Универсальная модель жесткий клеща заражения на лабораторных кроликов
Summary
Мы разработали систему простой и универсальный жесткий клещей питаются кролики лаборатории. Наши номера трудоемкий протокол использует легко доступных материалов и может быть скорректирована в зависимости от требований различных экспериментальных параметров. Метод позволяет комфортно мониторинг и/или выборки клещей в течение всего периода кормления.
Abstract
Использование живых животных в тик исследований имеет решающее значение для целого ряда экспериментальных целей, включая поддержание твердых тик колоний в лаборатории. Клещей все этапы развития (за исключением яйцо) являются hematophagous, в приобретении крови питание при подключении к их позвоночных хозяев имеет важное значение для успешного завершения их жизненного цикла. Здесь мы показываем, простой метод, который использует легко открывающиеся капсулы для кормления жестких импульсах на кроликов. Преимущества предложенного метода включают его простоты, короткой продолжительности и самое главное универсальный адаптации к потребностям конкретных экспериментальных требований. Этот метод делает возможным использование нескольких камер (различных размеров) на том же животное, которое позволяет кормление несколько этапов или различных экспериментальных групп при одновременном снижении общей животных требование. Не раздражает и легко доступных материалов, используемых сводит к минимуму дискомфорт для животных, которые могут быть легко оправился от эксперимент и предложены для принятия или повторно, если это позволяет этические протокол.
Introduction
Жесткий клещей (Иксодовые клещи) хорошо известны как медленное питание членистоногих и могут быть прикреплены на узле в течение нескольких дней, или недель, в зависимости от вида и развития этап1. Эти обязательные hematophagous членистоногих векторы широкого спектра инфекционных агентов, таких как бактерии, простейшие и вирусы и таким образом представляют значительную опасность для людей и животных здоровье1. При изучении биологии клеща или оценке новых методов управления, создание эффективной клеща, системы кормления решающее значение для эффективной разработки экспериментов и достичь цели исследования. Недавно несколько искусственный тик питание системы (избегая использования живых животных) были развитые2,3,4 , и они должны быть использованы, когда это возможно. Однако эти системы не были в состоянии полностью заменить тик, питаясь живыми животными, и они не имеют подходящих заменителей для многих физиологических условий, необходимых для научных исследований. Таким образом в некоторых случаях, использование экспериментальных животных хостов имеет решающее значение для обеспечения актуальности экспериментальных результатов.
Лаборатория Новой Зеландии кроликов показали быть хозяевами наиболее подходящими и доступными для нескольких иксодовых клеща видов5,6,,78,9. Две общие стратегии делений, питаются Кролики часто использовались:) кормления на уши кролика, покрытые хлопчатобумажной тканью или носки6,7и b) кормления в хлопка сумки9, нейлон бутылки10 или неопрена палат11 приклеены к кролика обратно. Питание на уши кролика не является элегантный системой, потому что клещей (особенно на ранних стадиях, личинки или нимфы) могут ползать и прикрепить глубоко в ушной канал, что неудобно для животных и делает мониторинг клеща кормления и/или восстановления наполненный клещи трудно. Эта система также ограничивается только две группы тик на уши, полностью покрываются носки, защищены елизаветинской воротники, представляющих значительный дискомфорт для животных. Другие системы9,10,11 определенно более продвинутые и хорошо подходит для обслуживания жесткого деления колонии. Однако они ограничены в число экспериментальных групп на кролика, а также в изменяемые размеры/формы кормления палат. Кроме того эти протоколы часто требуют ковыляя задние кролик ноги, чтобы избежать царапин и использовании елизаветинской ошейников для предотвращения ухода.
Здесь мы предлагаем простой, не трудоемкий и очень эффективный метод, чтобы кормить несколько групп жестких клещей в закрытых камерах приклеены к кролика обратно охватываемых пиджак, устраняя необходимость в елизаветинской Ошейники или ковыляя во время эксперимента. В частности наша система использует упругой капсулы из этилен виниловый листа пены винилацетата (EVA) в охватываемых москитные сетки и приклеены к бритая кролика обратно клеем быстро затвердевающий (3 мин) не раздражает латекса. Эта техника позволяет вложение нескольких капсул желаемого размера или формы, и несколько недель спустя после эксперимента кроликов полностью выздоровел. Система предназначена главным образом для этапов nymphal и взрослых жесткий клеща, но с немного изменений может использоваться для личинок, а также кормления. EVA пены-методы на основе жестких тика кормления могут быть адаптированы для других видов позвоночных хозяев, например овец (которая отображается как один из вариантов в этом документе).
Protocol
Representative Results
Discussion
Наиболее важным шагом в этом весь протокол является клей капсула твердо к бритой кожи. По этой причине постоянное давление для по крайней мере 3 минут имеет решающее значение, особенно в углах. Когда прививки клещей в капсулу, важно применять их глубоко в противоположный угол от открыты?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы признаем технической помощи Эвелин Ле Naour, французский Национальный институт сельскохозяйственных исследований (ИНРА), Ален Бернье (ИНРА) и Océane Le Bidel (НУСО). Консуэло Almazán была поддержана стипендии от лаборатории передового опыта, интегративной биологии возникающих инфекционных заболеваний (LabEx IBEID), Институт Пастера. Кролики и овцы были приобретены АНСЕС. Часть этой работы была финансируется национальными институтами здравоохранения грант RO1AI090062 Y. парк. Д-р Джеффри л Блэр признается за рассмотрение рукописи.
Materials
| New Zealand Rabbits (2.5-3.5 kg) | Charles River | Strain Code 571 | |
| Rambouillet sheep | Local provider-tick free farm | Female 6 months old | |
| EVA foam 5 mm thick | Cosplay Shop | EVA-PE451kg (950mm x 450mm) | 10 mm PE45kg foam from the Cosplay Shop may be used for the large adult tick species |
| Foam Sheet 9" X 12" 6 mm-White | Amazon | FOAMSHT6-20 | 6 mm-EVA foam ca be ordered via Amazon as an alternative to the foam from Cosplay Shop |
| Full length rabbit jackets | Harvard Apparatus, Inc. | 620077- medium, 6270078 – large | |
| Non-toxic latex glue | Tear mender | Fabric & Leather Adhesive | |
| Tubular cotton orthopedic stockinette | BSN Medical | 9076 (12-15 cm wide) | |
| Mosquito mesh | Loisirs Creatifs | Very fine filter nylon mesh fabric | Any mosquito mesh, or curtain material with the mesh size less than 50 microns is suitable. |
| Leukoplast | BSN medical S.A.S | LF 72361-02 | |
| Adhesive hook-and-loop tape | AIEX store | AIEX 39.37 Feet/12m Hook and Loop Self Adhesive Tape Roll, 20 mm width, white colour | Fullfiled by Amazon |
| Fast drying glue | Fixtout | Superglue |
References
- Sonenshine, D. E., Roe, M. Ticks, People and Animals. Biology of Ticks, Vol I. , (2014).
- Kröber, T., Guerin, P. M. In vitro feeding assays for hard ticks. Trends in Parasitology. 23 (9), 445-449 (2007).
- Bonnet, S., Jouglin, M., Malandrin, L., Becker, C., Agoulon, A., L’hostis, M., Chauvin, A. Transstadial and transovarial persistence of Babesia divergens DNA in Ixodes ricinus.ticks fed on infected blood in a new skin-feeding technique. Parasitology. 134 (2), 197-207 (2007).
- Bonnet, S., Liu, X. Laboratory artificial infection of hard ticks: A tool for the analysis of tick-borne pathogen transmission. Acarologia. 52 (4), 453-464 (2012).
- Khols, G. M. Tick rearing methods with special reference to the Rocky Mountain Wood Tick, Dermacentor andersoni Stiles. Culture methods for invertebrate animals. , (1937).
- Faccini, J. L. H., Chacon, S. C., Labruna, M. B. Rabbits (Oryctolagus cuniculus) as experimental hosts for Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae) [Coelhos (Oryctolagus cuniculus) como hospedeiros experimentais de Amblyomma dubitatum Neumann (Acari: Ixodidae). Arquivo Brasileiro de Medicina Veterinária e Zootecnia. 58 (6), 1236-1239 (2006).
- Chacon, S. C., Freitas, L. H. T., Barbieri, F. S. Relationship between weight and number of engorged Amblyomma cooperi. Nuttal (sic) and Warburton, 1908 (Acari: Ixodidae) larvae and nymphs and eggs from experimental infestations on domestic rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 13, 6-12 (2004).
- Sonenshine, D. E. Maintenance of ticks in the laboratory. Maintenance of Human, Animal, and Plant Pathogen Vectors. , (1999).
- Levin, M. L., Schumacher, L. B. M. Manual for maintenance of multi-host ixodid ticks in the laboratory. Experimental and Applied Acarology. 70 (3), 343-367 (2016).
- Bouchard, K. R., et al. Maintenance and experimental infestation of ticks in the laboratory setting. Biology of Disease Vectors. , (2005).
- Jones, L. D., Davies, C. R., Steele, G. M., Nutall, P. A. The rearing and maintenance of ixodid and argasid ticks in the laboratory. Animal Technology. 39, 99-106 (1988).
- Slovák, M., Labuda, M., Marley, S. E. Mass laboratory rearing of Dermacentor reticulatus ticks (Acarina, Ixodidae). Biologia, Bratislava. 57 (2), 261-266 (2002).
- Rechav, Y., Dauth, J. Development of resistance in rabbits to immature stages of the Ixodid tick Rhipicephalus appendiculatus. Medical and Veterinary Entomology. 1, 177-183 (1987).
- Zacarias do Amaral, M. A., Azevedo Prata, M. C., Daemon, E., Furlong, J. Biological parameters of cattle ticks fed on rabbits. Brazilian Journal of Veterinary Parasitology. 21 (1), 22-27 (2012).
