Summary

猪临床敷料评价模型中的严重烧伤

Published: November 06, 2018
doi:

Summary

要密切模仿烧伤的模式, 需要临床观察和动物模型研究之间的相互作用。本研究建立了严重烧伤猪模型, 以评估生理和病理生理环境下的实验敷料。

Abstract

伤口愈合是一个动态的修复过程, 是人类生活中最复杂的生物过程。在对烧伤的反应, 生物途径的改变损害炎症反应, 导致延迟伤口愈合。糖尿病患者经常出现伤口愈合障碍, 导致截肢等不利结果。因此, 敷料具有有益的作用, 促进烧伤伤口修复是必要的。然而, 由于缺乏适当的动物模型, 烧伤伤口治疗的研究有限。我们以前的研究证明了在大鼠和猪模型中使用微创手术技术的伤口愈合性能。这项研究的目的是证明严重烧伤的猪模型, 消除伤口收缩, 更接近人类的过程再上皮化和新的组织形成。该协议提供了一个详细的程序, 以创建一致的烧伤伤口, 并检查伤口愈合性能的治疗实验敷料在猪模型。在背面对称地造成了6处烧伤伤口, 其中覆盖着一个由四层组成的临床敷料: 实验材料的内接触层, 防水薄膜的内部中间层, 纱布的外层中间层,和一层外层的粘合剂石膏。实验结束后, 检查伤口闭合、伤口面积、温哥华疤痕量表评分。从每只动物祭祀后切除的皮肤样本进行组织学准备, 并使用血红素和 eosin 染色染色。还检查了每个敷料在伤口愈合情况下的抗菌活性。临床敷料在猪模型中对伤口的应用模拟了人类伤口愈合的生物学过程, 即上皮化、细胞增殖和血管生成过程。因此, 这种猪模型提供了一个易于学习, 成本效益高, 和强大的方法来评估临床敷料在严重烧伤的效果。

Introduction

烧伤引发炎症过程, 诱发复杂的病理影响, 在事故发生后立即影响众多身体功能, 对患者生活质量产生负面影响。创伤愈合障碍导致糖尿病 1,2例患者显著发病率和死亡率。大多数烧伤患者在烧伤伤口清创过程中都会出现疼痛, 这被称为一个痛苦的过程, 尽管使用了强大的阿片类镇痛药 3.

与其他哺乳动物不同的是, 猪在上皮化、细胞增殖和血管生成过程中与人类有几个解剖和生理特征。这使得猪成为某些程序和研究的潜在更好的模型, 它们经常被用于随后的研究中, 这些研究在小鼠身上证明了有希望的结果。这些特征导致在临床前检测中越来越多地使用猪作为主要物种。最近, 观察到心血管、泌尿系统、综合系统和消化系统方面的生物医学研究迅速增加。这项研究的目的是证明一个猪模型的严重烧伤, 消除伤口收缩, 并提供了一个更接近的近似人类伤口愈合过程和新组织的形成。在背侧对称地造成了6处烧伤的伤口, 猪脊椎两侧各有3处烧伤。接下来, 在严重烧伤的猪模型中进行了实验敷料检查, 该模型可用于复制人类伤口愈合 (图 1)。伤口上覆盖着一个临床敷料, 它由四层组成: 实验材料的内接触层、防水薄膜的内层、纱布的外层和胶粘剂石膏的外层。防水薄膜保持伤口环境湿润, 同时防止细菌感染, 并允许气体渗透敷料。将纱布的外层涂在防水薄膜上, 并由外层胶粘剂石膏固定。实验结束后, 对创面闭合、伤口面积、温哥华疤痕量表 (vss) 评分进行了检查。用血红素和 eosin (he) 染色对每种动物的皮肤进行组织学准备和染色。该模型还检查了每个敷料在伤口愈合情况下的抗菌活性。我们以前的研究已经证明了伤口愈合性能的大鼠和猪模型使用微创手术技术 7。由于每只猪的背侧有6处烧伤伤口, 因此对每种实验敷料进行了测试和评估, 以最大限度地减少与猪背侧不同部位伤口愈合过程有关的偏差。因此, 本研究建立的严重烧伤猪模型为临床敷料的评价提供了新的途径, 促进了烧伤损伤治疗新方法的发展。本研究为揭示烧伤创面愈合的病理生理学提供了重要的工具。

Protocol

涉及动物主体的程序已获得台湾国防医疗中心动物护理委员会的批准。这项研究是在国防医学中心实验动物中心进行的。使用该协议成功地检测了体重在20至25公斤之间的猪。 1. 动物适应人类处理 到达该设施后, 单独安置动物, 但让它们相互互动。 为动物提供食物和水。 通过每天至少处理一次动物, 为期一周, 将猪传播到人类处理和从动物设施到?…

Representative Results

热铁燃烧时间为 30秒, 导致伤口是圆形的, 边缘清晰, 并与红斑边缘均匀苍白 (图 1d)。在每只动物体内, 背上都有6处烧伤伤口。烧伤伤口的排列情况如图 1k所示。烧伤伤口完全覆盖了含有 caps 的敷料, 用于评估烧伤后0、7、21和42天的疤痕形成深度, 并通过总检查确定。烧伤后第42天根据总检查结果, 烧伤伤口重新上皮化。对这些动?…

Discussion

本研究建立了猪严重烧伤模型, 并采用含 caps 敷料对该模型进行了研究。我们的研究结果表明, 该猪模型可用于监测实验敷料的临床性能, 包括抗菌性能。采用 vss、h & amp; e 染色和抗菌试验, 对创面愈合率、创面闭合性和抗菌活性进行了分析。动物烧伤模型的应用已被开发成为一个有价值的工具, 以审查烧伤的病理生理学。使用大鼠作为实验对象有一定的生物学益处, 包括大量的鼠特异性试剂和获得?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

这项研究得到了三科总医院的赠款支持;台湾国防医疗中心 (tgh-c107-042);台湾科技部 (最不发达国家 106-2314-b-016-014);和国防医疗中心 (ma6-106-055;ma6-106-010;mab-107-064)。

Materials

Sedation:
Ketamine Merial 2528 ESP 10 mL vial
Azaperone China chemical & pharmaceutical 47W406 100 mL vial
Atropine  Oriental chemical works IN120802 1 mL vial
Anesthetic:
Tiletamine+Zolazepam Virbac BC91 5 mL vial
Isoflurane Baxter N002A225 100 mL vial
Surgery:
Hair clippers Moser
Povidone iodine scrub solution Ever star HA161202 4 L barrel
Modified iron
Electronic thermometer Dogger A9SA-ST9215C – 50~300℃
0.9% saline solution CHI SHENG KC130 500 mL vial
Gauze China Surgical Dressings Center MO15900080 10 x10 cm
CAPS CoreLeader Biotech Co., Ltd, Taipei, Taiwan
Paper tape 3M NDC-8333-1530-01 2.5 cm x 9.1m
Waterproof film 3M NDC-8333-1600-40 10 cm x 10 m
Adhesive plaster Young chemical BH1426015 10 cm x 10 m
Dissection:
Pair of standard sharp/blunt straight scissors (14 cm) Shinetec instruments ST-S114
Halstead-Mosquito (12.5 cm) Shinetec instruments ST-H012
Handle(# 4) Shinetec instruments ST-H004
Surgical Blade(#21) Shinetec instruments ST-B021
Post-Fixation & Storage:
50 ml Plastic centrifuge tube  Falcon 352070
10% neutral buffered formalin Leica 3800604EG
Bacterial Growth Experiments 
Blood agar plate (BAP) (TSA with 5% sheep blood)  CMP 90 mm Mono

References

  1. Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair Regeneration. 17, 763-771 (2009).
  2. Sen, C. K. Wound healing essentials: let there be oxygen. Wound Repair Regeneration. 17, 1-18 (2009).
  3. Verhaegen, P. D., et al. Differences in collagen architecture between keloid, hypertrophic scar, normotrophic scar, and normal skin: an objective histopathological analysis. Wound Repair Regeneration. 17, 649-656 (2009).
  4. Swindle, M. M., Adams, R. J. . Experimental Surgery and Physiology: Induced Animal Models of Human Disease. , (1988).
  5. Swindle, M. M., Smith, A. C. . Swine as Models in Biomedical Research. , (1992).
  6. Tumbleson, M. E., Schook, L. B. . Advances in Swine in Biomedical Research. Vols 1-2. , (1996).
  7. Wang, C. H., et al. Enhanced wound-healing performance of a phyto-polysaccharide-enriched dressing – a preclinical small and large animal study. International Wound Journal. 14, 1359-1369 (2017).
  8. Rowan, M. P., Cancio, L. C., Elster, E. A., Burmeister, D. M., Rose, L. F., Natesan, S., Chan, R. K., Christy, R. J., Chung, K. K. Burn wound healing and treatment: review and advancements. Journal of Critical Care. 19, 243 (2015).
  9. Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Surgical approaches to create murine models of human wound healing. Journal of Biomedicine and Biotechnology. 969618, 8 (2011).
  10. Gaines, C., Poranki, D., Du, W., Clark, R. A., Van Dyke, M. Development of a porcine deep partial thickness burn model. Burns. 39, 311-319 (2013).
  11. Gnyawali, S. C., Barki, K. G., Mathew-Steiner, S. S., Dixith, S., Vanzant, D., Kim, J., Dickerson, J. L., Datta, S., Powell, H., Roy, S., Bergdall, V., Sen, C. K. High-resolution harmonics ultrasound imaging for non-invasive characterization of wound healing in a pre-clinical swine model. PLoS One. 10 (3), e0122327 (2015).
  12. Eaglstein, W. H., Mertz, P. M. New methods for assessing epidermal wound healing: the effects of triamcinolone acetonide and polyethelene film occlusion. Journal of Investigative Dermatology. 71, 332-384 (1978).
  13. Swindle, M. M., Smith, A. C. Comparative anatomy and physiology of the pig. Scandinavian Journal of Laboratory Animal Sciences. 25, 1-10 (1998).
  14. Swindle, M. M. . Swine in the Laboratory: Surgery, Anesthesia, Imaging and Experimental Techniques. , (2007).
  15. Mertz, P. M., et al. IL-1 as a potent inducer of wound re-epithelization. Progress in Clinical and Biological Research. 365, 473-480 (1991).
  16. Eming, S. A., Martin, P., Tomic-Canic, M. Wound repair and regeneration: mechanisms, signaling, and translation. Science Translation Medicine. 6, 265-266 (2014).
  17. Aryza, M. J., Baryza, G. A. The Vancouver Scar Scale: an administration tool and its interrater reliability. The Journal of Burn & Rehabilitation. 16, 535-538 (1995).
  18. Bystrom, A., Claesson, R., Sundqvist, G. The antibacterial effect of camphorated paramonochlorophenol, camphorated phenol and calcium hydroxide in the treatment of infected root canals. Endodontics & Dental Traumatology. 1, 170-175 (1985).
  19. Reig, A., Tejerina, C., Codina, J., Hidalgo, J., Mirabet, V. Application of a new cicatrization dressing in treating second-degree burns and donor sites. Annals of Burn and Fire Disasters. 4, 174 (1991).
  20. Hindy, A. Comparative study between sodium carboxymethyl-cellulose silver, moist exposed burn ointment, and saline-soaked dressing for treatment of facial burns. Annals of Burn and Fire Disasters. 22, 131-137 (2009).
  21. Galiano, R. D., et al. Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells. The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).
  22. Thangarajah, H., et al. The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. , 13505-13510 (2009).
check_url/kr/57942?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Fan, G., Cherng, J., Chang, S., Poongodi, R., Wang, C., Wang, Y., Wang, Y., Liu, C., Meng, E. Severe Burn Injury in a Swine Model for Clinical Dressing Assessment. J. Vis. Exp. (141), e57942, doi:10.3791/57942 (2018).

View Video