무척 추 동물 모델 시스템으로 독성 테스트 실험실에서 초파리 를 사용 하 여 실험 프로토콜

요약

이 종이 다른 발달 단계에서 phenotypic 출력의 범위에 노출의 영향을 공부 하 고의 목표를 가진 오염 물질을 속 초파리 에서 종 노출 및 이상 한 세대에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

초록

응급 속성 및 외부 요인 (인구 수준 및 생태계 수준에서에서 상호 작용, 특히) 하지만 그들은 거의 독성 연구에서 고려 생태학적으로 중요 한 끝점, 중재에 중요 한 역할을 재생 합니다. D. melanogaster 이용과, 몇 가지 이름을 행동, 신경, 그리고 유전자에 미치는 영향에 대 한 독성 모델로 떠오르고 있다. 더 중요 한 것은, 속 초파리 에서 응급 속성 및 독성 연구에서 생태학적으로 관련 질문에 응답 하는 통합 프레임 워크 접근을 위한 모델 시스템으로 활용할 수 있습니다. 이 종이의 목적은 phenotypic 출력 및 생태 관련 질문의 범위에 대 한 모델 시스템으로 사용 될 오염 물질을 속 초파리 에서 노출에 대 한 프로토콜을 제공 하는 것입니다. 좀 더 구체적으로,이 프로토콜은 1로 사용할 수 있습니다) 여러 생물학 조직의 수준 연결 및 두 개인 및 인구 수준 피트 니스;에 유독의 영향을 이해 2) 테스트 이용과 발달 노출;의 여러 단계에서의 영향 3) 테스트 대가족제 및 진화 의미 오염 물질; 그리고 4) 동시에 여러 오염 물질과 스트레스 테스트.

서론

매년, 약 1000 새로운 화학 물질 화학 산업^1,2;에 의해 소개 된다 그러나, 이러한 화학 물질의 단지 작은 비율의 환경에 미치는 영향 유통^2,3전에 테스트 됩니다. 대규모 재해는 일반적인, 오염 물질의 큰 다양 한 sublethal 및 만성 노출은 둘 다 인간과 야생 동물^4,5에서 광범위 한. Ecotoxicology 및 환경 독물학의 역사적인 초점 생존^6, 에 오염 물질의 영향을 측정 하는 수단으로 치 사 율, 단일 화학 노출, 급성 노출과 노출의 생리 적 효과 테스트 하는 것 이었다 ^{7 , 8 , 9 , 10}. 역할 때문에 현재 접근 제한 동물 실험을 윤리적이 고 비-침략 적 접근으로....

프로토콜

다음 프로토콜은 독 소의 구강 섭취가 적절 한; 때 오염된 매체에 초파리 속에서 후방에 사용 되는 실험 프로토콜 노출의 다른 형태는 초파리 모델^11,15,,1626를 사용 하 여 가능 합니다. 이 프로토콜에서 설명 하는 방법 이전 허쉬 외. 으로 설명 되었습니다. ¹⁹ 와 피터슨 외. ^{23 , 24 , 25}.

1. 연구 실험실에서 초파리 의 주식 인구를 설정

1. 일정 온도, 빛: 다크 사이클 및 테스트 종의 환경 설정에 따라 습도 부 화기를 설정 하 여 초파리 의 집 주식 인구는 환경 제어 인큐베이터 (또는 작은 방)을 설정 합니다.
   참고: 기본 환경 조건 연구에 대 한 선택한 종족의 기본 생태....

결과

구두 노출 함으로써 초파리 개발을 통해 contaminant(s)에, 다양 한 독성에 관한 질문은 생물 학적 조직의 서로 다른 수준에서 초파리 를 노출 하 여 테스트할 수 있습니다. 이 섹션에서는 이전에 게시 논문^23,24에서이 프로토콜을 사용 하 여 얻은 대표적인 결과 합니다. 특히,이 프로토콜은 이전 축적, 제거 및 노출의 같은 세대 자손²³; 1 세대에 걸쳐 내 납 (Pb)의 격리 사용 그리고 메이 트 선택²⁴에 축적의 의미를 공부 합니다.

표 1 과 그림 4

토론

초파리 melanogaster 유전자와 D. melanogaster 그리고 인간^13,14사이 통로의 광범위 한 보존으로 인해 생물 학적 과정의 범위에 대 한 강력한 모델로 설립 되었습니다. 같은 이유로 그것은 의료 과학에 대 한 강력한 모델, 초파리 는 독물학 끝점의 범위에 anthropogenic 오염의 영향을 공부 하기 적합 한 모델 시스템으로 떠오르고 있다. 여러 실험실 성공적으로 사용 하는 D. melanogaster 모델 시스템으로 다양 한 화합물, 중 금속^11,,1618-25,

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Carolina Biological Instant Drosophila Medium Formula 4-24	Carolina Biological	173204
Drosophila 바이알, Narrow (PS), 폴리스티렌, Superbulk, 1000 바이알/단위	Genessee Scientific	32-116SB	파리를 보관하는 데 사용
Flugs 바이알 및 병용 마개, 좁은 플라스틱 바이알	Genessee Scientific	49-102	파리를 보관하는 데 사용
골판지 트레이, 트레이 좁은,	좁은 Genessee Scientific	32-124	파리의 개체군을 구성하는 데 사용됩니다
골판지 트레이, 칸막이만, 좁은	Genessee Scientific	32-126	파리의 개체군을 조직하는 데 사용됩니다
Thermo Scientific  Nalgene 스퀘어 와이드 마우스 HDPE 병 클로저	Fischer Scientific	03-312D	오염물 저장에 유용
Thermo Scientific  Nalgene 색상으로 구분된 LDPE 세척 병	Fischer Scientific	03-409-17C	오염물질 저장에 유용
Eppendorf  리피터 M4 수동 핸드헬드 피펫 디스펜서	Fischer Scientific	14-287-150	매체
Combitips Advanced Pipetter Tips - Standard, Eppendorf Quality Tips	Fischer Scientific	13-683-708	제조에 사용
, 표준 크기(8.1 X 11.6cm)	Genessee Scientific	59-114	파리 마취에 사용
Flystuff 풋 밸브	Genessee Scientific	59-121	파리를 마취시키는 데 사용
튜빙, 녹색 (1 연속 피트/단위)	Genessee Scientific	59-124G	파리를 마취시키는 데 사용
미네랄 오일, 빛, 흰색, 고순도 등급, 500 mL HDPE 병	VWR	97064-130	시체 안치소를 만드는 데 사용
유리 삼각 플라스크 세트 - 3가지 크기 - 50, 150 및 250ml, Karter Scientific 214U2	월마트	적용되지 않음	시체 안치소를 만드는 데 사용
BGSET5 유리 비커 5개 세트	월마트
근친 또는 야생형 라인 Drosophila	Bloomington Drosophila 주식 센터 인디		https://bdsc.indiana.edu
야생 인구 Drosophila	UC 샌디에이고 Drosophila 재고 센터		https://stockcenter.ucsd.edu/info/welcome.php

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