Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография
Summary
Проволока myograph техника используется для изучения функций сосудистой гладкой мускулатуры и экран новых лекарств. Мы доклад подробный протокол для измерения Изометрические сократительную способность мыши верхней брыжеечной артерии и скрининга новых миорелаксанты гладких мышц сосудов.
Abstract
Проволока myograph техника используется для оценки сократимости сосудистой гладкой мускулатуры в ответ на depolarization, GPCR агонисты/ингибиторы и наркотики. Он широко используется во многих исследованиях на физиологические функции сосудистой гладкой мускулатуры, патогенеза сосудистых заболеваний, как гипертония и разработки лекарств релаксант гладких мышц. Мышь является широко используется модель животных с большим бассейном модели заболеванием и генетически модифицированных штаммов. Мы ввели этот метод измерения изометрического сокращения мыши верхней брыжеечной артерии в деталях. 1.4-мм сегмент мыши сопротивление верхней брыжеечной артерии был изолирован и установлен на камеру myograph, передав две стальные провода через ее просвета. После уравновешивания и нормализации шаги судно сегмент был потенцированные high-K+ раствором дважды перед сужением assay. В качестве примера применения этого метода в разработке лекарств мы измерили релаксант эффект Роман природное вещество, neoliensinine, изолированных от китайских трав, эмбрионы семян Лотос (Nelumbo nucifera (Gaertn.) на мыши брыжеечных артерии. Сегменты судна, установлен в myograph камере были стимулировали раствором high-K+ . Когда силы натяжения этап стабильного поступательного, накопленных доз neoliensinine были добавлены к камере. Мы обнаружили, что neoliensinine был эффект миорелаксантов дозозависимый на гладких мышц, таким образом, о том, что он несет потенциальной деятельности против гипертонии. Кроме того как судно сегмент может выжить по крайней мере 4 часа после монтажа и поддерживать сократимости, вызванных high-K+ решения для много раз, мы предполагаем, что провода myograph система может использоваться для трудоемкий процесс скрининга наркотиков.
Introduction
Система myograph небольшой сосуд, используемый здесь был для измерения Изометрические сужением сосудов малого сопротивления с внутренним диаметром от 100 до 400 мкм. изолированных малых судов (около 2 мм длиной) были вставлены два провода диаметром 40 мкм и затем были монтируется на челюсти микрометр стороне датчика и последовательно. Этот метод myograph был впервые предложил в 19721 и затем разработан прежде всего Mulvany и его коллеги2,3,4,5,6. Это теперь зрелый техника стабильной оборудованием, легко производительности и стандартный нормализации процедуры7,8,9. Мы использовали этот метод с некоторыми изменениями для измерений в мыши верхней брыжеечной артерии.
Гладких мышц сосудистой линии стены почти всех кровеносных сосудов. Их основная функция заключается в создании сил посредством сокращения в ответ на различные стимулы. Нормальный сократимости гладких мышц сосудов имеет важное значение для регулирования кровяного давления и дополнение питания10. Ненормальной регуляции артериального давления приводит к различных заболеваний, в том числе гипертонии, сердечной недостаточности и ишемия. Некоторые исследования показали, что ненормальное давление всегда связан с неблагополучной гладких мышц сосудистой сократимости7,11,12,13. Метод myograph позволяет расследования Изометрические сократимости мыши сосудов вызванных различные стимулы, включая сосудосуживающие средства, ингибиторы и наркотиков. Успешные измерения сжатия поможет нам понять механизмы поддержания давления крови и патогенезе сосудистых заболеваний, связанных с гладких мышц и исследовать новые терапевтические подходы.
Многие китайские травы широко использовались для клинического лечения сосудистых заболеваний; Однако их эффективные ингредиенты обычно остаются неизвестными. Таким образом изоляции и выявление эффективных компонентов является очень важным для разработки новых лекарств. Технология myograph Многопроволочная предлагает простой подход для отбора активных компонентов в лекарственных растениях. Мы сообщили ряд исследований с использованием системы myograph небольшой сосуд расследовать мыши верхней брыжеечной артерии сужением и определили природных соединений с борьбе с гипертонией активность12,,1314. Здесь, мы описываем подробный протокол для метода myograph и оценить эффект миорелаксантов neoliensinine, изолированных от эмбрионов семян Лотос (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14.
Protocol
Representative Results
Discussion
Гипертония является задачей широкого общественного здравоохранения из-за тяжелых осложнений, в том числе сердечно-сосудистых и почечных заболеваний16. Понимания патогенеза гипертензии и изучения более антигипертензивные препараты стало насущной задачей в этой области. ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим д-р Вэй ци он (Soochow университета, Сучжоу, Китай) и д-р Ян Ning Qiao (Шэньси педагогический университет, г. Сиань, Китай) для оказания технической помощи. Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (Грант 31272311, 81373295 и 81473420) и проекта, финансируемых приоритетных академические программы развития Цзянсу высших учебных заведений (Грант № ysxk-2016).
Materials
| Multi wire myograph system | DMT | 610-M | |
| Stainless steel wire | DMT | 400447 | |
| Geuder dissection scissor | DMT | 400431 | |
| Dumont forceps | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | ADInstruments | ML785 | |
| Software | ADInstruments | LabChart 5 | |
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2·6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-Glucose | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
References
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats. Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).
- Mulvany, M. J., Nyborg, N. An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats. British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).
- Mulvany, M. J. . Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph. , (2004).
- Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels. The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).
- Michael, S. K., et al. High blood pressure arising from a defect in vascular function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).
- Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography. Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).
- del Campo, L., Ferrer, M. . Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries. , (2015).
- Fisher, S. A. Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function. Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).
- Crowley, S. D., et al. Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system. The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).
- Qiao, Y. N., et al. Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure. The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).
- He, W. Q., et al. Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension. American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).
- Yang, G. M., et al. Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant. Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).
- Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery. Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).
- Kearney, P. M., et al. Global burden of hypertension: analysis of worldwide data. The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).
- Good, N. E., et al. Hydrogen Ion Buffers for Biological Research. 생화학. 5 (2), 467-477 (1966).
