우리가 생산 하는 수확에 대 한 프로토콜을 설명 하는 여기 전체 간격 피부 조직 기증자를 유발 하지 않고 수집 하는 데 사용할 수 있는 바늘 흉터 사이트. 바늘 대량 수확을 달성 하는 간단한 컬렉션 시스템 결합 될 수 있다.
Abstract
이 원고는 전체 두께 피부 조직의 microcolumns를 수집 하는 데 사용할 수 있습니다 상용 구성 요소에서 만든 실험실 기구에 대 한 생산 과정을 설명 합니다. 작은 크기는 microcolumns의 수 기증자 기증자 사이트 전체 두께 조직 활성화 피부 조직의 포함 하 여 모든 세포와 세포 외 구성 요소의 관련을 수확 하면서 흉터를 유발 하지 않고 신속 하 게 치료 하는 사이트 깊은 피부 지역와 부속 피부 구조는 기존의 조직 공학 기법을 사용 하 여 성공적으로 복제를 아직 있다. microcolumns을 치료, 보강 피부 상처에 직접 적용 될 수 있다 또는 다른 조직 공학 접근에 대 한 헌 세포/조직 소스로 사용할 수 있습니다. 수확 바늘 표준 피하 주사 바늘, 수정 하 여 만들어진 고 수확 하는 적은 양의 조직에 대 한 단독 사용 하거나 간단한 흡입 기반 컬렉션 시스템 (또한 일반적으로 사용 가능한 실험실에서 만든)을 함께 수 있습니다. 높은-볼륨에서 큰 동물 모델 연구를 촉진 하기 위하여 수확.
Introduction
자가 피부 이식 상처 복구의 주류 이지만 그것은 기증자 사이트 부족 및 병 적 상태, 기존의 피부 이식1,2 대체 하는 새로운 치료 옵션을 개발 하 최근 몇 십년 간에서 공동된 노력을 선도 의해 제한 . 우리는 최근 기증자 사이트 사망률을 최소화 하면서 전체 간격 피부 이식의 혜택을 활용 하는 피부를 수확의 다른 방법 개발. 소형 (~0.5 m m 직경) “microcolumns”의 형태로 전체 간격 피부 수집, 기증자 사이트 신속 하 고 정상적인 상황에서 흉터 없이 치유 수 있습니다 (잠재적인 예외 아래 토론 섹션 참조)3. Microcolumns 가속 상처 폐쇄, 수축3, 줄이고 상처 침대에 직접 적용할 수 있으며 다양 한 표 피 및 피부 세포 유형 및 기능 부속 구조4에서 결여 되는 많은 복원 기존의 분할 간격 피부 이식 또는 현재 bioengineered 피부 대체5. 치유 증가 시키기 위해 microcolumns의 능력과 그들의 기증자 사이트 흉터 없이 치료 하는 둘 다 독립적으로 유효성이 검증 되지 다른 연구 그룹6,7.
우리는 이전 규모8; microcolumns 컬렉션을 사용 하기 실험실 수확 시스템 개발 그러나,이 시스템은 널리 사용할 수 있는 여러 사용자 지정된 구성 요소 구성 된다. 여기, 우리가 자세히 설명 과정에서 주로 상용 구성 요소, 대량 수확을 달성 하는 데 사용할 수 있습니다 만든 간단한 컬렉션 시스템, 뿐만 아니라 바늘, 수확 생산. 이 원고에 설명 된 장치는 적합 한 시험관 및 동물 작업, 그러나 인 간에 있는 사용. 인 간에 있는이 기술을 적용 하기 위한 임상 장치 FDA 허가를 상업적으로 사용할 수 있지만 여기에서 다루지 않습니다.
Protocol
모든 작업 관련 된 살아있는 동물 그리고 동물 조직 샘플 매사추세츠 일반 병원 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)에 의해 승인 되었습니다. 1입니다. 바늘의 생산 생산 단계의 설정 게시물에 여성 luer 잠금 커넥터 연결 하 고는 luer 잠금 (그림 1A) 무대의 중앙에 회전 무대에 게시물을 탑재. 이 첫 번째 회전 무대를 세?…
Representative Results
수확 바늘 microcolumns 약 80-90% 성공 속도, 전체 두께 피부 조직의 수집 수 그리고 각 microcolumn 표 피, 진 피, 그리고 피하 지방을 (그림 4)를 포함 해야 합니다. 수확의 성공률은 낮은, 또는 조직에 바늘을 삽입 하기 어려워진 경우 새로운 바늘 가능성이 필요 하다. 수확에 대 한 성공률도 새 바늘으로 일관 되 게 낮은 경우 바늘 너무 짧은 아마 있습니다.</p…
Discussion
여기에 설명 된 방법은 비보에 큰 동물 연구, 상용 실험실에서 만든 도구를 사용 하 여 충분 한 수량에 조직 microcolumns 컬렉션을 사용 하기 위한 것입니다. 이 장치는 이전 조직 삭제 인간의 피부4,9 라이브 돼지 피부3에서 수확에 사용 되었습니다. 설명 하는 특정 매개 변수는 돼지에 사용 하기 위해 가장 적합 하는 것을 발견 했다…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 육군, 해군, NIH, 공군, 버지니아 및 건강 업무 상 번호 아래 기업 II 노력을 지원 하기 위해 의해 부분적으로 지원 W81XWH-13-2-0054입니다. 미국 육군 의료 연구 수집 활동, 820 챈들러 스트리트, 요새 Detrick, MD 21702-5014 수 여 하 고 관리 수집 사무실입니다. 의견, 해석, 결론, 및 권장 사항 저자의 이며 반드시 국방부에 의해 승인 되지 않습니다.
Materials
Diamond wheel
Dremel
545
Hypodermic needle (19G)
Fisher Scientific
14-840-98
Other needle sizes could be used, depending on experimental needs
Stome wheel
Dremel
540
Syringe (20mL with luer lock)
Fisher Scientific
22-124-967
Suction adapter
Tulip Medical
PA20BD
Optional, for high volume harvesting
Suction canister
Fisher Scientific
19-898-212
Optional, for high volume harvesting. Sterilize before use.
Wong, V. W., Levi, B., Rajadas, J., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. Stem cell niches for skin regeneration.International Journal of Biomaterials. 2012, 926059 (2012).
Tam, J., Farinelli, W., Franco, W., Anderson, R. R. Apparatus for Harvesting Tissue Microcolumns. J. Vis. Exp. (140), e58289, doi:10.3791/58289 (2018).