우리는 안전 및 태 반 대상 약물 전달의 효과 평가 하기 위해 세 가지 방법을 사용 하는 시스템을 설명: vivo에서 이미징 나노 축적, 태 반 및 태아 개발을 모니터링 하 고 주파수 초음파를 모니터링 하 그리고 조직에 약물 전달 척도를 HPLC.
이 콘텐츠를 보려면 JoVE 구독이 필요합니다. 로그인하거나 오늘 무료 평가판을 시작하세요.
이 논문에서
요약
초록
더 효과적인 치료 태 반 관련 임신 합병증에 대 한 현재 존재 하 고 도전 남아 태아와 모성의 부작용을 최소화 하면서 태 반에 약물의 타겟된 배달에 대 한 전략을 개발. 타겟된 나노 캐리어 placental 질환을 치료 하는 새로운 기회를 제공 합니다. 우리는 최근에 합성 placental chondroitin 황산 염 A 바인딩 펩 티 드 (plCSA-BP) 태 반에 약물을 전달 하기 위해 나노 가이드 사용 될 수 보여 주었다. 이 프로토콜에서 설명 자세히 plCSA-혈압 사용 세 별도 메서드를 사용 하 여 태 반에 약물 전달의 효율성을 평가 하기 위한 시스템: vivo에서 이미징, 높은-주파수 초음파 (HFUS), 및 높은 성능 액체 착 색 인쇄기 (HPLC)입니다. Vivo에서 를 사용 하 여 이미징, plCSA BP-기반 나노 했다 시각에 살아있는 동물의 반응과 HFUS 및 HPLC는 plCSA BP 활용 된 나노 효율적이 고 구체적으로 전달 토트 태 반에 시연 하는 동안. 따라서, 이러한 방법의 조합은 태 반에 약물의 타겟된 배달 및 여러 가지 임신 합병증에 대 한 새로운 치료 전략의 개발을 위한 효과적인 도구로 사용할 수 있습니다.
서론
사전 eclampsia, 임신 손실, placental 속보 및 작은 임신 연령 (SGA)를 포함 하 여 중재 하는 태 반 임신 합병증은 일반적이 고 실질적인 태아와 산 모 병 적 상태와 사망률1,2,에 3, 그리고 거의 약4,5장애 임신 치료에 효과적인 것으로 입증 되었습니다. 임신 중 더 선택적이 고 안전한 태 반 대상 약물 전달에 대 한 전략의 개발 현대 약물 치료에 도전 남아 있습니다.
최근 몇 년 동안, 여러 보고서 태 타겟팅 도구로 펩 티 드 또는 항 체 나노 입자 코팅에 의해 uteroplacental 조직에 약물의 타겟된 배달에 집중 했다. 이러한 안티 표 피 성장 인자 수용 체 (EGFR)6 항 체, 등 종양 유도 펩 티 드 (CGKRK 및 iRGD)7, 태 반 대상 펩 티 드8, placental 맥 관 구조 대상 펩 티 드
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
프로토콜
모든 마우스 실험 동물 관리 및 사용 위원회의 심천 연구소의 첨단 기술, 과학의 중국 아카데미에 의해 승인 되는 프로토콜 (SIAT-IRB-160520-YYS-FXJ-A0232)에 엄격 하 게 따 랐 다.
1. 태 반 Chondroitin 황산 염 A 대상 지질 고분자 나노 입자의 합성
- MTX 및 ICG 로드 지질 고분자 나노 입자를 합성 (MNPs와 INPs 각각) plCSA BP 활용 된 나노 입자 (plCSA-MNPs와 plCSA INPs)에 설명 된 대로 자세하게 다른18.
2. vivo 형광 이미징
-
임신 쥐의 준비
- 한 장에 동일한 긴장의 비옥한 남성 여성 CD-1 마우스 (8-12 주) 장소 (남성: 여성 = 1:2) 확인 하 고 오후에는 질 플러그 다음 아침. 질 플러그 관찰 되는 경우 배아 하루 0.5 (E0.5)으로 마우스를 정의 합니다.
- 집 임신 마우스 혼자 어두운 14 h 빛/10 h 동물 병원 체 없는 방에 주기을 E14.5까지 음식과 물에 대 한 무료 액세스를 제공 합니다.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
결과
이 원고, plCSA BP 활용 된 나노 로드 MTX (plCSA-MNPs) 또는 ICG (plCSA-INPs) 했다 임신 쥐에 정 맥 주입 됩니다. Vivo에서 영상 plCSA INP 주입 후 자 궁 30 분의 지역에서 강한 ICG 신호를 밝혔다. INPs 했다 주로 간, 비장 지역 (그림 1A) 지역화 됩니다. PlCSA-INP 주사 후 48 h, 임신 쥐 ICG 신호 없는 신호와 태 반에만 태아 (그림 1B)에 감지 했다 드러내는 희생 했다.
우리는 나노 입자의 정 맥 주입 후 배아 개발 모니터링 데 HFUS를 사용 됩니다. 생체 인식 측정 포함 임신 성 골목 길이 (GS), 태아 크라운 둔 부 길이 (CRL), biparietal 직경.......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
토론
이 원고에서 우리 plCSA BP-기반 나노 입자 약물의 태 반 배달 대상에 대 한 효율적인 도구 인지 결정 하기 위한 3-방법 시스템 개요. Vivo에서 이미징 적외선 형광 ICG 신호를 모니터링 하는 데 사용 plCSA BP. 사용의 placental 대상 특이성을 확인 HFUS 및 HPLC, 우리 plCSA BP 활용 된 나노 입자 수에 MTX 제공 효율적으로 시연 합니다 태 반 세포, 태아에 게 하지입니다.
Vivo에서 형광 이미징 실험, 임신 쥐의 임신 나 중요 하다. 태 양식 E9.521주위를 시작합니다. 또한, 고려는 영상 해상도는 vivo에서 이미징 실험 수행 되어야 한다 E 10.5 후. 이 프로토콜에 따라 전자 11.5에서 plCSA INP 주입 후 형광 신호는 피부와 내부 장기 신호 전송22방지 되었을 수 있습니다 설명된 조건 .......
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
공개 사항
X.F.와 B.Z.는 민 태 반 관련 약물 전달 방법을 포함 하 여 특허 출원 PCT/CN2017/108646 제출 및 그 응용 프로그램에 대 한 발명가. 다른 모든 저자 들은 아무 경쟁 관심사를 선언 합니다.
감사의 글
이 작품에서 국립 자연 과학 재단 (81771617) 및 자연 과학 재단의 광 동 지방 (2016A030313178) X.F.;에 게 수 여 교부 금에 의해 지원 되었다 심천 기본 연구 기금 (JCYJ20170413165233512) X.F;에 수 여에서 부여 유 니스 케네디 슈 라이버 국립 연구소의 아동 건강 및 보너스 번호 R01HD088549에서 건강의 국가 학회의 인간 발달 (전적으로 저자의 책임은 내용과 반드시 공식 대표 하지 않는다 국립 보건원의 조회) N.N. 하
....액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| CD-1 마우스 | 베이징 바이탈 리버 | 201 | 여성 (8-12 주) |
| 인슐린 주사기 | BD | IV 주입 | 328421 |
| 에탄올 절대 | Sinopharm | 나노 입자 합성을위한 | 10009218 |
| 대두 레시틴 | Avanti Polar Lipids | 나노 입자 합성 용 | 441601 |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 나노 입자 합성을위한 | 880125 |
| PLGA | 노 입자 합성을위한 | 시그마 - 알드리치 | 719897 |
| 초음파 프로세서 | 나 | 노 입자 합성 용 | Sonics VCX130 |
| 메토 트렉세이트 (MTX) | 노 입자 합성 용 | 시그마 - 알드리치 | V900324 |
| 인도 시아닌 그린 (ICG) | 시그마 알드리치 | 1340009 | 생체 내 이미징 |
| 인산염 완충 식염수(PBS) | Hyclone | SH30028.01 | |
| IVIS 스펙트럼 기기 | Perkin Elmer | 생체 내 이미징 | |
| 초음파 투과 젤 | Guanggong | ZC4252418 | 초음파 이미징 |
| Isoflurane | Lunan 제약 | I0040 | 마취 |
| 유지 제모 크림 | Nair | 털 제거용 | TMG001 |
| 40MHz 변환기 | VisualSonics | MS550S | 초음파 이미징 |
| 용 MS550S 고주파 초음파 이미징 시스템 | VisualSonics | Vevo2100 | 초음파 이미징 |
| 용 Avertin | Sigma-Aldrich | T48402 | 마취 |
| 주사기 펌프 | Mindray | SK-500III | forcardiac 관류 |
| 0.9% 식염수 | Meilunbio | MA0083 | forcardiac 관류 |
| 1.5 mL 폴리프로필렌 튜브 | AXYGEN | MCT-150-C-80 | |
| ° C 냉동고 | Thermo Fisher Scientific | 88600V | |
| 원심분리기 | Cence | H1650R | |
| 과염소산 | Sigma-Aldrich | 311421 | 단백질 침전용 |
| 균질화기 | SCIENTZ | SCIENTZ-48 | 조직 균질화용 |
| 주사기 필터(0.45 μ m) | Millipore | SLHV033RS01 | |
| 수산화 나트륨 | Sinopharm MTX | ||
| HPLC 바이알 | 해결을 | Waters 670650620 HPLC | |
| 인산칼륨 이염기성 | Sinopharm | HPLC | |
| 세토니트릴 | JK화학 | 932537 | HPLC |
| C18 컬럼 | Waters 용 화학 | HPLC HPLC | |
| 시스템 | Shimadzu | HPLC의 |
참고문헌
- Rodger, M. A., et al. The Association of Factor V Leiden and Prothrombin Gene Mutation and Placenta-Mediated Pregnancy Complications: A Systematic Review and Meta-analysis of Prospective Cohort Studies. PLOS Medicine. 7 (6), e1000292(2010).
- Rodger, M. A., et al.
액세스가 제한되었습니다. 이 콘텐츠를 보려면 로그인하거나 체험판을 시작하세요.
재인쇄 및 허가
