ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण के लिए Candida albicans त्वचा संक्रमण के एक मॉडल के रूप में डीप चमड़े का इंजेक्शन
Summary
यहां हम एक प्रोटोकॉल है कि ऊतकवैज्ञानिक और Candida albicans intradermal इंजेक्शन के बाद त्वचा के नमूनों की आणविक विश्लेषण की अनुमति देता है का वर्णन । इस प्रोटोकॉल त्वचा के संरचनात्मक अखंडता का कहना है और ऊतक के स्थानीयकरण के लिए अनुमति देता है निवासी या नव भर्ती प्रतिरक्षा कोशिकाओं के रूप में अच्छी तरह के रूप में रोगज़नक़ वितरण ।
Abstract
त्वचा शरीर का एक अत्यंत विस्तारित अंग है और, इस बड़ी सतह के कारण, यह लगातार सूक्ष्मजीवों के संपर्क में है । त्वचा को नुकसान आसानी से dermis जो, बारी में, खून में रोगजनकों के प्रसार में परिणाम कर सकते में संक्रमण के लिए नेतृत्व कर सकते हैं । समझ कैसे प्रतिरक्षा प्रणाली बहुत प्रारंभिक चरण में संक्रमण लड़ता है और कैसे मेजबान रोगजनकों को खत्म कर सकते है एक महत्वपूर्ण कदम के लिए भविष्य उपचारात्मक उपायों के लिए आधार निर्धारित है । यहां हम Candida albicans संक्रमण है कि प्रक्रियाओं है कि एक संक्रमण के दौरान जल्दी हो कल्पना कर सकते है की एक मॉडल का वर्णन, सहित जब रोगज़नक़ उपकला बाधा पारित कर दिया है, साथ ही प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया सी. albicans द्वारा बटोरा आक्रमण. हम ऊतकवैज्ञानिक विश्लेषण प्रदर्शन है कि प्रतिरक्षा कोशिकाओं है कि त्वचा के रूप में अच्छी तरह से उपस्थिति और रोगज़नक़ के स्थानीयकरण घुसपैठ दिखाने के लिए इस संक्रमण मॉडल का इस्तेमाल किया । संक्रमण के बाद एकत्र नमूने आरएनए निष्कर्षण के लिए संसाधित किया जा सकता है ।
Introduction
मानव शरीर सूक्ष्मजीवों की एक अत्यंत उच्च संख्या के साथ कवर किया जाता है । त्वचा की सतह प्रति वर्ग सेंटीमीटर1के लगभग १,०००,००० बैक्टीरिया का वास है । यह संख्या, तथापि, सूक्ष्मजीवों कि त्वचा उपनिवेश करता की पूर्ण विविधता को प्रतिबिंबित नहीं करता है । बैक्टीरिया के अलावा, मानव शरीर श्लैष्मिक और त्वचा स्तर2में दोनों जीवित रहने के लिए सक्षम है, जो सी. albicansसहित कई कवक प्रजातियों, द्वारा बृहदांत्र है ।
हाल के वर्षों में, फंगल संक्रमण के साथ निदान लोगों का प्रतिशत भारी वृद्धि हुई है । यह मुख्य रूप से प्रतिरक्षा व्यक्तियों, यानी, एचआईवी पॉजिटिव रोगियों और रोगियों कि प्रत्यारोपण के बाद या तो कीमोथेरेपी या immunosuppressive दवाओं के माध्यम से चला गया है की अधिक संख्या के कारण है3। एक निगरानी संयुक्त राज्य अमेरिका, Wisplinghoff एट अल में प्रदर्शन किया अध्ययन में दिखाया गया है कि nosocomial खून संक्रमण के ९.५% Candida प्रजातियों की वजह से थे4। फंगल संक्रमण की वृद्धि हुई घटना के कारण, और विशेष रूप से Candida प्रजातियों के ऊंचा प्रतिशत के कारण खून के संक्रमण के दौरान पाया, समझ कैसे इस रोगज़नक़ प्रतिरक्षा प्रणाली के नियंत्रण से बच जाता है अत्यंत महत्वपूर्ण.
C. albicans एक dimorphic कवक है जो विभिन्न रूपात्मक रूपों जैसे खमीर, blastospores, pseudohyphae, और hyphae पर्यावरणीय स्थितियों के आधार पर5में बढ़ता है । अपने hyphal रूप में, सी albicans अपनी सर्वोच्च इनवेसिव क्षमता से पता चलता है और उपकला6घुसना करने की क्षमता है ।
C. albicans संक्रमण कई प्रायोगिक दृष्टिकोण का उपयोग कर अध्ययन किया गया है । संक्रमण का सबसे आम मॉडल सी. albicans खमीर7की नसों में इंजेक्शन है । हालांकि, इस मॉडल को ध्यान में सभी प्रक्रियाओं है कि कवक से पहले होने के लिए खून में फैल प्रबंधन नहीं ले करता है । एक अंय मॉडल उपकला पर आक्रमण करने के लिए C. albicans की क्षमता का लाभ लेता है । इस विधि, भी रेत कागज8मॉडल के रूप में जाना जाता है, Gaspari एट अल द्वारा विकसित किया गया था १९९८9में, और रेत कागज का उपयोग करने के लिए त्वचा abrade, इस प्रकार सी albicansलागू करने से पहले परत corneum को नष्ट करने के होते हैं । इस प्रक्रिया कवक उपकला घुसना, इस प्रकार इस रोगज़नक़ की आक्रामक क्षमताओं के विश्लेषण को सक्षम करने की अनुमति देता है । अंत में, जठरांत्र संबंधी10 और श्वसन तंत्र11 के लिए संक्रमण के अंय मॉडलों के विभिंन अध्ययनों में इस्तेमाल किया गया है ।
एक घाव के गठन (के रूप में रेत कागज मॉडल में) प्रतिरक्षा कोशिका भर्ती और सक्रियण सहित कई रास्ते, के सक्रियकरण का कारण बनता है, ताकि चिकित्सा प्रक्रिया को बढ़ावा देने के लिए12। यह या तो बदल या मुखौटा प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया विशेष रूप से रोगज़नक़ के खिलाफ प्राप्त कर सकते हैं, इस प्रकार परिणाम को पाने के लिए अग्रणी ।
यहां हम त्वचा संक्रमण की एक विधि का वर्णन है कि प्रारंभिक घाव गठन से बचा जाता है और एक बेसल भड़काऊ वातावरण की प्रेरण । बरकरार उपकला संरचना को बनाए रखने के लिए, हम सीधे गहरी derma में अपने hyphal रूप में सी. albicans इंजेक्षन. हालांकि एक भी इंजेक्शन हल्के सूजन को बाहर कर सकते हैं, सूजन की मात्रा सीमित है और रेत कागज मॉडल में के रूप में एक खुले घाव के गठन की तुलना में प्रतिबंधित है । दृष्टिकोण है कि हम यहां वर्णन कवक संक्रमण और प्रसार के लिए प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के अध्ययन की अनुमति देता है जबकि अत्यधिक और पूर्व मौजूदा भड़काऊ यांत्रिक क्षति की वजह से पर्यावरण से परहेज ।
Protocol
Representative Results
Discussion
यहां हम सी. albicans संक्रमण की एक विधि का वर्णन करने के लिए भड़काऊ प्रक्रिया है कि गहरी derma में कवक प्रवेश द्वार पर शुरू की है अध्ययन ।
हालांकि त्वचा फोड़ा गठन सी albicans संक्रमण15पर एक अप?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
FG ला Ricerca सुल कांसरो (़ 2016Id. 18842), Cariplo फाउंडेशन (ग्रांट 2014-0655), और Fondazione Ricerca प्रति ला Biomedica (FRRB) के अनुसार Associazione Italiana प्रति समर्थित है ।
IZ NIH अनुदान 1R01AI121066 द्वारा समर्थित है-01A1, 1R01DK115217, HDDC P30 DK034854 अनुदान, हार्वर्ड मेडिकल स्कूल मिल्टन पाया, CCFA वरिष्ठ अनुसंधान पुरस्कार (४१२७०८), Eleanor और मील के किनारे 50 वीं वर्षगांठ फैलोशिप कार्यक्रम, और Cariplo फाउंडेशन ( 2014-0859) ।
Materials
| Reagents | |||
| PBS | Euroclone | ECB4053L | warm in 37 °C bath before use |
| H-OCT compound | histo-line laboratories | R0030 | |
| Gill's Hematoxilyn | histo-line laboratories | 09-178-2 | |
| Eosin Y solution, alcoholic | histo-line laboratories | 09-209-05 | |
| Ethanol absolute | scharlau | ET00232500 | |
| Citro-HISTOCLEAR | histo-line laboratories | R0050 | |
| Eukitt, mounting medium | bio-optica | ||
| Acetone | sigma-aldrich | 179124 | |
| PAS staining system | sigma-aldrich | 395B-1KT | |
| Bacto Peptone | BD | 211677 | |
| Bacto Yeast Extract | BD | 212750 | |
| D(+)-Glucose anhydrous for molecular biology | Applichem PanReac | 50-99-7 | |
| Uridine | Merck Millipore | 8451 | |
| HEPES | Applichem PanReac | A1070,0500 | |
| Safe-Lock tubes 2 mL | eppendorf | 30121597 | |
| TRIzol Reagent | Life Technologies | 15596018 | Toxic, corrosive and mutagen. Use all precaution needed |
| Rneasy Mini Kit | QIAGEN | 74104 | |
| liquid nitrogen | Wear eye protection | ||
| Instrument | |||
| Coulter Counter-Particle Count | Beckman Coulter | ||
| Centrifuge 5415 R | eppendorf | ||
| MC 3000 Microtome Cryostat | histo-line laboratories | ||
| TissueLiser | QIAGEN | ||
| Materials | |||
| 0.3 ml Insulin Syringe with a 30G x 8mm needle | BD | 324826 | |
| Surgical forceps | |||
| Surgical scissors | |||
| Base mould disposable | histo-line laboratories | 2781 | |
| Positively charged bio microscope slides | bio-optica | 09-2000 | |
| Cover slips 24 x 50 mm | thermo scientific | 11911998 |
References
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