تقييم تخثر البلازما في أنسجة الكبد في نموذج حيوانات كبيرة في فيفو
Summary
نقدم هنا بروتوكولا تجريبيا تقييم تخثر البلازما في أنسجة الكبد في الجسم الحي. في نموذج الخنزير، يتم فحص دوران الأوعية الدقيقة بواسطة الليزر دوبلر، ويقاس عمق التخثر الأشيع، درجة الحرارة في موقع تخثر الدم بحرارة الأشعة تحت الحمراء وكاميرا حرارية، ولاصق ختم أثر الموثق بضغط الانفجار التجارب.
Abstract
تخثر البلازما كشكل من أشكال اليكتروكاوتيري يستخدم في جراحة الكبد على مدى عقود لختم سطح قطع الكبد كبيرة بعد ظهرت الرئيسية لمنع نزيف في مرحلة لاحقة. وتبحث فقط سيئة الآثار الدقيقة تخثر البلازما في أنسجة الكبد. في نموذجنا الخنزير، ويمكن النظر في آثار التخثر قريبة من التطبيق السريري. التغيرات ليزر مجتمعة دوبلر مقياس التدفق وجهاز المطياف الضوئي وثائق دوران الأوعية الدقيقة خلال التخثر في عمق النسيج 8 مم نونينفاسيفيلي، توفير المعلومات القابلة للقياس عن الأرقاء يتجاوز الانطباع السريري ذاتية. هو تقييم درجة حرارة الموقع التخثر مع تخثر قبل وبعد حرارة الأشعة تحت حمراء وكاميرا حرارية أثناء تخثر الدم، وقياس درجة حرارة الغاز شعاع ليس ممكناً بفضل العتبة العليا للأجهزة. يقاس مجهريا على الهيماتوكسيلين/ويوزين ملطخة كائن ميكرومتر المقاطع بعد معايرة عمق تخثر الدم ويعطي معلومات دقيقة عن قوة الإعداد-التخثر العمق-العلاقة. يتم فحص أثر الختم على الصفراوية حيث أنه من غير الممكن بالنسبة كواجولاتور بلازما لختم الأوعية الدموية الكبيرة. إجراء تجارب الضغط انفجر خارجاً على أجهزة اكسبلانتيد لاستبعاد ضغط الدم المتعلقة بالآثار.
Introduction
تخثر بلازما الأرغون (APC) أداة تستخدم على نطاق واسع في عملية جراحية في البطن لأكثر من ثلاثة عقود1،2. وأسلوب قياسي لتحقيق الأرقاء الثانوي بعد أن ظهرت الرئيسية بختم الكبد قطع السطح لمنع نزيف بعد3. تخثر البلازما شكل متخصصة من اليكتروكوتيري الترددات الراديوية، التي توفر الطاقة الكهربائية عن طريق قوس الغاز المتأين. توفير الأرقاء اليكتروثيرمال أحادي القطب، هذا الأسلوب noncontact له ميزة منع مسرى إلى التمسك الأنسجة4. شعاع الغاز المتأين تتجه تلقائياً إلى منطقة أدنى المقاومة الكهربائية وتشغيل بعيداً عندما ترتفع المقاومة بسبب الجفاف إلى مناطق أخرى لم مبشور. وهذا ينتج عمق محدودة موحدة تجلط الدم5،6. العوامل المؤثرة على أثر تخثر يتم التفعيل الوقت، إعداد الطاقة جهاز التخثر والمسافة من التحقيق إلى الأنسجة. الهيليوم هو آخر الغاز الناقل، التي يمكن أن تستخدم ل تخثر البلازما7. الدراسات السريرية الأخيرة مركزة على النتائج السريرية بدلاً من غذائها والفنية نتائج3،8،9، بينما الدراسات التجريبية التي تركز على التحقيقات في المختبر 10 أو تجارب على الأجهزة المعزولة perfused11.
يسمح البروتوكول الأساسية دراسة آثار تخثر البلازما في نموذج حيوان كبير قريب من التطبيق السريري باستخدام المعدات البشرية الموحدة على الخنازير: يتم تقييم دوران الأوعية الدقيقة نونينفاسيفيلي بمقياس دوبلر التدفق على ليزر و جهاز المطياف الضوئي، التي أداة قياسية سريرية لهذا دلالة12،13. يتم رصد التغيرات في درجة الحرارة أثناء التخثر مع حرارة الأشعة تحت حمراء وكاميرا حرارية. يقاس عمق التخثر في غذائها الهيماتوكسيلين/ويوزين الملون المقاطع بعد الحصاد لعينات الأنسجة. للمقارنة مع الوسائل الأخرى للارقاء الثانوي، تجري تجارب ضغط الانفجار. على النقيض من التقنيات الموصوفة سابقا14، هذه تجري على أجهزة اكسبلانتيد لاستبعاد ضغط الدم المتعلقة بالآثار. بالإضافة إلى التحقيقات وصف الآثار المحلية تخثر البلازما، يمكن أيضا القيام باختبارات الدم القياسية في الطراز الخنزير.
Protocol
Representative Results
Discussion
أن يتم إنشاء نماذج القوارض لجراحة الكبد ل وقت طويل16. ومع ذلك، نماذج حيوانية كبيرة تقدم مزايا معينة: هناك حاجة إلى أي معدات microsurgical معدات المنطوق القياسي للبشر يمكن أن تطبق، والتقنيات الجراحية قابلة للاستخدام السريري ويمكن أن تكون أساليب التقييم السريري القياسي نقل للتجارب. ع?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفين قد لا شكر وتقدير.
Materials
| Xylazine 20 mg/mL | Vetoquinol GmbH | Xylapan | |
| Ketamine 100 mg/mL | Ceva GmbH | Ceva Ketamine Injection | |
| Atropine 100 mg / 10 mL | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | Atropinsulfat Köhler 100mg Amp. | |
| Propofol | Fresenius Kabi GmbH | Propofol 1% MCT Fresenius | |
| Fentanyl | KG Rotexmedica GmbH | Fentanyl 0,5mg Rotexmedica | |
| Isoflurane | Abbot GmbH | Forene 100% (V/V) 250 mL | |
| Ringer's lactate solution | Baxter Deutschland GmbH | sodium 131mmol/l, potassium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, cloride 111 mmol/l, lactate 29 mmol/l | |
| Surgical disinfactant | Schülke & Mayr GmbH | Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804 | |
| Motorized microscope | Nikon Instruments Europe | Eclipse TE2000-E | |
| Microscope camera | Nikon Instruments Europe | Digitalsight DS-Qi1Mc | |
| Imaging software | Nikon Instruments Europe | NIS elements Vers. 4.40 | |
| Plasma coagulator | Söring GmbH | CPC-1000 | |
| Argon gas | Linde AG | Argon 4.8 | |
| Helium gas | Linde AG | Helium 4.8 | |
| O2C | LEA Medizintechnik GmbH | O2C Version 1212 | with LF-2 or LF-3 probe |
| Infrared thermometer | Voltcraft | VOLTCRAFT IR 260-8S | |
| Thermographic camera | InfraTec GmbH | VarioCAM HD head 820 | |
| Thermographic analysis sofrtware | InfraTec GmbH | IRBIS 3 | |
| Mayer's Hematoxylin solution | Merck 1.09249 | ||
| Eosin solution | VWR International GmbH | Merck 1.09844 | |
| Rollerpump Masterflex L/S easy Load | Cole-Parmer Instrument Company | model 7518-10 | |
| Perfusorpump | B. Braun Melsungen AG | Perfusor secura FT | |
| Digital pressure meter | Greisinger electronic | GMH 3161 | |
| Perfusorsyringe, 50 mL | B. Braun Melsungen AG | REF 8728810 F | |
| Perfusor line, Type IV Standard, PVC Luer lock | B. Braun Melsungen AG | REF 8722960 | |
| 3-Way stopcock, Dicofix C35C | B. Braun Melsungen AG | REF 16494 C | |
| Silk 2-0. 3 metric | Resorba | REF H5F | |
| Vicryl 4-0 Sutupak | Ethicon | V1224H | |
| NaCl 0.9 % | B. Braun Melsungen AG |
References
- Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels. ArchSurg. 111, 392-397 (1976).
- Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury. EurJSurg. 167, 316-318 (2001).
- Frilling, A., et al. Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial. Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).
- Raiser, J., Zenker, M. Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art. J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).
- Farin, G., Grund, K. E. Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications. EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).
- Grund, K. E. Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough?. Endoscopy. 29, 196-198 (1997).
- Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue. J Int Med Res. , (2017).
- Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury. JTrauma. 31, 717-720 (1991).
- Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs. JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).
- Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. Application of argon plasma coagulation in skin surgery. Dermatology. 197, 152-157 (1998).
- Carus, T., Rackebrandt, K. Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model. ISRNSurg. , 518924 (2011).
- Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer. DisEsophagus. , (2008).
- Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers. Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).
- Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs. Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).
- Knobloch, K., et al. Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery. ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).
- Kanzler, S., et al. Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I. Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).
- Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research. Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).
- Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver. Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).
- Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study. Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).
- Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size. AnnSurg. 227, 559-565 (1998).
