Vi beskriver brugen af hæmatopoietisk stamcelletransplantation (HSCT) til at vurdere det maligne potentiale af gensplejsede hæmatopoietisk celler. HSCT er nyttigt for evaluering af forskellige maligne hæmatopoietisk celler i vivo samt generere en stor kohorte af mus med myelodysplastisk syndrom (MDS) eller leukæmi for at evaluere nye behandlingsformer.
Myelodysplastisk syndrom (MDS) er en meget forskelligartet gruppe af hæmatopoietisk stamcelle lidelser, der er defineret af ineffektive bloddannelsen, perifert blod cytopenier, dysplasi og en tilbøjelighed til transformation til akut leukæmi. NUP98-HOXD13 (NHD13) Transgene mus sammenfatte menneskelige MDS perifert blod cytopenier, dysplasi og transformation til akut leukæmi. Vi viste tidligere at MDS vil kunne overføres fra en genetisk manipulerede mus med MDS til wild-type modtagere af omplantning MDS knoglemarv nukleeret celler (BMNC). Til mere klart forstå cellen MDS i oprindelse, vi har udviklet metoder til transplantation specifikke, immunophenotypically defineret hæmatopoietisk undersæt. I denne artikel vil beskrive vi processen med at isolere og omplantning specifikke populationer af hæmatopoietisk stamceller og stamceller. Efter transplantation beskriver vi metoder til at vurdere effektiviteten af transplantation og persistens af donor MDS celler.
Myelodysplastisk syndrom (MDS) repræsenterer et mangfoldigt sæt af klonede blodsygdomme karakteriseret af ineffektive bloddannelsen, morfologiske tegn på dysplasi og en tilbøjelighed til transformation til akut myeloid leukæmi (AML)1,2 ,3,4. Ineffektiv bloddannelsen er anerkendt som en modning anholdelse i knoglemarven og resultater i perifert blod cytopenier trods en hypercellular knoglemarv1,3. Forekomsten af MDS har været skiftevis anslået 2-12 tilfælde pr. 100.000 personer om året i USA, og forekomsten af MDS stiger med alderen, hvilket gør dette en vigtig betingelse for at forstå i betragtning af aldrende amerikanske befolkning3, 5. Selv om de fleste tilfælde af MDS har ingen klar ætiologi, der nogle tilfælde af MDS menes at være på grund af eksponering for kendte genotoksiske stoffer, herunder opløsningsmidler som benzen, og kræft kemoterapi6.
MDS patienter har typisk erhvervet mutationer i MDS celler7. Selvom relativt ualmindeligt, har en række af MDS patienter erhvervet balancerede kromosomale translokationer involverer gener såsom NUP98, EVI1, RUNX1 og MLL (http://cgap.nci.nih.gov/Chromosomes/Mitelman). Vores laboratorium har en mangeårig interesse i kromosom omplantninger, som indebærer, at NUP98 gen8. Transgene mus at udtrykke en NUP98-HOXD13 (NHD13) transgen reguleret af Vav1-promotor og forstærker elementer vise alle nøglefunktioner i MDS, herunder perifert blod cytopenier, morfologiske tegn på dysplasi og transformation til AML9 .
Selvom MDS har været anerkendt for over 60 år10, og anses for at være en klonal stamcelle lidelse, har bestræbelser på at indpode human MDS celle i immundefekte mus været stort set forgæves, fordi MDS celler indpode dårligt11, 12,13,14 og musene ikke udvikler kliniske sygdom. I et forsøg på at identificere, hvilke hæmatopoietisk celler kan overføre MDS, vi viste at NHD13 modellen, og viste, at vi kunne indpode MDS som en sygdom enhed, der viste alle de kardinale funktioner af menneskelige MDS, herunder perifert blod cytopenier, dysplasi, og transformation til AML15. I denne betænkning præsenterer vi de tekniske detaljer i disse eksperimenter samt tilgange til yderligere fractionate hæmatopoietisk stilk og forløber celler (HSPC), i et forsøg på at identificere MDS-indlede celler.
Selvom MDS er en klonal hæmatopoietisk stamcelle lidelse, MDS “stammer”, eller igangsættende celler, endnu ikke er blevet karakteriseret. Vi viste tidligere at MDS kan være ender til WT mus med knoglemarv fra NHD13 mus af HSCT, karakteriseret ved makrocytisk anæmi, leukopeni, neutropeni og morfologiske tegn på dysplasi15. Derudover identificeret konkurrencedygtige genindsættelse assays en vækst fordel af celler fra knoglemarven NHD13 MDS. Taget sammen, indebærer disse konklusioner eksisten…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af den murene Research Program af National Cancer Institute, National Institutes of Health (tildele numre ZIA SC 010378 og BC 010983).
14 mL round bottom tube | Falcon | 352057 | |
Hank's balanced salt solution | Lonza | 10-527F | |
Anti-CD45.2 antibody | Southern Biotech | 1800-15 | LOT# A077-T044O |
3 mL Syringe | Monoject | 8881513934 | |
27-G needle | BD | 305109 | |
20-G needle | BD | 305176 | |
Lineage Cocktail | Miltenyi | 130-090-858 | LOT# 5170418221 |
Anti-Biotin antibodies | Miltenyi | 130-113-288 | LOT# 5171109046 |
1 mL Syringe | Excelint | 26027 | Insulin Syringe |
Heating Lamp | Thermo Fisher Scientific | E70001901 | |
FACS machine | Cytec | FACScan | 2 lasers, 5 color detectors |
FACS sorting instrument | Beckman Coulter | MOFLO ASTRIOS | 5 lasers, 23 parameters, 6 population sorting simulteneously |
Propidium Iodide | Thermo Fisher Scientific | P3566 | |
Gamma Irradiator | Best Theratronics | Gammacell 40 | |
Blood collection tube | RAM scientific | 76011 | |
Recipient mice | Charles River | B6-LY5.1/Cr, CD45.1 | |
NUP98-HOXD13 mice | n/a | C57Bl/6, CD45.2 | Colony maintained at NIH |
5 mL round bottom tube | Falcon | 352058 |