膠芽腫の異種移植片の生体内イメージング用蛍光分子トモグラフィー
Summary
腫瘍細胞の同所性頭蓋内注入は、脳腫瘍生物学、進行、進化、および治療反応を研究するがん研究に使用されています。リアルタイム生体イメージングと定量腫瘍の臨床神経膠芽腫モデルで質量を提供する蛍光分子腫瘍異種移植片のトモグラフィーをご紹介します。
Abstract
腫瘍はがん細胞の腫瘍を形成できる質量。細胞の発癌性の決定に広く使用されているアプローチは、がん細胞を免疫不全マウスに皮下注射して後表示されるなり、触知腫瘤の測定です。癌細胞の同所性同種注射は最もよく研究されている腫瘍の起源のティッシュのような微小環境に異種移植の導入を目指してください。脳癌研究では、脳のユニークな微小環境で腫瘍の形成および分析を許可する癌細胞の頭蓋内注入が必要です。頭蓋内の異種移植片の生体内イメージングはしみ込んでがんマウスの腫瘍を瞬時に監視します。ここで脳腫瘍異種移植片の蛍光分子トモグラフィー (FMT) の使用を報告します。がん細胞はまず赤外線蛍光タンパク質近く増殖型、免疫不全のマウスの脳に注入し。動物は時間の長時間にわたる腫瘤について定量的な情報を取得するスキャンします。費用対効果、再現性、および信頼性の高い各マウス内腫瘍負担定量化を可能セルがあらかじめラベルします。画像処理基板を注入する必要性を排除し、したがって、動物のストレスを軽減しました。このアプローチの限界は非常に小さい固まり; が検出できないことによって表されるただし、他の技術より大きい固まりのためのより良い解像度があります。薬物治療の有効性または神経膠腫細胞と患者由来サンプルの遺伝的変化の評価に適用できます。
Introduction
がんは、先進国の人間の病気関係した死の主要な原因のひとつです。新しい治療法は、非常に高い死者、早急に必要。膠 (GBM) は、脳腫瘍、脳腫瘍、間質、および免疫細胞の異種個体集団から成る非常に致死的なタイプです。米国の中央脳腫瘍レジストリによると悪性と非悪性脳腫瘍の発生率は 10万人あたり約 22 例です。約 11,000 の新しいケースは、2017年1米国で診断されると予想されます。
前臨床試験は、薬物、プロシージャ、または人間でテスト前に効果を発揮する治療法の可能性を調査します。前臨床試験において最も早い所ステップの 1 つはひと異種移植モデルとして定義されている、ホストの有機体の移植癌細胞を用いた薬物治療の分子標的を見つけることです。頭蓋内脳腫瘍 xenograft モデル患者由来の異種移植片 (PDXs) を使用して、このコンテキスト内で脳腫瘍生物学、進行、進化、および治療反応の研究し、バイオ マーカーの開発、最近では薬物に広く使用されています。スクリーニング、およびパーソナライズされた医学2,3,4。
最も手頃な価格で非侵襲的体内イメージング手法頭蓋内の異種移植片を監視するための 1 つは生物発光イメージング (結合)5,6,7,8です。ただし、いくつかのバリの制限、基板管理、可用性、酵素安定性と光焼入れおよび集録9イメージング中に散乱します。ここでは、イメージング法の臨床神経膠芽腫モデルを監視する別の方法として赤外線 FMT を報告します。(今後 FP720 と呼ぶ) 近赤外蛍光タンパク質 iRFP72010,11を表現するこの方法、信号集録と頭蓋内注入 PDXs の定量化、または turboFP635 (今後は FP635 と呼ぶ)FMT のイメージング システムで実行されます。FMT の技術を使用して、同所性同種腫瘍ができる生体内での前に、中に、または治療後で監視臨床観測のための非侵襲的、基板無料かつ定量的に。
Protocol
Representative Results
Discussion
癌は癌研究で広く使用されているし、定評のイメージング技術の数が開発されている: バリ;磁気共鳴画像 (MRI);陽電子放射断層撮影 (PET) 計算された断層撮影 (CT);FMT。これらのアプローチの各客室には長所と短所が最終的に提供される情報の種類とお互いを補完します。最も一般的に使用される、生体内イメージング技術の 1 つはバリ5,6,</s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
GBM PDX 神経幹細胞の博士フレデリック ・ ラング、MD アンダーソンがんセンターに感謝いたします。この作品は、敗戦 GBM 研究共同、腫瘍社会脳国家 (フランク フルナリ) R01 NS080939 (フランク フルナリ)、ジェームス s. マクドネル財団 (フランク フルナリ); の子会社によって支えられました。ホルヘ ・ ベニテスに支えられ賞アメリカの脳腫瘍連合 (ABTA) からは。シロ Zanca はアメリカ イタリア語がん財団特別研究員奨学金によって部分的に支えられました。フランク フルナリ癌研究所から給与とその他のサポートを受け取ります。
Materials
| DMEM/High Glucose | HyClone/GE | SH30022.1 | |
| DMEM/F12 1:1 | Gibco | 11320-082 | |
| FBS | HyClone/GE | SH30071.03 | |
| Accutase | Innovative cell technologies | AT-104 | |
| Trypsin | HyClone/GE | SH30236.01 | |
| B27 supplement | Gibco | 17504044 | |
| human recombinant EGF | Stemcell Technologies | 2633 | |
| human recombinant FGF | Stemcell Technologies | 2634 | |
| DPBS | Corning | 21-031-00 | |
| FACS tubes | Falcon | 352235 | |
| DAPI | ThermoFisher Scientific | 62248 | |
| Blasticidin | ThermoFisher Scientific | A1113903 | |
| p24 ELISA | Clontech | 632200 | |
| Xylazine | Akorn | NDC 59399-110-20 | |
| Ketamine | Zoetis | NADA 043-403 | Controlled substance |
| Ointment | Dechron | NDC 17033-211-38 | |
| Absorbable suture | CpMedical | VQ392 | |
| 5 ul syringe | Hamilton | 26200-U | Catalog number as sold by Sigma-Aldrich |
| Cell Sorter | Sony | SH8007 | |
| Mouse stereotaxic frame | Stoelting | 51730 | |
| Motorized stereotaxic injector | Stoelting | 53311 | |
| Micromotor hand-held drill | Foredom | K1070 | |
| Mouse warming pad | Ken Scientific Corporation | TP-22G | |
| Fluorescence Tomography System | PerkinElmer | FMT 2500 XL | |
| TrueQuant Imaging Software | Perkin Elmer | 7005319 | |
| Ultra-centrifuge Optima L-80 XP | Beckman Coulter | 392049 | |
| Tissue Culture 100mm Dishes | Olympus Plastics | 25-202 | |
| Tissue Culture 150mm Dishes | Olympus Plastics | 25-203 | |
| Tissue Culture Flasks T75 | Corning | 430720U | |
| 50 mL conical tubes | Corning | 430290 | |
| 15 mL conical tubes | Olympus Plastics | 28-101 | |
| Centrifuge Avanti J-20 | Beckman Coulter | J320XP-IM-5 | |
| Tube, Polypropylene, Thinwall, 5.0 mL | Beckman Coulter | 326819 | |
| Tube, Thinwall, Polypropylene, 38.5 mL, 25 x 89 mm | Beckman Coulter | 326823 | |
| Athymic nude mice | Charles River Laboratories | Strain Code 490 (Homozygous) | Prior approval by the Institutional Animal Care Program and by the Institutional Biosafety Committee required. |
References
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