Summary

Efeitos duplos de fatores derivado de células de Melanoma na diferenciação de adipócitos de medula óssea

Published: August 23, 2018
doi:

Summary

Aqui, apresentamos um sistema confiável e simples bidimensional coculture (2D) para estudar a interação entre as células do tumor e da medula óssea de adipócitos, que revela um duplo efeito de fatores derivado de células de melanoma em adipócitos a medula óssea diferenciação e também coloca um método clássico para o estudo mecanicista da metástase óssea.

Abstract

O crosstalk entre adipócitos de medula óssea e células tumorais pode desempenhar um papel crítico no processo de metástase óssea. Uma variedade de métodos estão disponíveis para estudar a interferência significativa; no entanto, um sistema bidimensional transwell para coculture continua a ser um clássico, confiável e fácil caminho para este estudo de interferência. Aqui, apresentamos um protocolo detalhado que mostra o coculture de adipócitos de medula óssea e células de melanoma. No entanto, tal sistema coculture poderia não só contribuir para o estudo da transductions de sinal de celular das células cancerosas induzidas pela medula óssea adipócitos, mas também para o futuro mecanicista estudo de metástase óssea, que pode revelar novos alvos terapêuticos para o osso metástase.

Introduction

Metástases ósseas são comuns entre pacientes com câncer avançado, mas um tratamento curativo é ainda não está disponível. Além de especializada em armazenamento de energia como gordura, adipócitos podem suportar o crescimento do tumor e metástases em medula óssea e outros órgãos1,2,3,4,5,6. Além disso, adipócitos desempenham um papel essencial na regulação câncer célula biologia7,8,9,10 e metabolismo4,11,12 ,13,14,15,16, como bem como em osso metástase1,4,12. No nicho de medula óssea, adipócitos também podem afetar o comportamento biológico do câncer células4,6,17. A interacção entre a medula óssea adipócitos e células de câncer com osteotropism é significativa para a compreensão da metástase óssea. No entanto, pouco se sabe.

Baseado nos estudos atuais, vários métodos são aplicados a adipócitos, incluindo duas ou três dimensões (2/3D) e ex vivo culturas17,18,19,20,21. Recentemente, Herroon et al desenhou uma nova abordagem de 3D-cultura para estudar as interações dos adipócitos de medula óssea com células de câncer22. Embora o coculture 3D é ideal para imitar fisiológicas interações entre adipócitos e câncer células na vivo, sofre pobre reprodutibilidade22,23. Em comparação com um sistema de coculture 2D, um sistema 3D coculture pode fornecer diferentes fenótipos celulares, tais como célula morfologia21,22,24,25,26. Além disso, a cultura ex vivo de fragmentos de tecido ósseo esponjoso isolado pode levar a uma consequência robusta de adipócitos de células de medula culta17.

Em contraste com os modelos anteriores, no entanto, o modelo de cultura celular 2D continua a ser uma técnica clássica, confiável e fácil para digitalização rapidamente as moléculas do candidato e os fenótipos mudados em adipócitos ou câncer células in vitro1, 4,6,12,15,27. Para entender melhor o crosstalk entre adipócitos de medula óssea e as células de melanoma, nós fornecemos um protocolo detalhado para um sistema 2D coculture dos adipócitos de medula óssea com células de melanoma.

Protocol

Nota: Todas as células, usadas no presente protocolo devem ser adultos pelo menos três gerações após o descongelamento de células congeladas de estoque. 1. colheita fatores de derivado de células de Melanoma Preparações Obter células B16F10 e uma linhagem de células de melanoma de rato.Nota: Para este protocolo, uma linhagem de células de melanoma de rato foi obtida do banco de células-tronco da Academia Chinesa de Ciências. Fa…

Representative Results

Na medula óssea, adipócitos podem aparecer no tumor microambiente1,13,33,34,35 numa fase precoce para apoiar a progressão do tumor através de fatores solúveis ou Ativando a12,osteoclastogenesis6,36, especialmente no contexto da ob…

Discussion

Cocultures com inserções foram amplamente utilizados para estudar as interações de célula para célula. O sistema coculture 2D é uma maneira eficaz de observar como as duas partes crosstalk em vitro, pelo qual mostramos aqui dois efeitos diferentes de câncer orientado a célula na medula óssea de adipócitos. Muitos laboratórios têm utilizado este método para investigar o crosstalk entre adipócitos e câncer células6,12,,<sup clas…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Agradecemos Dov Zipori (Instituto de Ciência Weizmann, Rehovot, Israel) gentilmente para nos fornecer a célula do estroma murino medula óssea linha 14F1.1. Este estudo foi suportado por concessões do chinês Fundação Nacional da ciência Natural (n º 81771729) e a Universidade Yongchuan Hospital de Chongqing médica (n º s. YJQN201330; YJZQN201527).

Materials

DMEM Invitrogen Inc. 11965092
Fetal Bovine Serum Invitrogen Inc. 16000–044
Phosphate Buffered Saline Invitrogen Inc. 14190-144
Insulin Sigma-Aldrich 91077C
3-isobutyl-1-methyl-xanthine Sigma-Aldrich I5879
Dexamethasone Sigma-Aldrich D4902
Oil Red o Sigma-Aldrich O0625
24-well plate Corning CLS3527
Transwell insert Millipore MCHT24H48
Penicillin/Streptomycin Invitrogen 15140-122
isopropanol Sigma-Aldrich I9516
0.25% trypsin Thermo Scientific 25200056
hemocytometer Bio-Rad 1450016
Culture incubator Thermo Scientific
50ml falcon Corning CLS430828
Clean Bench Thermo Scientific
Microscopy Olympus
200 μL pipet tips BeyoGold FTIP620
1000 mL pipet tips BeyoGold FTIP628

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Cite This Article
Wang, J., Wen, J., Chen, X., Chen, G. Dual Effects of Melanoma Cell-derived Factors on Bone Marrow Adipocytes Differentiation. J. Vis. Exp. (138), e57329, doi:10.3791/57329 (2018).

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