Murine बाहर बृहदांत्रसंमिलन, C57BL में मोड़ कोलाइटिस का एक उपंयास मॉडल/
Summary
Murine बाहर बृहदांत्रसंमिलन मानव मोड़ कोलाइटिस, पेट खंड में एक मुख्य रूप से लिम्फोसाईटिक कोलाइटिस के लिए एक Murine मॉडल मल धारा से बाहर रखा प्रदान करता है ।
Abstract
मोड़ कोलाइटिस (डीसी) एक चौपट enterostomy का एक परिणाम के रूप में मल धारा से बाहर रखा आंत्र क्षेत्रों के साथ रोगियों में होने वाली एक लगातार नैदानिक स्थिति है । इस रोग के एटियलजि बीमार परिभाषित रहता है, लेकिन इस तरह के Crohn रोग और अल्सरेटिव कोलाइटिस के रूप में शास्त्रीय भड़काऊ आंत्र रोगों की है कि से अलग करने के लिए प्रकट होता है । pathophysiological इस रोग के विकास के लिए अग्रणी तंत्र को समझने के उद्देश्य से अनुसंधान बुरी तरह से एक उचित murine मॉडल की कमी से प्रभावित किया गया है । इस प्रोटोकॉल डीसी के एक murine मॉडल है कि प्रतिरक्षा प्रणाली की भूमिका और डीसी के विकास में microbiome के साथ अपनी बातचीत के अध्ययन की सुविधा उत्पंन करता है । C57BL/6 जानवरों का उपयोग कर इस मॉडल में, बृहदांत्र के बाहर के भागों एक बाहर बृहदांत्रसंमिलन बनाने के द्वारा मल धारा से बाहर रखा जाता है, बाहर आंत्र क्षेत्रों में सूजन उदारवादी के लिए हल्के के विकास को ट्रिगर और मानव की पहचान घावों reproducing एक उदारवादी प्रणालीगत भड़काऊ प्रतिक्रिया के साथ डीसी । चूहे मॉडल के विपरीत, C57BL/6 पृष्ठभूमि पर आनुवंशिक रूप से संशोधित murine मॉडल की एक बड़ी संख्या में उपलब्ध हैं । हमारे मॉडल के साथ इन जानवरों के संयोजन की अनुमति देता है व्यक्तिगत साइटोकिंस, chemokines, या सक्रिय अणुओं के रिसेप्टर्स की संभावित भूमिकाओं (जैसे, interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine रिसेप्टर्स CXCR5 और CCR7, और sphingosine-1-फॉस्फेट रिसेप्टर 4) डीसी के रोगजनन में मूल्यांकन किया जाना है. C57BL/6 पृष्ठभूमि पर congenic माउस उपभेदों की उपलब्धता काफी हद तक डीसी के एटियलजि में शामिल विशिष्ट कोशिका प्रकार की भूमिकाओं को स्थापित करने के लिए स्थानांतरण प्रयोगों की सुविधा. अंत में, मॉडल स्थानीय हस्तक्षेप के प्रभाव का आकलन करने का अवसर प्रदान करता है (जैसे, स्थानीय microbiome या स्थानीय विरोधी भड़काऊ चिकित्सा के संशोधन) प्रभावित और गैर प्रभावित आंत्र खंडों में श्लैष्मिक उन्मुक्ति पर और प्रणालीगत प्रतिरक्षा homeostasis ।
Introduction
हाल के वर्षों में, गैर संक्रामक कोलाइटिस की एक पर्याप्त संख्या संस्थाओं के शास्त्रीय भड़काऊ आंत्र रोगों से अलग (IBDs; यानी, Crohn की बीमारी या कोलाइटिस ulcerosa) मनुष्यों में चिकित्सकीय और histopathologically विशेषता रही है । इन कोलाइटिस रूपों के विकास के लिए अग्रणी pathophysiological तंत्र पूरी तरह से आंशिक रूप से समझ में नहीं हैं, क्योंकि उपयुक्त पशु मॉडल दुर्लभ हैं । मोड़ कोलाइटिस इन हाल ही में वर्णित संस्थाओं में से एक है । हालांकि शब्द Glotzer1द्वारा १९८० में गढ़ा गया था, एक समान phenotype के प्रारंभिक विवरण १९७२ में Morson2द्वारा दिया गया था । रोग चौपट enterostomy के साथ रोगियों के ९१% करने के लिए ५०% में विकसित करता है, और इसके नैदानिक तीव्रता3,4बदलता है । संयुक्त राज्य अमेरिका में लगभग १२०,००० बृहदांत्रसंमिलन रोगियों की वार्षिक घटनाओं को देखते हुए, इस रोग इकाई एक महत्वपूर्ण स्वास्थ्य समस्या का गठन किया ।
इस प्रोटोकॉल के विकास के समग्र लक्ष्य के लिए एक murine डीसी मॉडल है कि एक कोलाइटिस ट्रिगर पर निर्भर करता है कि मानव डीसी में देखा और जो मानव रोग के प्राथमिक histopathological सुविधाओं reproduces के समान प्रदान किया गया । अन्य murine कोलाइटिस मॉडल के विपरीत, हमारे मॉडल में कोलाइटिस प्रेरण आनुवंशिक रूप से संशोधित जानवरों की आवश्यकता नहीं है (जैसे, IL-7 ट्रांसजेनिक चूहों, एन cadherin प्रमुख नकारात्मक चूहों, या TGFβ-/ चूहों), रासायनिक के आवेदन परेशान पदार्थ (जैसे, dextran सल्फेट सोडियम (DSS)-प्रेरित कोलाइटिस, या trinitrobenzene sulfonic एसिड (TNBS)-प्रेरित कोलाइटिस), या प्रतिरक्षा कमी चूहों में विशिष्ट कोशिका आबादी के हस्तांतरण (CD45RBउच्च हस्तांतरण के रूप में कोलाइटिस का मॉडल) (एक समीक्षा के लिए,5देखें) । अंय मॉडलों के विपरीत, हमारे डीसी मॉडल के बरकरार प्रतिरक्षा प्रणाली डीसी विकास में शामिल प्रतिरक्षा तंत्र के आकलन की अनुमति देता है । बाहर आंत्र खंड के लिए श्लैष्मिक सूजन की सीमा जठरांत्र संबंधी मार्ग के अन्य भागों में श्लैष्मिक उन्मुक्ति पर इसके नतीजे का आकलन की अनुमति देता है, आंत्र पथ के अन्य प्रतिरक्षा डिब्बों में प्रतिरक्षा homeostasis पर (उदा. , Peyer के धब्बे और mesenteriale लिम्फ नोड्स), और पूरे जीव की प्रतिरक्षा homeostasis पर । अंत में, हमारे मॉडल स्थानीय भड़काऊ दोनों स्थानीय microbiome के रूप में अच्छी तरह से पाचन प्रतिजनों के लिए सामांय स्थानीय वातावरण में परिवर्तन से उत्पंन उत्तेजनाओं को नियंत्रित करने के तंत्र की जांच के लिए एक उपयुक्त उपकरण का गठन किया ।
Protocol
Representative Results
Discussion
इस प्रोटोकॉल में प्रस्तुत डीसी के murine मॉडल मज़बूती से मानव डीसी (जैसे, सूजन आंत्र क्षेत्रों के म्यूकोसा में लसीकावत् कूप के de नोवो विकास के histopathological सुविधाओं reproduces, तहखाना छोटाहै, और में कटौती प्याला ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
कोई
Materials
| Operation material | |||
| heat underlay, 6 watt | ThermoLux, Witte + Sutor GmbH | 461265 | |
| Ethanol 70% (with methylethylketon) | Pharmacie of the University Hospital Greifswald | ||
| Wooden applicators, small cotton head onesided, wooden stick, 150 mm length | Centramed GmbH, Germany | 8308370 | for disinfection of operation field |
| Scissor | Aesculap (BRAUN) | BC064R | |
| Atraumatic DeBakey forceps | Aesculap (BRAUN) | OC021R | |
| Needle holder | Aesculap (BRAUN) | BM012R | |
| Vasofix Safety i.v. cannula 22G | Braun Melsungen AG, Germany | 4268091S-01 | |
| VICRYL Plus 4-0 violet braided; V-5 17 m 1/2c; 70 cm | ETHICON, Inc. | VCP994H | |
| PDS II 6-0 monofil; V-18 13 mm 3/8c; 70 cm | ETHICON, Inc. | Z991H | |
| BD Plastipak 1 mL (Syringes with needle with sterile interior) | BD Medical | 305501 | |
| Triacid-N (N-Dodecylpropan-1,3-diamin) | ANTISEPTICA, Germany | 18824-01 | disinfection of surgical instruments in ultrasonic bath |
| Medications | |||
| ketamine 10%, 100 mg/mL (ketamine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 9089.01.00 | 87 mg/kg i.p. |
| Xylasel, 20 mg/mL (xylazine hydrochloride) | selectavet, Dr. Otto Fischer GmbH | 400300.00.00 | 13 mg/kg i.p. |
| NaCl 0.9% | Braun Melsungen AG, Germany | 6697366.00.00 | |
| Buprenovet 0.3 mg/mL (buprenorphine) | Bayer, Germany | PZN: 01498870 | 0.1 mg/kg s.c. |
| Tramal Drops, 100 mg/mL (tramadol hydrochloride) | Grünenthal GmbH, Germany | 10116838 | 1 mg/mL drinking water |
| Ceftriaxon-saar 2 g (ceftriaxone) | Cephasaar GmbH, Germany | PZN: 08844252 | 25 mg/kg body weight i.p. |
| metronidazole 5 mg/mL | Braun Melsungen AG, Germany | PZN: 05543515 | 12.5 mg/kg body weight i.p. |
| Food | |||
| ssniff M-Z Ereich | ssniff, Germany | V1184-3 | |
| Solid Drink Dehyprev Vit BIO, pouches | TripleATrading, the Netherlands | SDSHPV-75 | |
| Equipment | |||
| Nikon Eclipse Ci-L | Nikon Instruments Europe BV, Germany | light microscopy | |
| VetScan HM 5 | Abaxis, USA | 770-9000 | Veterinary hematology analyzer of 50 µl venous EDTA-blood |
| Bandelin SONOREX (Ultrasonic bath) | Bandelin electronics, Germany | RK 100 H | disinfection of surgical instruments |
| Software | |||
| NIS-Element BR4 software | Nikon Instruments Europe BV, Germany | ||
| GraphPad Prism Version 6 | GraphPad Software, Inc. |
References
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