Double effet de facteurs dérivés de cellules de mélanome sur la différenciation des Adipocytes médullaires
Summary
Nous présentons ici un système fiable et simple à deux dimensions co-culture (2D) pour étudier l’interaction entre les cellules tumorales et les adipocytes de la moelle osseuse, qui révèle un double effet de facteurs dérivés des cellules de mélanome sur les adipocytes de la moelle osseuse différenciation et constitue également une méthode classique pour l’étude mécanistique de métastase osseuse.
Abstract
La diaphonie entre les adipocytes de la moelle osseuse et les cellules tumorales peut-être jouer un rôle crucial dans le processus de métastase osseuse. Diverses méthodes sont disponibles pour l’étude de la diaphonie significative ; Toutefois, un système bidimensionnel transwell coculture reste un classique, fiable et un moyen facile pour cette étude de diaphonie. Nous présentons ici un protocole détaillé qui montre la coculture des adipocytes de la moelle osseuse et de cellules de mélanome. Néanmoins, un tel système de co-culture pourrait non seulement contribuer à l’étude de transductions signal cellulaire des cellules cancéreuses induites par les adipocytes de la moelle osseuse, mais aussi à l’avenir mécaniste étude de métastase osseuse qui peut révéler de nouvelles cibles thérapeutiques pour OS métastase.
Introduction
Les métastases osseuses sont très répandus chez les patients atteints de cancer avancé, mais un traitement curatif n’est pas encore disponible. Au-delà se spécialisant dans le stockage de l’énergie sous forme de graisse, les adipocytes peuvent prendre en charge la croissance tumorale et les métastases dans la moelle osseuse et les autres organes1,2,3,4,5,6. En outre, les adipocytes jouent un rôle essentiel dans la régulation du cancer cell biology7,8,9,10 et métabolisme4,11,12 ,13,14,15,16, tel qu’il est bien comme dans OS métastase1,4,12. Dans le créneau de la moelle osseuse, les adipocytes peuvent aussi affecter le comportement biologique du cancer cellules4,6,17. L’interaction entre les adipocytes de la moelle osseuse et les cellules cancéreuses avec osteotropism est importante pour la compréhension des métastases osseuses. Cependant, on connaît peu.
Se fondant sur les études actuelles, différentes méthodes sont appliquées aux adipocytes, y compris deux ou trois dimensions (2/3D) et ex vivo cultures17,18,19,20,21. Récemment, Herroon et coll. conçu une nouvelle approche de la 3D-culture pour étudier les interactions entre les adipocytes de la moelle osseuse et de cellules de cancer22. Bien que la co-culture 3D est optimale pour imiter physiologique des interactions entre les adipocytes et le cancer cells in vivo, il souffre d’une mauvaise reproductibilité22,23. Par rapport à un système de co-culture 2D, un système de co-culture 3D peut fournir différents phénotypes cellulaires, comme la cellule morphologie21,22,24,25,26. Par ailleurs, la culture ex vivo des fragments de tissus isolés d’os spongieux peut entraîner une excroissance robuste des adipocytes cultivées la moelle osseuse des cellules17.
Contrairement à ces prédécesseurs, cependant, le modèle de culture cellulaire 2D reste une technique classique, fiable et facile pour numérisation rapidement des molécules de candidat et les phénotypes changés en adipocytes ou cancer des cellules in vitro1, 4,6,12,15,27. Pour mieux comprendre la diaphonie entre les adipocytes de la moelle osseuse et des cellules du mélanome, nous fournissons un protocole détaillé pour un système de co-culture 2D des adipocytes de la moelle osseuse avec des cellules de mélanome.
Protocol
Representative Results
Discussion
Cocultures avec inserts ont été largement utilisés pour étudier les interactions cellule-cellule. Le système de co-culture 2D est un moyen efficace d’observer comment les deux pièces de diaphonie in vitro, par lequel nous avons montré ici deux différente axée sur la cellule les effets cancérogènes sur les adipocytes de la moelle osseuse. Plusieurs laboratoires ont utilisé cette méthode pour étudier la diaphonie entre les adipocytes et les cellules de cancer6,<su…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions Dov Zipori (The Weizmann Institute of Science, Rehovot, Israël) gentiment pour nous donner la cellule stromales de moelle épinière murin ligne 14F1.1. Cette étude a été financée par des subventions de la Fondation nationale des sciences naturelles chinoises (nos 81771729) et l’Université Yongchuan hôpital de Chongqing Medical (Nos. YJQN201330 ; YJZQN201527).
Materials
| DMEM | Invitrogen Inc. | 11965092 | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen Inc. | 16000–044 | |
| Phosphate Buffered Saline | Invitrogen Inc. | 14190-144 | |
| Insulin | Sigma-Aldrich | 91077C | |
| 3-isobutyl-1-methyl-xanthine | Sigma-Aldrich | I5879 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D4902 | |
| Oil Red o | Sigma-Aldrich | O0625 | |
| 24-well plate | Corning | CLS3527 | |
| Transwell insert | Millipore | MCHT24H48 | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140-122 | |
| isopropanol | Sigma-Aldrich | I9516 | |
| 0.25% trypsin | Thermo Scientific | 25200056 | |
| hemocytometer | Bio-Rad | 1450016 | |
| Culture incubator | Thermo Scientific | ||
| 50ml falcon | Corning | CLS430828 | |
| Clean Bench | Thermo Scientific | – | |
| Microscopy | Olympus | – | |
| 200 μL pipet tips | BeyoGold | FTIP620 | |
| 1000 mL pipet tips | BeyoGold | FTIP628 |
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