نموذج تنوعاً من الإصابة بالقراد الصلب في الأرانب المختبرية
Summary
قمنا بتطوير نظام بسيط وتنوعاً لتغذية القراد الصلب في الأرانب المختبرية. لدينا بروتوكول غير شاقة يستخدم مواد يسهل الوصول إليها ويمكن تعديلها تبعاً لاحتياجات مختلف البيئات التجريبية. يسمح الأسلوب الرصد مريحة و/أو أخذ العينات من القراد طوال فترة الرضاعة.
Abstract
استخدام الحيوانات الحية في بحوث التجزئة حاسم بالنسبة لمجموعة متنوعة من الأغراض التجريبية بما في ذلك الحفاظ على المستعمرات القراد الصلب في المختبر. في القراد، جميع مراحل النمو (باستثناء البيض) هيماتوفاجوس، والحصول على وجبة دم عند إرفاق مضيفيهم الفقاريات أمر ضروري للنجاح في إنجاز دورة حياتها. هنا نظهر أسلوب بسيط يستخدم كبسولات أوبينابل بسهولة لتغذية القراد الصلب في الأرانب. وتشمل مزايا الطريقة المقترحة بساطته، وقصيرة المدة وتنوعاً والأهم من التكيف مع احتياجات متطلبات تجريبية محددة. الأسلوب الذي يجعل من الممكن استخدام دوائر متعددة (بأحجام مختلفة) في الحيوان نفسه، الذي يسمح بتغذية متعددة المراحل أو مجموعات تجريبية مختلفة مع خفض شرط الحيوانية عموما. المواد غير مزعجة ويمكن الوصول إليها بسهولة استخدامها يقلل عدم الراحة للحيوانات، والتي يمكن بسهولة استردادها من تجربة وعرضت لاعتماده أو إعادة استخدامها إذا كان بروتوكول أخلاقي يسمح لها.
Introduction
القراد الصلب (اكسودودي) معروفة جيدا المفصليات تغذية بطيئة ويمكن تركيبها على مضيف لعدة أيام، أو أسابيع، تبعاً للأنواع الأحيائية والتنمية المرحلة1. هذه المفصليات هيماتوفاجوس إلزامية ناقلات لمجموعة متنوعة من العوامل المعدية, مثل البكتيريا، البروتوزوا والفيروسات، وهكذا تشكل خطرا كبيرا على البشر وصحة الحيوان1. عند دراسة البيولوجيا التجزئة أو تقييم أساليب التحكم الجديدة، إنشاء التجزئة الفعالة نظام التغذية بالغ الأهمية من أجل فعالية تصميم التجارب وإنجاز الأهداف الدراسة. في الآونة الأخيرة، كانت عدة نظم التغذية التجزئة المصطنعة (تجنب استخدام الحيوانات الحية) المتقدمة2،،من34 وينبغي استخدامها كلما كان ذلك ممكناً. بيد أن هذه النظم لم تكن قادرة على تحل تماما محل التجزئة التي تتغذى على الحيوانات الحية، وأنها ليست بدائل مناسبة لكثير من الظروف الفسيولوجية اللازمة للدراسات العلمية. ولذلك، في بعض الحالات، استخدام المضيفين الحيوانات التجريبية أمر حاسم لضمان ملاءمة النتائج التجريبية.
أرانب نيوزيلندا المختبرية أظهرت أن يكون المضيفين الأكثر مناسبة ويمكن الوصول إليها لعدة إيكسوديد التجزئة الأنواع5،،من67،،من89. كثيرا ما تستخدم استراتيجيات مشتركة اثنين من التجزئة تتغذى الأرانب: أ) تتغذى على آذان الأرانب مغطاة بالقطن من القماش أو الجوارب6،7، وب) التغذية في أكياس القطن9أو النايلون زجاجات10 أو النيوبرين الدوائر11 لصقها إلى الخلف للأرنب. تغذية على آذان أرنب ليس نظاما أنيقة، للقراد (المراحل المبكرة خاصة أو اليرقات أو الحوريات) قد الزحف ونعلق في عمق قناة الإذن، وهو غير مريحة للحيوان ويجعل مراقبة تغذية القراد و/أو الاسترداد محتقن علامات التجزئة الصعبة. هذا النظام أيضا تقتصر على اثنين فقط من المجموعات التجزئة على آذان تغطيها كاملة socks يحميها الياقات الاليزابيثي، تمثل مشقة كبيرة للحيوان. أخرى نظم9،10،11 بالتأكيد أكثر تقدما وأيضا مناسبة لصيانة مستعمرة القراد الصلب. ومع ذلك، فهي محدودة في عدد المجموعات التجريبية على الأرنب فضلا عن الأحجام/الأشكال القابلة للتعديل لدوائر التغذية. وبالإضافة إلى ذلك، غالباً ما تتطلب هذه البروتوكولات ضربت أرجل الأرنب الخلفي لتجنب خدش واستخدام أطواق الاليزابيثي لمنع الاستمالة.
هنا نقترح طريقة بسيطة وغير مجهدة وفعالة جداً لتغذية مجموعات متعددة من القراد الصلب في الدوائر المغلقة لصقها على الأرنب مرة أخرى تشملها سترة، مما يلغي الحاجة للياقات الاليزابيثي أو ضربت خلال التجربة. على وجه التحديد، يستخدم نظامنا مطاطا كبسولات مصنوعة من ورقة رغوة خلات (إيفا) الإيثيلين الفينيل تغطيها شبكة البعوض ولصقها على الأرنب حلق مرة أخرى مع الغراء مطاط غير مهيج تمتين سريعة (3 دقائق). هذا الأسلوب يتيح المرفق كبسولات متعددة الشكل أو الحجم المطلوب، وبضعة أسابيع بعد التجربة هي الأرانب تعافي تماما. النظام مناسبة أساسا للمراحل القراد الصلب نيمفال والكبار، ولكن مع القليل من التعديل يمكن استخدامه لليرقات التغذية كذلك. الأساليب المستندة إلى رغوة إيفا للقراد الصلب التغذية قد أن تتكيف مع أنواع أخرى من الفقاريات المضيفين، الأغنام مثلاً (التي تظهر كأحد البدائل في هذه الورقة).
Protocol
Representative Results
Discussion
أن أهم خطوة في هذا البروتوكول كامل هو الغراء الكبسولة بحزم للجلد حلق. لهذا السبب، الضغط المستمر لمدة 3 دقائق على الأقل الهامة، لا سيما في الزوايا. عند تطعيم القراد في الكبسولة، من المهم أن تنطبق عليها عميقا في الركن المقابل من واحدة مفتوحة إلى تجنب التجزئة الهروب أثناء الختم. عند التخطيط لل…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ونعترف المساعدة التقنية لافلين Le ناعور، المعهد الوطني الفرنسي للبحوث الزراعية (الموارد الطبيعية) والعين بيرنييه (معهد) وبيديل Le Océane (الضمان). وأيد المازين كونسويلو على زمالة من “مختبر للتميز”، التكاملية البيولوجيا للناشئة من الأمراض المعدية (لابيكس عبيد)، معهد باستور. وتم شراء الأرانب والأغنام بشؤونها. جزء من هذا العمل بتمويل من المعاهد الوطنية للصحة منحة RO1AI090062 “بارك يوسف”. الدكتور جيفري لام بلير المسلم لاستعراض المخطوطة.
Materials
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 – large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 microns is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L’hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
