Ved hjælp af 22C 3 Anti-PD-L1 antistof koncentrere sig om biopsi og cytologi prøver fra patienter med ikke-småcellet lungecancer
Summary
For at udvide laboratorier verden over evne til at vurdere berettigelsen af patienter med lungekræft behandling med pembrolizumab, i en pålidelig og reproducerbar måde, udviklede vi en analyse, der bruger 22C 3 antistof koncentrat på en alment tilgængelig immunhistokemiske autostainer, til både biopsi og cytologi prøver.
Abstract
Pembrolizumab monoterapi er blevet godkendt til første og anden linje behandling af patienter med PD-L1-udtryk for avancerede ikke-småcellet lungekræft (NSCLC). Testning for PD-L1 udtryk med PD-L1 Immunhistokemi (IHC) 22C 3 følgesvend diagnostisk analyse, hvilket giver en tumor andel scorer (TPS), er blevet valideret på tumor væv. Vi udviklet en optimeret laboratorium-udviklet test (LDT), bruger 22C 3 antistof (Ab) koncentrat på et bredt tilgængelige IHC autostainer til biopsi og cytologi prøver. PD-L1 TPS blev evalueret med 120 parrede hele-tumor væv sektioner og biopsi prøver og med 70 parret biopsi og cytologi prøver (bronkial vasker, n = 40; pleural udbrud, n = 30). 22C 3 Ab koncentrat-baserede LDT viste en høj overensstemmelse mellem biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC udtryk bestemmes ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay på begge TPS cut point (≥ 1%, ≥50%). Den optimerede LDT præsenteres her, ved hjælp af 22C 3 Ab koncentrat til at bestemme PD-L1 udtryk i begge tumor væv og cytologi prøver, vil udvide laboratorier verden over evne til at vurdere berettigelsen af patienter med NSCLC for behandling med pembrolizumab monoterapi på en pålidelig og reproducerbar måde.
Introduction
Nylige kliniske forsøg har vist effekt af pembrolizumab, en humaniseret monoklonalt IgG4 kappa isotype antistof, der blokerer interaktion mellem programmeret celledød 1 (PD-1) og dens ligander, PD-L1 og PD-L2, til behandling af patienter med Fremskreden NSCLC1,2,3,4.
I øjeblikket er pembrolizumab godkendt til behandling af PD-L1-udtrykker NSCLC i både behandling-naive patienter med et PD-L1 udtryk TPS ≥50% og ingen epidermal vækstfaktor receptor (EGFR) eller Anaplastisk lymfom kinase (ALK) genomisk tumor aberrationer3 og for tidligere behandlede patienter med et PD-L1 TPS ≥ 1%1.
PD-L1 protein udtryk opdaget af IHC har været meget anvendt som en intelligent biomarkør assay for anti-PD-1/PD-L1 terapier. I pembrolizumab kliniske forsøg, blev PD-L1 TPS fremstillet med formalin-fast paraffin-embedded (FFPE) vævsprøver bestemt ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay5. Denne analyse er blevet godkendt af US Food and Drug Administration (FDA) og er blevet CE-mærket i Europa til bestemmelse af tumor PD-L1 TPS5.
Supplerende globale indstillinger på tværs af institutioner for pålidelig og høj kvalitet evalueringer af PD-L1 TPS med LDTs, som bruger 22C 3 antistof koncentrat er vigtigt at støtte kliniske beslutninger omhandlende patienternes rettigheder for pembrolizumab behandling. Et stort antal patologi laboratorier har ikke adgang til følgesvend diagnostiske PD-L1 IHC 22C 3 assay. Udviklingen af pålidelige og sammenhængende LDTs kompatibel med yderligere, bredt tilgængelige IHC autostainer platforme er derfor afgørende.
Derudover er der behov for at etablere LDTs ved hjælp af cytologi prøver, der er den eneste eksemplar type ofte tilgængelige fra NSCLC patienter. PD-L1 IHC 22C 3 følgesvend assay er valideret for resektion, core nål biopsier og bronchoscopies kun hvis bronkoskopi udbytter 100 tumorceller. Selv om ovenstående eksempel typer er ofte opnået, cytologi prøver er mere let indsamlet og er den mest almindeligt tilgængelige prøvetypen i nogle institutioner6,7. Men der er i øjeblikket ingen validerede diagnostiske assay tilgængelige for evaluering af PD-L1 udtryk i cytologi prøver; pålidelig LDTs kompatibel med cytologi prøver ønsker yderligere at lette høj kvalitet PD-L1 test.
Derudover ved fastlæggelsen af den kliniske validering af en LDT, bør IHC udføres på samme måde som de tilsvarende klinisk validerede kommercielle test8. For eksempel, bør flere kritiske trin kontrolleres for at opnå det samme signal i serie sektioner såsom antistoftitrering, forbehandling forsinkelser, inkubationstiden og forstærkning systemer9.
Vi har for nylig udviklet en optimeret LDT, der bruger 22C 3 antistof koncentrat til at evaluere PD-L1 udtryk på tumor biopsier og cytologi prøver10,11. Vi fandt en høj overensstemmelse med LDT versus “gold standard” PD-L1 IHC 22C 3 assay10,11. Denne klinisk validerede protokol vil støtte pålidelige, høj kvalitet PD-L1 test på tværs af regioner globalt.
Protocol
Representative Results
Discussion
Vi har valideret en optimeret LDT ved hjælp af 22C 3 PD-L1 antistof koncentrat, ved at sammenligne den med den tilsvarende klinisk validerede kommercielle test10,11. 22C 3 koncentreret antistof-baserede LDT viste en høj overensstemmelse mellem biopsi (~ 100%) og cytologi (~ 95%) prøver i forhold til PD-L1 IHC udtryk bestemmes ved hjælp af PD-L1 IHC 22C 3 assay på både ≥ 1% TPS og ≥50% TPS cut point. Som for nylig anbefalet af den internationale sammensl…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denne undersøgelse blev sponsoreret af Merck & Co, Inc., Kenilworth, NJ, USA. Finansieringskilderne spillede ingen rolle i undersøgelse design, dataindsamling og analyse, beslutningen om at offentliggøre eller forberedelse af manuskriptet.
Materials
| NovaPrep HQ1 | Novacyt | NA | Preservative solution for cytology specimens |
| Novaprep® HQ+ B | Novacyt | NA | Mucolytic solution |
| Tissue-Tek VIP 6 | Sakura | 6042 VIP 6 | |
| Tissue-Tek TEC 5 Tissue Embedding Console System | Sakura | 5229 TEC 5 | |
| microscope glass slide SuperFrost Plus | Thermo Fisher Scientific | 4951PLUS4 | |
| DL-Dithiothreitol powder | Sigma-Aldrich | D3801 | |
| Heidolph Multi Reax Vortex Shaker | Thermo Fisher Scientific | 13-889-410 | |
| Shandon Cytoblock | Thermo Fisher Scientific | 7401150 | |
| 22C3 anti-PD-L1 concentrate antibody | Agilent Dako | #M365329 | |
| PD-L1 IHC 22C3 pharmDx | Agilent Dako | SK006 | |
| Autostainer Link 48 | Agilent Dako | AS480 | |
| BenchMark ULTRA autostainer | Ventana | #750-600 | |
| OptiView HQ Universal Linker | Ventana | #760-700 | |
| OptiView HRP Multimer | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Amplification H2O2 | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplifier | Ventana | #760-099 | |
| OptiView Amplification Multimer | Ventana | #760-100 | |
| OptiView DAB | Ventana | #760-700 | |
| OptiView Copper | Ventana | #760-700 | |
| Hematoxylin II | Ventana | #790-2208 | |
| Bluing Reagent | Ventana | #760-2037 | |
| Cell Conditioning 1 (CC1) | Ventana | #950-124 | |
| Tissue-Tek Film Coverslipper | Sakura | 4742 |
References
- Garon, E. B., et al. Pembrolizumab for the treatment of non-small-cell lung cancer. The New England Journal of Medicine. 372 (21), 2018-2028 (2015).
- Herbst, R. S., et al. Pembrolizumab versus docetaxel for previously treated, PD-L1-positive, advanced non-small-cell lung cancer (KEYNOTE-010): a randomised controlled trial. The Lancet. 387 (10027), 1540-1550 (2016).
- Reck, M., et al. Pembrolizumab versus Chemotherapy for PD-L1-Positive Non-Small-Cell Lung Cancer. The New England Journal of Medicine. 375 (19), 1823-1833 (2016).
- Langer, C. J., et al. Carboplatin and pemetrexed with or without pembrolizumab for advanced, non-squamous non-small-cell lung cancer: a randomised, phase 2 cohort of the open-label KEYNOTE-021 study. The Lancet Oncology. 17 (11), 1497-1508 (2016).
- Buttner, R., et al. Programmed Death-Ligand 1 Immunohistochemistry Testing: A Review of Analytical Assays and Clinical Implementation in Non-Small-Cell Lung Cancer. Journal of Clinical Oncology. 35 (34), 3867-3876 (2017).
- Folch, E., Costa, D. B., Wright, J., VanderLaan, P. A. Lung cancer diagnosis and staging in the minimally invasive age with increasing demands for tissue analysis. Translational Lung Cancer Research. 4 (4), 392-403 (2015).
- Padmanabhan, V., et al. Improving Adequacy of Small Biopsy and Fine-Needle Aspiration Specimens for Molecular Testing by Next-Generation Sequencing in Patients With Lung Cancer: A Quality Improvement Study at Dartmouth-Hitchcock Medical Center. Archives of Pathology & Laboratory Medicine. 141 (3), 402-409 (2017).
- Tsao, M. S., et al. . IASLC ATLAS of PD-L1 Immunohistochemistry Testing in Lung Cancer. , (2017).
- Thunnissen, E., de Langen, A. J., Smit, E. F. PD-L1 IHC in NSCLC with a global and methodological perspective. Lung Cancer. , 102-105 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-PD-L1 antibody to determine PD-L1 expression in multiple automated immunohistochemistry platforms. PLoS One. 12 (8), e0183023 (2017).
- Ilie, M., et al. Use of the 22C3 anti-programmed death ligand 1 antibody to determine programmed death ligand 1 expression in cytology samples obtained from non-small cell lung cancer patients. Cancer Cytopathology. 126 (4), 264-274 (2018).
- Skov, B. G., Skov, T. Paired Comparison of PD-L1 Expression on Cytologic and Histologic Specimens From Malignancies in the Lung Assessed With PD-L1 IHC 28-8pharmDx and PD-L1 IHC 22C3pharmDx. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 25 (7), 453-459 (2017).
- Russell-Goldman, E., Kravets, S., Dahlberg, S. E., Sholl, L. M., Vivero, M. Cytologic-histologic correlation of programmed death-ligand 1 immunohistochemistry in lung carcinomas. Cancer Cytopathology. 126 (4), 253-263 (2018).
- Heymann, J. J., et al. PD-L1 expression in non-small cell lung carcinoma: Comparison among cytology, small biopsy, and surgical resection specimens. Cancer Cytopathology. 125 (12), 896-907 (2017).
- Stoy, S. P., Rosen, L., Mueller, J., Murgu, S. Programmed death-ligand 1 testing of lung cancer cytology specimens obtained with bronchoscopy. Cancer Cytopathology. 126 (2), 122-128 (2018).
- Ilie, M., Hofman, P. Reproducibility of PD-L1 assessment in non-small cell lung cancer-know your limits but never stop trying to exceed them. Translational Lung Cancer Research. 6 (Suppl 1), S51-S54 (2017).
