matrigel | Corning | 354230 | |
| Isoflurane | Sigma-Aldrich, Inc. | 792632 | |
| Lacrilube | Fisher Scientific | 19090646 | |
| Buprenorphine | Fisher Scientific | NC1292810 | |
| D-luciferrin | Perkin Elmer | 122799 | |
| IVIS Spectrum In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | 124262 | |
| Mouse strain C57BL/6J | The Jackson Laboratory | 000664/Black 6 | |
| Cell line (KPC-Luc 4580) | J.J. Yeh Lab at University of North Carolina | ||
| BD Precisionglide syringe needles | Sigma-Aldrich, Inc. | Z192406 | |
| Alcohol Swab(70% isopropyl alcohol ) | BD | 326895 | |
| Digital calipers | ThermoFisher Scientific | 14-648-17 | |
| Disposable Scalpels, Sterile | VWR | 21909 | |
| Cotton Tipped Applicators | VWR | 89198 | |
| Suture Needle, 45 cm, Size 6-0 | Harvard Apparatus | 72-3308 | |
| Suture Needle, 45 cm, Size 4-0 | Harvard Apparatus | 72-3314 | |
| Povidone-iodine 10% | BD | 29900-404 | |
| Disposable Warming Pad | KENT SCIENTIFIC CORP. | TP-3E | |
| Mouse Hair Clipper | KENT SCIENTIFIC CORP. | CL8787 | |
| Surgical Drape | Harvard Apparatus | 59-7421 | |
| Phosphate-buffered Saline | ThermoFisher Scientific | 10010023 | |
References
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