마우스에 Veno 정 맥 체 외 막 산소

Summary

여기 선물이 아닌 intubated에 veno 정 맥 체 외 막 산 소화 (ECMO)의 기술, 저절로 호흡 마우스를 설명 하는 프로토콜. ECMO murine 모델 실험 연구의 급성 및 말기 폐 질환에 효과적으로 구현할 수 있습니다.

Abstract

체 외 막 산 소화 (ECMO)의 사용은 최근 몇 년 동안에서 크게 증가 했다. ECMO는 안정적이 고 효과적인 치료 되고있다 말기 폐 질환 뿐만 아니라 급성. 임상 수요에 ECMO의 장기간된 사용 증가 함께 절차 최적화 및 다중 장기 손상의 예방 중요 있습니다. 이 프로토콜의 목표는 비-intubated, veno 정 맥 ECMO의 상세한 기술을 제시 하 마우스를 자연스럽 게 호흡 이다. 이 프로토콜 ECMO 수술 단계의 기술적인 디자인을 보여 줍니다. 이 murine ECMO 모델 이상 ECMO (예를 들어, 염증, 출혈 및 thromboembolic 이벤트) 관련 연구를 촉진 한다. 유전자 변형된 생쥐의 풍부 때문에 ECMO 관련 합병증에 관련 된 분자 메커니즘 수 있습니다 또한 수 해 부.

Introduction

체 외 막 산 소화 (ECMO) 적절 한 가스 교환 및 관류 하는 폐와 심장의 기능을 수행 하는 임시 생명 지원 시스템입니다. 힐 외¹ 1972 년; 환자에 ECMO 처음 사용 설명 그러나, 그것은 단지 되었다 널리 이용 된다 2009²유행 성 H1N1 인플루엔자 중 그것의 성공적인 신청 후. 오늘, ECMO 말기 심장 및 폐 질환³인명 구조 절차로 정기적으로 사용 됩니다. Veno 정 맥 ECMO는 점점 고용에서 침략 적 기계 환기 하는 대신 깨어, intubated, 자발적으로 내 화 호흡⁴환자 호흡.

그것의 대폭적인 채용에도 불구 하 고 다양 한 합병증 ECMO^5,,67에 대 한 보고 되었습니다. ECMO에 환자에 의해 경험 될 수 있는 합병증에는 출혈, 혈전 증, 패 혈 증, 혈소판, 장치 관련 오작동 및 공기 색 전 증 포함 됩니다. 또한, 조직의 염증 반응 증후군 (해보자) 다중 장기 손상의 결과로....

Protocol

실험 12 주 세 남성 C57BL/6 마우스에 수행 했다. 이 연구는 프로토콜 TSA 16/2250 아래 독일 동물성 법률의 지침에 따라 실시 되었다.

1. 재료 준비

참고: 모든 단계는 깨끗 한, 비 살 균 조건 하에서 수행 됩니다. 무 균 조건 동물 postoperatively 살아 있을 경우 필요한 것입니다.

1. 16 X 확대와 함께 현미경 수술 블레이드를 사용 하 여 2-Fr 폴리우레탄 튜브에 3 fenestrations를 소개 합니다.
   참고: 모든 fenestrations는 최적의 혈액 배수 되도록 정의 원심 세 번째에 위치 해야 합니다.
2. 못쓰게 솔루션 (자료 테이블)을 준비 합니다. 30 IU/mL 헤 파 린 및 2.5 %v / v NaHCO₃의 8.4% 솔루션을 포함 합니다. 사용할 준비가 될 때까지 4 ° C에서이 솔루션을 냉동. 프라임 프라이 밍 솔루션의 500 ul 회로.
3. 못쓰게 솔루션으로 유출 정 맥을 놓고 ECMO 기계 연동 펌프에 전환 하 여 입력 합니다. 1 mL/min의 유량에 다음 30 분 동안 컴퓨터를 못쓰게 솔루션을 회람 하기 위하여 계속 한다.
....

Results

이 프로토콜 veno 정 맥 ECMO는 마우스에서의 방법을 설명합니다. 이 모델은 신뢰할 수 있는 하 고 재현할 수, 호흡과 순환 상 검거^12,13CPB의 앞에서 설명한 모델에 비해, 그것은 덜 기술적으로 확립을 요구.

정 맥 시스템에 ECMO 흐름 1.5와 5 mL/min 사이 유지 되었다. 평균 동맥 압력 ECMO 회로에 여분의 못쓰게 솔루션을 추가 하 여 70, 85 mmHg 사이 유지 했다. 일반적으로, 추가 못쓰게 솔루션의 0.1 mL의 회로에 ECMO 동안 혈액 볼륨의 대체 수 있습니다. 모든 볼륨 대체 또는 버퍼링 솔루션을 통해 대 퇴 동맥 또는 공기 트래핑 저수지 부여 했다.

Discussion

이전에 우리는 마우스^12,13CPB의 성공적인 모델을 설명합니다. 같은 모델을 구현 하기 위해 급성 또는 말기 폐 질환 마우스는 사용 하기 쉬운 veno 정 맥 ECMO 회로 개발. CPB 모델, veno 정 맥에 다른 ECMO 필요 하지 않습니다 sternotomy 대동맥의 클램핑 등 복잡 한 수술 절차 따라서 완전히 heparinized 동물에 상처 출혈의 위험을 감소. 혈전과 oxygenator의 색전술을 피하기 위해, 2.5 IU 덤플링을/kg의 각 동물에 주어 집니다. 이 복용량의 활성화 된 응고 시간 (ACT)는 혈액의 전체 anticoagulation 이전 측정에 근거 했다 (> 800 초 법). 마이크로-oxygenator에서 헤 파 린 코팅의 부재로 인해 우리의 anticoagulation 프로토콜 우리의 CPB 절차와 유사한 것 유지 했다.

CPB 회로 비해.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sterofundin	B.Braun Petzold GmbH	PZN : 8609189	테트라 스판
테트라 스판 6 % 솔루션	B. 브라운 Melsungen AG	PZN :	05565416 1 : 1 Sterofundin
Heparin Natrium 25.000	Ratiopharm GmbH	PZN :	3029843 2,5 IU / ml 프라이밍
NaHCO3 8,4 % 솔루션	B. 브라운 Melsungen AG	PZN :	프라이밍 솔루션 1579775 3 %
Carprofen	Zoetis Inc., 미국	PZN:00289615	5mg/kg/BW
1 Fr PU 카테터	Instechlabs INC., 미국	C10PU-MCA1301	경동
2 Fr PU 카테터	Instechlabs INC., 미국	C20PU-MJV1302	경정맥
8-0 실크 봉합사 꼰	Ashaway 라인 & Twine Co., USA	75290	ligature
Isoflurane	Piramal Critical Care GmbH	PZN:9714675	narcosis
스프링 가위 - 6mm Blades	Fine Science Tools GmbH	15020-15	instruments
Spring Scissors - 2mm Blades Fine	Science Tools GmbH	15000-03	instruments
Halsted-Mosquito Hemostat	Fine Science Tools GmbH	13009-12	악기
Dumont #55 Forceps	Fine Science Tools GmbH	11295-51	기기
Castroviejo 마이크로 니들 홀더 - 9cm	Fine Science Tools GmbH	12060-02	기기
Micro Serrefines	Fine Science Tools GmbH	18555-01	기기
Bulldog Serrefine	Fine Science Tools GmbH	18050-28	기기
Isoflurane 기화기 Dräger 19.1	박사 & auml; gerwerk AG & Co. KGaA		마취 1,3 -2,5%
ISOHEART 소프트웨어를 사용한 다중 채널 데이터 수집 장치	Hugo Sachs Elektronik GmbH, 독일		침습적 압력, ECG, t ° C
i-STAT 휴대용 장치	Abbott Laboratories, Lake Bluff, Illinois, USA		혈액 가스 분석
i-STAT CG4 + 및 CG8 + 카트리지	Abbott Laboratories, Lake Bluff, Illinois, USA		혈액 가스 분석
C57Bl/6 마우스, 수컷, 30g, 14주 된	Charles River Laboratories		1주일 전에 보관