Descriviamo un sistema che utilizza tre metodi per valutare la sicurezza e l’efficacia della somministrazione di farmaci mirati placenta: in vivo imaging per monitorare l’accumulo delle nanoparticelle, ultrasuono ad alta frequenza per monitorare lo sviluppo placenta e fetale e HPLC per quantificare la consegna della droga al tessuto.
Nessun trattamenti efficaci attualmente esistenti per le complicazioni di gravidanza placenta-collegata, e lo sviluppo di strategie per la somministrazione mirata di farmaci alla placenta, riducendo al minimo gli effetti collaterali materni e fetali rimane impegnativo. I vettori delle nanoparticelle mirate fornire nuove opportunità per trattare i disordini placentari. Recentemente abbiamo dimostrato che un peptide sintetico placentare Condroitin solfato A associazione (plCSA-BP) potrebbe essere usato per guidare le nanoparticelle per consegnare i farmaci alla placenta. In questo protocollo, descriviamo dettagliatamente un sistema per valutare l’efficienza di consegna della droga alla placenta di plCSA-BP che impiega tre metodi distinti utilizzati in combinazione: in vivo imaging, ultrasuono ad alta frequenza (HFUS) e ad alte prestazioni cromatografia liquida (HPLC). Utilizzo in vivo imaging, plCSA-BP-guidata nanoparticelle sono state visualizzate in placente di animali vivi, mentre HFUS e HPLC ha dimostrato che nanoparticelle plCSA-BP-coniugato in modo efficiente e in particolare consegnato metotrexato alla placenta. Così, una combinazione di questi metodi può essere utilizzata come strumento efficace per la somministrazione mirata di farmaci alla placenta e lo sviluppo di nuove strategie di trattamento per diverse complicazioni di gravidanza.
Complicazioni di gravidanza placenta-mediata, tra cui pre-eclampsia, la perdita di gravidanza, distacco della placenta e piccola età gestazionale (SGA), sono comuni e portare a sostanziale morbilità materna e fetale e mortalità1,2, 3e molto pochi farmaci hanno dimostrato di essere efficace per il trattamento di gravidanza disturbi4,5. Lo sviluppo di strategie per la consegna di droga placenta-mirati più selettivi e più sicura durante la gravidanza rimane impegnativo nella terapia farmacologica moderna.
Negli ultimi anni, parecchi rapporti sono concentrati sulla somministrazione mirata di farmaci di uteroplacental tessuti di rivestimento di nanoparticelle con peptidi o anticorpi come strumenti di targeting per placenta. Questi includono un anticorpo di anti-fattore di crescita recettore (EGFR)6 , tumore-homing peptidi (CGKRK e iRGD)7, placenta-mirato peptidi8, peptidi di targeting per sistema vascolare placentare9 e gli anticorpi contro il L’ossitocina del ricevitore10.
Qui, dimostriamo che un peptide sintetico placentare Condroitin solfato A associazione (plCSA-BP) può essere utilizzato per la somministrazione mirata di nanoparticelle e loro carichi di droga di placenta11. Le nanoparticelle plCSA-BP-guidati sono complementari alla uteroplacental segnalati metodi di targeting, perché prendono di mira il trofoblasto placenta.
Come un metodo non invasivo, in vivo imaging è stato utilizzato per monitorare l’espressione genica placenta-specifica in topi12e verde di indocianina (ICG) è stato ampiamente utilizzato per tenere traccia di nanoparticelle utilizzando sistemi13, di formazione immagine di fluorescenza 14,15. Così, abbiamo iniettato per via endovenosa plCSA-BP-coniugato nanoparticelle caricate con ICG (plCSA-INPs) per visualizzare la distribuzione di plCSA-INP in topi incinta con un imager di fluorescenza. Abbiamo quindi iniettato per via endovenosa di methotrexate (MTX)-caricato plCSA-NPs in topi incinti. L’ultrasuono ad alta frequenza (HFUS), un altro non-invasiva, in tempo reale strumento16,di imaging17 è stato utilizzato per monitorare lo sviluppo fetale e placenta nei topi. Infine, abbiamo usato ad alte prestazioni cromatografia liquida (HPLC) per quantificare la distribuzione di MTX in placente e feti.
In questo protocollo, descriviamo dettagliatamente il sistema di tre-metodo utilizzato per valutare l’efficienza di consegna della droga placenta-mirati da nanovettori plCSA-BP-guidata.
In questo manoscritto, delineiamo un sistema di tre-metodo per determinare se le nanoparticelle plCSA-BP-guida sono uno strumento efficace per la consegna di farmaci alla placenta di targeting. L’uso di in vivo imaging per monitorare il segnale a infrarossi fluorescente ICG confermato la specificità di targeting placenta di plCSA-BP. Using HFUS e HPLC, abbiamo dimostrato che nanoparticelle plCSA-BP-coniugato possono fornire in modo efficiente MTX solo per il cellule della placenta, non per il feto.
<p class…The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto da borse di studio dalla Fondazione nazionale di scienze naturali (81771617) e la scienza naturale Fondazione della provincia di Guangdong (2016A030313178) assegnato a X.F.; una sovvenzione dalla Shenzhen Basic Research Fund (JCYJ20170413165233512) assegnato a X.F; Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health e lo sviluppo umano del National Institutes of Health, sotto Premio numero R01HD088549 (il contenuto è di esclusiva responsabilità degli autori e non rappresentano necessariamente il funzionario viste del National Institutes of Health) di N.N.
CD-1 mice | Beijing Vital River | 201 | Female (8-12 week) |
Insulin syringe | BD | 328421 | for IV injection |
Ethanol absolute | Sinopharm Chemical | 10009218 | for nanoparticles synthesis |
Soybean lecithin | Avanti Polar Lipids | 441601 | for nanoparticles synthesis |
DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | for nanoparticles synthesis |
PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | for nanoparticles synthesis |
Ultrasonic processor | Sonics | VCX130 | for nanoparticles synthesis |
Methotrexate (MTX) | Sigma-Aldrich | V900324 | for nanoparticles synthesis |
Indocyanine green (ICG) | Sigma-Aldrich | 1340009 | for in vivo imaging |
phosphate-buffered saline (PBS) | Hyclone | SH30028.01 | |
IVIS spectrum instrument | Perkin Elmer | for in vivo imaging | |
Ultrasound transmission gel | Guanggong | ZC4252418 | for ultrasound imaging |
Isoflurane | Lunan Pharmaceutical | I0040 | for maintain the anesthesia |
Depilatory cream | Nair | TMG001 | for removing fur |
40 MHz transducer | VisualSonics | MS550S | for ultrasound imaging |
High-frequency ultrasound imaging system | VisualSonics | Vevo2100 | for ultrasound imaging |
Avertin | Sigma-Aldrich | T48402 | for anesthesia |
Syringe pump | Mindray | SK-500III | forcardiac perfusion |
0.9% saline solution | Meilunbio | MA0083 | forcardiac perfusion |
1.5 mL Polypropylene tubes | AXYGEN | MCT-150-C | |
-80 °C freezer | Thermo Fisher Scientific | 88600V | |
Centriguge | Cence | H1650R | |
Perchloric acid | Sigma-Aldrich | 311421 | for precipitating protein |
Homogenizer | SCIENTZ | SCIENTZ-48 | for homogenizing tissue |
Syringe filter (0.45 μm) | Millipore | SLHV033RS01 | |
Sodium hydroxide | Sinopharm Chemical | 10019763 | for solving MTX |
HPLC vials | Waters | 670650620 | for HPLC |
Potassium phosphate dibasic | Sinopharm Chemical | 20032117 | for HPLC |
Acetonitrile | JKchemical | 932537 | for HPLC |
C18 column | Waters | 186003966 | for HPLC |
HPLC system | Shimadzu | for HPLC |