Un modèle de souris d’une Obstruction intestinale partielle
Summary
Occlusions intestinales sont une obstruction partielle ou complète de l’intestin qui peut causer des douleurs abdominales, nausées, vomissements et empêchant le passage des selles. Cette procédure de création intestinales partielles obsructions chez la souris est fiable en étudiant les mécanismes qui sous-tendent la croissance des cellules pathologiques et la mort dans l’intestin.
Abstract
Les occlusions intestinales, qui entravent ou bloquent le mouvement péristaltique, peuvent être causées par des adhérences abdominales et plus gastro-intestinal (GI) maladies, y compris des croissances tumorales. Cependant, transformant des mécanismes cellulaires impliqués dans et causés par, occlusions intestinales sont mal comprises. Plusieurs modèles animaux d’occlusions intestinales ont été développées, mais le modèle murin est la plupart du coût/temps efficace. Le modèle de souris utilise l’implantation chirurgicale d’une obstruction intestinale partielle (PO) qui a un taux de mortalité élevé si elle n’est pas réalisée correctement. En outre, souris recevant la chirurgie PO ne se développent pas hypertrophie si un blocus approprié est employé pas ou pas correctement placé. Nous décrivons ici un protocole détaillé pour la chirurgie de PO qui produit fiables et reproductibles des occlusions intestinales avec un taux de mortalité très faible. Ce protocole utilise un anneau de silicone placé chirurgicalement qui entoure l’iléon qui bloque partiellement les mouvements digestifs dans l’intestin grêle. L’obstruction partielle rend l’intestin deviennent dilatés en raison de l’arrêt du mouvement digestive. La dilatation de l’intestin induit hypertrophie de muscle lisse du côté oral de la bague qui progressivement se développe sur deux semaines jusqu’à ce qu’elle entraîne la mort. Le modèle de souris PO chirurgical offre un modèle in vivo de tissu intestinal hypertrophique utile pour étudier les changements pathologiques des cellules intestinales, y compris les cellules musculaires lisses (SMC), cellules interstitielles de Cajal (CIC), PDGFRα+et neuronale cellules lors du développement d’une occlusion intestinale.
Introduction
Occlusions intestinales sont un blocage partiel ou complet dans l’intestin de petite ou grande, qui empêche les aliments digérés, fluides et gaz de se déplacer à travers les intestins1. En raison de l’obstruction, l’obstruction provoque la paroi intestinale pour devenir épaissi, rétrécissement de la lumière2. Une occlusion intestinale peut se produire à la suite de chirurgies abdominales ou pelviennes qui provoquent la formation de tissu d’adhérences abdominales ou de troubles gastro-intestinaux tels que les maladies inflammatoires de l’intestin (maladie de Crohn), hernies, volvulus, diverticulite, sténose, invagination intestinale, constipation, fécalome, pseudo-occlusion, cancers et tumeurs3,4,5. Les occlusions intestinales dans ces cas entraînent souvent l’hypertrophie de la musculeuse de la tunique de l’ intestin6.
PO de la lumière provoque une distension intestinale et augmente l’épaisseur de la couche de muscles lisses autour de l’obstruction en réponse à la nécessité de poursuivre le péristaltisme fonctionnelle7,8,9,10, 11,12,13. Modèles animaux de PO intestinale ont été développés pour étudier hypertrophie de muscle lisse au souris7rats10, cochons d’Inde11, chiens12et chats13 qui constamment se développent une hypertrophie similaire au sein de la couches de muscles intestinaux.
Un modèle murin de PO intestinale est la façon la plus rentable de générer et d’étudier les occlusions intestinales en vivo. Obstruction de l’intestin grêle est effectuées chez la souris à l’aide d’un anneau de silicone placé chirurgicalement entourant l’iléon. Les souris PO a montré une augmentation rapide du nombre de cellules (hyperplasie) et une augmentation dans l’épaisseur de la couche musculaire (hypertrophie) après chirurgie de PO8,15. SMC sont des cellules primaires en plastique qui sont développent dans les couches musculaires lisses en réponse à des conditions hypertrophique14, mais autres cellules comme ICC et cellules PDGFRα+ qui sont étroitement associées à la SMC, sont également remplis à nouveau. Nous avons déjà signalé que les souris PO développent une hypertrophie dans l’intestin grêle, dans laquelle SMC sont dédifférenciées en cellules PDGFRα+ qui sont hautement proliférante7,15,16. À l’inverse, ICC sont dégénéré et perdu au sein des couches de muscle lisse hypertrophié durant l’élaboration du obsruction intestinal,7. Un autre avantage majeur du modèle PO est sa capacité à induire des changements dans le système nerveux entérique et multiplication des patrons moteurs neurogènes. La multiplication majeur neurogène patron moteur dans l’intestin grêle de la souris est le complexe moteur migratoire (MMC), qui est neurogène et ne requiert pas de ICC ou ondes lentes électriques17. Le modèle PO peut donner un aperçu clair de comment les MMCs et nerfs entériques sont remodelés par une obstruction partielle.
Ici, nous vous proposons un protocole murin pour la chirurgie intestinale PO à l’aide d’un anneau de silicone. Souris recevant la chirurgie PO fiable produisent une hypertrophie de la musculeuse de la tunique de l’intestin grêle. Au sein du muscle hypertrophique, SMC, ICC, PDGFRα+et les cellules neuronales sont considérablement remodelées.
Protocol
Representative Results
Discussion
Nous avons démontré que les souris ayant reçu la chirurgie intestinale de PO systématiquement et de façon reproductible développent hypertrophie de muscle lisse intestinal, qui imite une obstruction intestinale humaine. Chirurgies de l’occlusion intestinale ont été développés pour différents animaux dont7de la souris, rats10, cobayes11, chiens chats et12 13. Le modèle murin d’obstruction…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier Benjamin J Weigler, D.V.M., Ph.d. et Walt Mandeville, D.M.V. (ressources animales & Campus fréquentant vétérinaire, Université du Nevada, Reno) pour leurs excellents services animaliers a fourni aux souris ainsi que leurs avocats sur interventions chirurgicales.
Materials
| Surgical drape | Medical and veterinary supplies | SMS40 | 40”X100 yards |
| Underpad, econ, pro plus | Medical and veterinary supplies | MSC281224 | 17×24” |
| Iris scissors | Braintree scientific, Inc | SC-i-130 | |
| Iris scissors | Vantage | V95-304 | |
| Dumont electronic & jeweler tweezers | Dumont | 98-180-3 | |
| Braided absorbable suture | Covidien polysorb | SL-5687G | 5-0, polyglactin |
| Nylon non-absorbable mono filament | AD surgical | S-N618R13 | 6-0, nylon |
| Surgical blade | Dynarex | No.15 | |
| Needle holder | Jacobson microvascular | 36-1342TC | 8.5 inch |
| Scalpel handle | Flinn scientific | AB1049 | |
| Microsurgical scissor | WPI | 503305 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Puralube VET | 3.5 g | |
| Fluriso (isoflurane) | Vetone | V1 502017 | 250 ml |
| Steri-strip reinforced skin closure | 3M | R1547 | |
| Surgical gloves | Medline | MSG2270 | |
| Ear loop face mask | The safety zone | RS700 | |
| Avant gauze non-woven sponges | Caring | PRM25444 | |
| Surgical cup | Admiral craft OYC-2 | 725-A42 | 2.5 oz |
| Swabstick | ChloraPrep | 260103 | 2% w/v Chlorhexidine Gluconate (CHG) and 70% v/v Isopropyl Alcohol (IPA) |
| Cotton tipped applicator | Puritan | 806-WC | |
| Buprenorphine | Zoo pharm | BZ8069317 | 1 mg/ml |
| Gentamycin sulfate | Vetone | G-6336-04 | 100 mg/ml |
| Fast acting gel cream remover | Veet | 8111002 | |
| Syringe | AHS | AH01T2516 | 1 ml with needle |
| Silicon ring | VWR | 60985-720 | 6 mm in length, 4 mm exterior diameter, 3.5 mm interior diameter |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 4-6 weeks old |
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