JoVE Journal > Developmental Biology
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
자동 번역
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
발생학

En düşük Invaziv embriyo transferi ve tavşan modelinde optimum embriyo aşamasında embriyo vitrifikasyon

Published: May 16, 2019
doi:
10.3791/58055
, , ,
1Departament of Animal Science, Institute for Animal Science and Technology (ICTA),Universitat Politècnica de València (UPV), 2Animal Technology and Research Center (CITA),Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA)

Summary

Destekli üreme teknikleri (ARTs) sonuçları geliştirmek ve ilişkili riskleri azaltmak için sürekli değerlendirme içindedir. Bu yazıda, tavşanların insan üreme açısından ideal bir hayvan modeli olarak kullanımına izin veren, verimli bir ağoprezervasyon protokolüyle minimal invaziv bir embriyo transfer prosedürü açıklanmaktadır.

Abstract

İn vitro embriyo kültürü veya embriyo ağaloprezervasyon gibi destekli üreme teknikleri (ARTs), perinatal ve postnatal sonuçları ile doğal gelişim desenlerini etkiler. Sanat uygulamalarının zararsız olmasını sağlamak için hayvan modellerinde çalışmalar gereklidir. Buna ek olarak, son bir adım olarak, embriyo geliştirme çalışmaları tam vadeli sağlıklı yavru geliştirmek için kapasitelerinin değerlendirilmesi gerekir. Burada, rahim için embriyo transferi herhangi bir sanat ile ilgili deney gerçekleştirmek için vazgeçilmez.

Tavşan bir yüzyıl boyunca meme üreme çalışması için bir model organizma olarak kullanılmıştır. İnsan türü ve küçük boyutu ve düşük bakım maliyeti onun fitogenetik yakınlığı ek olarak, bu indüklenen yumurtlama gibi önemli üreme özelliklerine sahip, erken embriyonik gelişim bir kronolojisi insanlara benzer ve kısa bir gebelik bize kolayca ART uygulamasının sonuçlarını incelemek için izin. Dahası, sanat (örneğin intrakitoplazmik sperm enjeksiyonu, embriyo kültürü veya ağoprezervasyon) bu türe uygun verimlilik ile uygulanır.

Bu yazıda sunulan laparoskopik embriyo transfer tekniğinin ve ağoprezervasyon protokolünün kullanılması, 1) embriyoları kolay, minimal invazif bir teknik ve 2) tavşan uzun süreli depolanması için etkili bir protokol aracılığıyla nasıl aktarmayı tarif ediyoruz. embriyo zaman esnek lojistik kapasiteleri ve örnek taşıma yeteneği sağlamak için. Tavşan embriyoları farklı gelişimsel aşamalarında aktardıktan sonra elde edilen sonuçlar, Morula ‘nın tavşan embriyo kurtarma ve transfer için ideal bir aşama olduğunu göstermektedir. Böylece, cerrahi prosedürü haklı olarak, bir oviduktal embriyo transferi gereklidir. Ayrıca, tavşan morulları başarıyla vitrifiye ve laparoskopik olarak aktarılan, açıklanan teknikleri etkinliğini kanıtlamak.

Introduction

İnsan infertilitesini atlayarak veya yüksek genetik değer ve hayvan genetik kaynaklarını koruyan Hayvancılık yaygınlaştırılması amaçlarıyla, teknik bir dizi topluca yardımcı üreme teknolojileri olarak adlandırılan, süperovülasyon gibi, içinde vitro fertilizasyon, embriyo kültürü veya ağoprezervasyon,1,2geliştirilmiştir. Şu anda, yumurtalıkları uyarmak ve çok sayıda antral ovaryalı folikülleri üretmek için hormonal tedaviler verilir1. Bu foliküllerden toplanan oositler olgunlaşabilir, döllenmiş ve in vitro olarak geliştirilmiştir ya kriokonservirovannogo ya da vekil annelere transfer edilinceye kadar3. Ancak, bu tedaviler sırasında, gamet ve zigotları bu koşullarda hayatta kalmak için embriyo adaptasyon gerektirebilir fizyolojik olmayan süreçler bir dizi maruz4,5. Bu adaptasyon erken embriyo plastisite nedeniyle mümkündür, hangi gen ifade ve gelişimsel programlama embriyo değişiklikleri sağlar6. Ancak, bu değişiklikler yetişkinliğe kadar embriyo gelişiminin sonraki aşamalarını etkileyebilir, ve şimdi yaygın olarak kabul edilir ki Yöntemler, zamanlama, ağkısızlık prosedürü veya kültür koşulları embriyo kaderi farklı sonuçlar göstermek7 , 8. bu nedenle, sanat spesifik indüklenen etkileri aydınlatmak, iyi karakterize hayvan modellerinin kullanımı kaçınılmazdır.

Meme embriyoları transferinden kaynaklanan ilk belgelenmiş canlı Doğum 1890 yılında gerçekleşti9. Bugün, bir vekil dişi embriyo transferi (ET) sonraki embriyo gelişimi aşamalarında Preimplantasyon sırasında sanat kaynaklı etkileri okuyan önemli bir adımdır10. ET teknikleri her hayvanın büyüklüğü ve anatomik yapısına bağlıdır. Büyük ölçekli hayvan modelleri durumunda, transservikal cerrahi dışı ET teknikleri ile ET gerçekleştirmek mümkün olmuştur, ancak daha küçük boyutlu türler serviks kateterizasyon daha karmaşık ve cerrahi teknikler sık kullanılan11. Ancak, cerrahi ET, implantasyon ve embriyo gelişimini zarar verebilecek kanama neden olabilir, kan uterus lümen istila edebilir gibi, embriyo ölümü10neden. Transservikal cerrahi dışı et teknikleri hala insanlarda, babunların, sığır, domuz ve fareler12,13,14,15,16,17, ancak cerrahi uygulanır Etler hala keçiler, koyun veya diğer hayvanlar gibi tür,10,18,19,20,21, tavşan gibi ek zorluklar mevcut kullanılmaktadır (iki bağımsız sertifikalar) veya fareler (küçük boyut). Yine de, cerrahi transfer yöntemleri giderek daha az invaziv yöntemler ile değiştirildi eğilimindedir. Embriyoları transfer etmek için endoskopi kullanıldı, örneğin, tavşan, domuz ve küçük ruminantlarda18,19,20. Bu minimal invaziv endoskopi yöntemleri embriyoları ampulla içine infundibulum üzerinden aktarmak için kullanılabilir, hangi tavşan önemlidir ve bazı türler yararlı etkileri göstermiştir20. Bu oviduct erken embriyo aşamalarında embriyo ve anne arasındaki doğru diyalog önemini dayanır. Yukarıda belirtildiği gibi, ovduct aracılığıyla embriyo göçü sırasında tavşanlar içinde yer alan embriyo remodeling,22,23implant edilebilir embriyolar elde etmek için esastır.

Büyük boyutlu hayvan modelleri, sığır gibi, biyokimyasal ve Preimplantasyon özellikleri insan türlerinin24benzer çünkü ilginç. Ancak, büyük hayvanlar ön denemeler kullanmak için çok pahalıdır, ve kemirgenler ideal bir model olarak kabul edilir (76% model organizmalar kemirgenler) laboratuar araştırması için25. Yine de, tavşan modeli üreme çalışmalarında kemirgenler üzerinde bazı avantajlar sağlar, insanlar tarafından sergilenen bazı üreme Biyolojik süreçler fareler bu daha tavşan benzer. İnsan ve tavşanlar benzer bir kronolojik embriyonik genom aktivasyonu, gastrülasyon ve hemochorial plasenta yapısını sunar. Buna ek olarak, tavşan kullanarak döllenme ve gebelik aşamalarında tam zamanlamasını bilmek mümkündür nedeniyle onların indüklenen yumurtlama25. Tavşan yaşam döngüleri kısa, 31 gün içinde gebelik tamamlama ve yaklaşık 4-5 ay içinde ergenliğe ulaşan; hayvan onun uysal ve agresif olmayan davranışları nedeniyle işlemek kolaydır, ve onun bakım büyük hayvanların pahasına kıyasla çok ekonomiktir. Ayrıca, tavşanların iki bağımsız serviks11,25ile Dubleks rahim var söz önemlidir. Bu, farklı deneysel grupların embriyoları aynı hayvana aktarılabilir, ancak farklı bir uterus boynuz içine, tercihli bir pozisyonda tavşan yerleştirir. Bu, hem deneysel etkileri karşılaştırmak için, sonuçları maternal faktörü azaltarak bize izin verir.

Günümüzde cerrahi olmayan ET yöntemleri tavşan içinde kullanımda değildir. 90 ‘ ların sonlarında bir transservikal et tekniği kullanılarak yürütülen bazı çalışmalar, cerrahi yöntemlerle% 5,5-20,0%11,26 VERSUS 50-65% arasında değişen düşük teslimat oranlarında sonuçlanan, bunların arasında laparoskopik prosedür Besenfelder ve Brem18. Tavşanların bu ameliyatsız ET yöntemlerinin düşük başarı oranları, transservikal ET ‘te önlenmiş olan oviduct ‘de gerekli embriyo remodeling eksikliği ile örtüşür. Burada, bir model organizma olarak tavşan kullanarak etkili bir minimal invaziv laparoskopik ET prosedürü tarif. Bu teknik, büyük hayvanların ve insanlarda daha fazla üreme araştırması için bir model sağlar.

Tavşanların embriyo implantasyonu için özellikle dar bir zaman penceresi olduğu için, bu türdeki ET, ET ‘de embriyonun gelişimsel aşaması ile alıcı27‘ nin fizyolojik durumu arasında yüksek düzeyde senkron gerektirir. Bazı durumlarda, embriyo gelişimini yavaşlatan bir üreme tedavisinden sonra ( In vitro Culture gibi) veya endometrial reseptüsü (superovülasyon tedavileri gibi) değiştirir, embriyo ve maternal uterusun arasında senkron yoktur. Bu durumlar sonucu olumsuz etkileyebilir. Bu bağlamlarda yanıt vermek için, bizi duraklatmak, düzenlemek ve deneyler devam sağlayan etkili bir tavşan Morula vitrifikasyon Protokolü açıklanmaktadır. Bu süreç üreme çalışmaları için Lojistik olarak arzu edilir ve bize embriyoların uzun süreli depolanması için kapasite verir, onların taşıma izin. Laparoskopik prosedür ve ağoprezervasyon stratejileri daha az hayvan ile çalışmaların daha iyi planlamasına olanak sağlar. Böylece, metodolojimiz hijyen ve ekonomik avantajlar sunar ve deneysel hayvanların insan tedavisinin iyileştirilmesi amacı ile hayvan araştırmalarının 3Rs (yedek, azaltma ve arıtma) konseptine uygundur. Böylece, bu yöntemlerle, tavşan in vivo üreme amaçlı ideal bir model organizma oluşturmaktadır.

Protocol

Bu çalışmada kullanılan tüm deneysel prosedürler, hayvan deneyleri için 2010/63/EU EEC Direktifi uyarınca yapılmıştır ve Universitat Politècnica de València hayvanlarıyla deneyler için Etik Komite tarafından incelenip onaylanmıştır. İspanya (araştırma kodu: 2015/VSC/PEA/00170). XGD, FMJ, MPVC ve JSV hayvanlar üzerinde deney için Valencian devlet idaresi tarafından verilen bir yetkilendirme belgesi tutar. XGD, deney sırasında hayvanların refahı ve bakımını denetlemek için yetkilidir. …

Representative Results

Minimal invaziv laparoskopi taze veya vitrifiye embriyolar taşıma üreme çalışmaları için en iyi model hayvanlar arasında tavşan yerleştirir. Tablo 1 farklı gelişim AŞAMALARıNDA taze et sonuçlarını gösterir (Şekil 4) aktarılan embriyo. Doğumda hayatta kalma oranı (bir yavru ile sonuçlanan embriyo yüzdesi) Bu yazıda açıklanan laparoskopik tekniğin etkinliğini kanıtladı. Daha yüksek değerler, ET, Morula aşamas?…

Discussion

Transfer edilen embriyolar9‘ dan ilk belgelenmiş canlı Doğum vakası beri, bu teknik ve tavşan türleri üreme çalışmalarında çok önemli hale gelmiştir. Ayrıca, manipülasyon, üretim, ağoprezervasyon vb. içeren embriyo araştırma çalışmaları, son bir adım olarak embriyo kapasitesinin değerlendirilmesi için sağlıklı tam vadeli yavru üretmek gerektirir. Bu nedenle embriyo transfer tekniği13,28. Yıllarca …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu çalışma Ekonomi Bakanlığı ve Ispanya ‘nın rekabet gücü (AGL2017-85162-C2-1-R) ve Generalitat Valenciana araştırma programı (PrometeoII 2014/036) fonları tarafından destekleniyordu. N. Macowan Ingilizce dil hizmeti tarafından revize İngilizce metin sürümü

Materials

Bovine Serum Albumin (BSA) VWR 332
Buprenorphine hydrochloride Alvet Escartí 626 To be ordered by a licensed veterinarian.
Buserelin Acetate Sigma Aldrich B3303
Clorhexidine digluconate soap Alvet Escartí 0265DCCJ500B
Clorhexidine digluconate solution Alvet Escartí 0265DCCA500B
CO2 Air Liquide 99921 CO2 N48.
CO2 Incubator Fisher scientific 15385194
Dimethyl Sulfoxide Sigma Aldrich W387509
Dulbecco’s phosphate-buffered saline (DPBS) Sigma Aldrich D5773 Without calcium chloride.
Electric razor Oster Golden A5 078005-140-002
Endoscope camera Optomic Spain S.A OP-714
Endoscope trocar with silicone leaflet valve Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 30114GK Lightweight trocar model.
Enrofloxacin Alvet Escartí 9993046 To be ordered by a licensed veterinarian.
Epicraneal needle 23G Alvet Escartí 514056353 Smaller needles can be also used.
Epidural catheter Vygon corporate 187.10
Epidural needle Vygon corporate 187.10
Ethylene Glycol Sigma Aldrich 102466-M
Eye ointment Alvet Escartí 5273
Ketamine hydrochloride Alvet Escartí 184 To be ordered by a licensed veterinarian.
Laparoscopy equipment Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 26003 AA Hopkins® Laparoscope, 0º-mm straight-viewing laparoscope, 30-cm length, 5-mm working channel.
Light source Optomic Spain S.A Fibrolux 250
Liquid Nitrogen Air Liquide P1505XXX
Mechanical CO2 insufflator Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. Endoflator®
Meloxicam Alvet Escartí 9993501 To be ordered by a licensed veterinarian.
Petri dishes, 35-mm Sigma Aldrich CLS430165-500EA
Plastic dressing (Nobecutan) IBOR medica 7140028
Plastic Straw 0.25 mL IMV – technologies 6431
Povidone iodide solution Alvet Escartí 02656DPYS500S
Scissors ROBOZ RS-5880 Any regular surgical grade steel small straight scissors will work.
Silicone tube for insufflator Karl Storz Endoscopia Ibérica S.A. 20400040
Stereomicroscope Leica MZ16F There are cheaper options such as Leica MZ8 or Nikon SMZ-10 or SMZ-2B, to name a few.
Sterile Gloves Alvet Escartí 087GL010075
Sterile gown Alvet Escartí 12261501
Sterile mask Alvet Escartí 058B15924B
Straw Plug IMV – technologies 6431
Sucrose Sigma Aldrich S7903
Syringe, 1-mL Fisher scientific 11750425
Syringe, 5-mL Fisher scientific 11773313
Urinary catheter IMV – technologies 17722
Waterbath RAYPA BAE-4
Xylazine Alvet Escartí 525225 To be ordered by a licensed veterinarian.
Rabbits Universitat Politècnica de València Line A Other maternal lines, such as Line V or Line HP can be used.
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Chen, M., Heilbronn, L. K. The health outcomes of human offspring conceived by assisted reproductive technologies (ART). Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 388-402 (2017).
  2. Lavara, R., Baselga, M., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S. Embryo vitrification in rabbits: Consequences for progeny growth. Theriogenology. 84 (5), 674-680 (2015).
  3. Sirard, M. A. The influence of in vitro. fertilization and embryo culture on the embryo epigenetic constituents and the possible consequences in the bovine model. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 411-417 (2017).
  4. Feuer, S. K., Rinaudo, P. F. Physiological, metabolic and transcriptional postnatal phenotypes of in vitro. fertilization (IVF) in the mouse. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 8 (4), 403-410 (2017).
  5. Jiang, Z., et al. Genetic and epigenetic risks of assisted reproduction. Best Practice & Research: Clinical Obstetrics & Gynaecology. 44, 90-104 (2017).
  6. Fleming, T. P., Velazquez, M. A., Eckert, J. J. Embryos, DOHaD and David Barker. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 6 (5), 377-383 (2015).
  7. Sparks, A. E. Human embryo cryopreservation-methods, timing, and other considerations for optimizing an embryo cryopreservation program. Seminars in Reproductive Medicine. 33 (2), 128-144 (2015).
  8. Swain, J. E. Optimal human embryo culture. Seminars in Reproductive Medicine. 33 (2), 103-117 (2015).
  9. Heape, W. Preliminary note on the transplantation and growth of mammalian ova within a uterine foster-mother. Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 48, 457-459 (1890).
  10. Bermejo-Alvarez, P., Park, K. E., Telugu, B. P. Utero-tubal embryo transfer and vasectomy in the mouse model. Journal of Visualized Experiments. (84), e51214 (2014).
  11. Kidder, J. D., Roberts, P. J., Simkin, M. E., Foote, R. H., Richmond, M. E. Nonsurgical collection and nonsurgical transfer of preimplantation embryos in the domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus) and domestic ferret (Mustela putorius furo). Journal of Reproduction and Fertility. 116 (2), 235-242 (1999).
  12. Tıras, B., Cenksoy, P. O. Practice of embryo transfer: recommendations during and after. Seminars in Reproductive Medicine. 32 (4), 291-296 (2014).
  13. Cui, L., et al. Transcervical embryo transfer in mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 53 (3), 228-231 (2014).
  14. Moreno-Moya, J. M., et al. Complete method to obtain, culture, and transfer mouse blastocysts nonsurgically to study implantation and development. Fertility and Sterility. 101 (3), e13 (2014).
  15. Hasler, J. F. Forty years of embryo transfer in cattle: a review focusing on the journal Theriogenology, the growth of the industry in North America, and personal reminisces. Theriogenology. 81 (1), 152-169 (2014).
  16. Bauer, C. The baboon (Papio sp.) as a model for female reproduction studies. Contraception. 92 (2), 120-123 (2015).
  17. Martinez, E. A., et al. Nonsurgical deep uterine transfer of vitrified, in vivo-derived, porcine embryos is as effective as the default surgical approach. Science Reports. 5, 10587 (2015).
  18. Besenfelder, U., Brem, G. Laparoscopic embryo transfer in rabbits. Journal of Reproduction and Fertility. 99, 53-56 (1993).
  19. Besenfelder, U., Mödl, J., Müller, M., Brem, G. Endoscopic embryo collection and embryo transfer into the oviduct and the uterus of pigs. Theriogenology. 47 (5), 1051-1060 (1997).
  20. Besenfelder, U., Havlicek, V., Kuzmany, A., Brem, G. Endoscopic approaches to manage in vitro and in vivo embryo development: use of the bovine oviduct. Theriogenology. 73 (6), 768-776 (2010).
  21. Fonseca, J. F., et al. Nonsurgical embryo recovery and transfer in sheep and goats. Theriogenology. 86 (1), 144-151 (2016).
  22. Denker, H. W. Structural dynamics and function of early embryonic coats. Cells Tissues Organs. 166, 180-207 (2000).
  23. Marco-Jiménez, F., López-Bejar, M. Detection of glycosylated proteins in rabbit oviductal isthmus and uterine endometrium during early embryo development. Reproduction in Domestic Animals. 48 (6), 967-973 (2013).
  24. Ménézo, Y. J., Hérubel, F. Mouse and bovine models for human IVF. Reproductive BioMedicine Online. 4 (2), 170-175 (2002).
  25. Fischer, B., Chavatte-Palmer, P., Viebahn, C., Navarrete Santos, A., Duranthon, V. Rabbit as a reproductive model for human health. Reproduction. 144 (1), 1-10 (2012).
  26. Besenfelder, U., Strouhal, C., Brem, G. A method for endoscopic embryo collection and transfer in the rabbit. Zentralbl Veterinarmed A. 45 (9), 577-579 (1998).
  27. Daniel, N., Renard, J. P. Embryo transfer in rabbits. Cold Spring Harbor Protocols. 2010 (1), (2010).
  28. Saenz-de-Juano, M. D., et al. Vitrification alters rabbit foetal placenta at transcriptomic and proteomic level. Reproduction. 147 (6), 789-801 (2014).
  29. Green, M., Bass, S., Spear, B. A device for the simple and rapid transcervical transfer of mouse embryos eliminates the need for surgery and potential post-operative complications. Biotechniques. 47 (5), 919-924 (2009).
  30. Duan, X., Li, Y., Di, K., Huang, Y., Li, X. A nonsurgical embryo transfer technique in mice. Sheng Wu Gong Cheng Xue Bao. 32 (4), 440-446 (2016).
  31. Denker, H. W., Gerdes, H. J. The dynamic structure of rabbit blastocyst coverings. I. Transformation during regular preimplantation development. Anatomy and Embryology. 157, 15-34 (1979).
  32. Seidel, G. E., Bowen, R. A., Kane, M. T. In vitro fertilization, culture and transfer of rabbit ova. Fertility and Sterility. 27, 861-870 (1976).
  33. Binkerd, P. E., Anderson, G. B. Transfer of cultured rabbit embryos. Gamete Research. 2, 65-73 (1979).
  34. Murakami, H., Imai, H. Successful implantation of in vitro cultured rabbit embryos after uterine transfer: a role for mucin. Molecular Reproduction and Development. 43, 167-170 (1996).
  35. Techakumphu, M., Wintenberger-Torrèsa, S., Sevelleca, C., Ménézo, Y. Survival of rabbit embryos after culture or culture/freezing. Animal Reproduction Science. 13 (3), 221-228 (1987).
  36. Gitzelmann, C. A., et al. Cell-mediated immune response is better preserved by laparoscopy than laparotomy. Surgery. 127 (1), 65-71 (2000).
  37. Huang, S. G., Li, Y. P., Zhang, Q., Redmond, H. P., Wang, J. H., Wang, J. Laparotomy and laparoscopy diversely affect macrophage-associated antimicrobial activity in a murine model. BMC Immunology. 14, 27 (2013).
  38. Marco-Jiménez, F., Jiménez-Trigos, E., Almela-Miralles, V., Vicente, J. S. Development of Cheaper Embryo Vitrification Device Using the Minimum Volume Method. Public Library of Science One. 11 (2), e0148661 (2016).
  39. Marco-Jiménez, F., Jiménez-Trigos, E., Lavara, R., Vicente, J. S. Generation of live offspring from vitrified embryos with synthetic polymers supercool X-1000 and Supercool Z-1000. CryoLetters. 35, 286-292 (2014).
  40. Marco-Jiménez, F., Jiménez-Trigos, E., Lavara, R., Vicente, J. S. Use of cyclodextrins to increase cytoplasmic cholesterol in rabbit embryos and their impact on live KITs derived from vitrified embryos. Cryoletters. 35, 320-326 (2014).
  41. Marco-Jiménez, F., Lavara, R., Jiménez-Trigos, E., Vicente, J. S. In vivo development of vitrified rabbit embryos: Effects of vitrification device, recipient genotype, and asynchrony. Theriogenology. 79 (7), 1124-1129 (2013).
  42. Vicente, J. S., et al. Rabbit morula vitrification reduces early foetal growth and increases losses throughout gestation. Cryobiology. 67, 321-326 (2013).
  43. Viudes-de-Castro, M. P., Marco-Jiménez, F., Cedano-Castro, J. I., Vicente, J. S. Effect of corifollitropin alfa supplemented with or without Lh on ovarian stimulation and embryo viability in rabbit. Theriogenology. 98, 68-74 (2017).
  44. Saenz-de-Juano, M. D., et al. Vitrification alters at transcriptomic and proteomic level rabbit foetal placenta. Reproduction. 147, 789-801 (2014).
  45. Saenz-de-Juano, M. D., Marco-Jimenez, F., Viudes-de-Castro, M. P., Lavara, R., Vicente, J. S. Direct comparison of the effects of slow freezing and vitrification on late blastocyst gene expression, development, implantation and offspring of rabbit morulae. Reproduction in Domestic Animals. 49, 505-511 (2014).
  46. Lavara, R., Baselga, M., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S. Long-term and transgenerational effects of cryopreservation on rabbit embryos. Theriogenology. 81, 988-992 (2014).
  47. Saenz-de-Juano, M. D., Marco-Jiménez, F., Vicente, J. S. Embryo transfer manipulation cause gene expression variation in blastocysts that disrupt implantation and offspring rates at birth in rabbit. European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. 207, 50-55 (2016).
  48. Roque, M., Valle, M., Kostolias, A., Sampaio, M., Geber, S. Freeze-all cycle in reproductive medicine: current perspectives. JBRA Assisted Reproduction. 21 (1), 49-53 (2017).
  49. Tsunoda, Y., Soma, T., Sugie, T. Effect of post-ovulatory age of recipient on survival of frozen-thawed rabbit morulae. Journal of Reproduction and Fertility. 65 (2), 483-487 (1982).
  50. Vanderzwalmen, P., et al. Births after vitrification at morula and blastocyst stages: effect of artificial reduction of the blastocoelic cavity before vitrification. Human Reproduction. 17 (3), 744-751 (2002).
  51. Lavara, R., Baselga, M., Vicente, J. S. Does storage time in LN2 influence survival and pregnancy outcome of vitrified rabbit embryos?. Theriogenology. 76 (4), 652-657 (2011).

Tags

Laparoscopic Embryo TransferMinimally InvasiveEmbryo VitrificationRabbit ModelAssisted Reproductive TechnologiesEmbryo CryopreservationEmbryo ManipulationEmbryo Transfer ProcedureEmbryo Thawing

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Garcia-Dominguez, X., Marco-Jimenez, F., Viudes-de-Castro, M. P., Vicente, J. S. Minimally Invasive Embryo Transfer and Embryo Vitrification at the Optimal Embryo Stage in Rabbit Model. J. Vis. Exp. (147), e58055, doi:10.3791/58055 (2019).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image