Potentiation Antineoplastic 약물으로 항 암 항 체 효능: 조합 인덱스 방정식을 사용 하 여 항 체-마약 성분의 검출

요약

이 프로토콜 Chou와 Talalay 조합 인덱스 방정식을 사용 하 여 항 암 항 체와 전 임상 모델에서 antineoplastic 마약 성분 평가 하는 방법을 설명 합니다.

초록

적대적 단일 클론 항 체 (mAb) 화학요법 에이전트에 의해 potentiation 암에 대 한 효과적이 고 안전한 치료 설계를 위한 중요 한 전략을 구성 합니다. 여기 우리는 전 임상 단계에서 합리적인 조합을 식별 하는 프로토콜을 제공 합니다. 첫째, 우리는 Chou와 Talalay¹의 조합 인덱스 방정식을 사용 하 여 항 암 제 mAb 및 세포 독성 약물 사이 성분 평가 셀 기반 분석 결과 설명 합니다. 측정의 종양 세포 약물 및 항 체-감도 MTT 분석 결과, 다음 조합 색인 (CI) 값을 계산 하는 자동화 된 컴퓨터 분석을 사용 하 여 포함 됩니다. CI 값 < 1 성분 테스트 mAbs와 세포 독성 대리인¹사이 나타냅니다. 생체 외에서 연구 결과 vivo에서승산이 더이 종이 식 종양 모델에서 조합 처방 효능을 평가 하는 방법을 설명 합니다. 이 모델에서 결합 된 처방 크게 종양의 성장, 단일 에이전트 컨트롤에 비해 상당한 확장된 생존에 어떤 결과 지연 합니다. 중요 한 것은, vivo에서 실험 보여 조합 식이요법 잘 용납입니다. 이 프로토콜에는 항 암 약물 조합 전 임상 모델에서의 효과적인 평가 임상 시험에서 평가 하는 합리적인 조합 식별 수 있습니다.

서론

많은 암 종류의 치료에 접근 하는 기존의 방식은 monotherapy에 근거 했다. 경우에 그것은 여전히 많은 경우에 사용 하 고,이 방법이 결합된 요법²선택에 지도 하는 몇 가지 장애물을 만났다. 특히, 암 세포 개발 대안 생존 메커니즘³, 치료 실패 환자⁴결과 유도 하 여 단일 약물으로 치료 하면 저항을 더 따르게 됩니다. 또한, monotherapy에 약은 높은 복용량에서 관리 일반적으로. 이 상황을 자주 참을 수 의사 치료²중지를 강제로 수 있는 강한 복용량 의존 부작용의 발생에 발생 합니다. 이러한 이유로 항 암 분자의 협회는 지금 monotherapy 선호.

이상적인 약물 조합 정상 세포에 대 한 증가 독성 없이 종양 세포에 대 한 시너지에 행동 하는 그 것입니다. 성분 치료 효과 별도로 행동 하는 각 개별 약물의 합계 보다 큰 두 개 이상의 약물의 상호 작용을 말합니다. 이러한 상호 작용은 향상 된 임상 치료 효능²발생할 수 있습니다. 그것은 치료 저항을 제한, 효능, 증가 하 고 또한 독성

프로토콜

동물 주택 및 실험 절차 (계약 #C44-278와 #APAFIS 03479.01) 프랑스 정부에 의해 승인 되었다. 동물 보호 및 절차 #2013-118 과학적인 목적을 위해 사용 하는 동물의 보호에 지시문 EU 2010/63/EU 및 프랑스 법에서 실시 했다.

1. mAb 8B6 약물 상호 작용 사이 Topotecan 체 외에서 평가

1. 96-잘 샘플 준비
   주의: 기관의 건강과 안전 위원회를 참조 하 고 실험실 안전에 관련 된 지역 규제 규칙을 따릅니다. 모든 미디어, 셀 라인, 또는 시 약을 사용 하기 전에 재료 안전 데이터 시트 정보를 검토 합니다. 적절 한 무 균 기술을 사용 하 고 층 류 두건에서 작동. 셀을 조작 하는 데 사용 되는 모든 솔루션/장비 살 균 해야 합니다.
   참고: 다음 프로토콜 부착 세포와 함께 사용 하기 위해 설계 되었습니다. 수정 nonadherent 셀에; 성장에 메서드를 적용 하는 데 필요한 이 프로토콜은 각 실험 조건에 대 한 quadruplicate를 사용합니다.
   1. T75 플라스 크에 IMR5 세포 성장.
   2. 첫 날 (0 일), 셀 confluency 확인을 현미경으로 세포 배양을 관찰 합니다. 플라스 크에서....

결과

대표 결과 및 수치는 이전 게시 작업¹⁴허가 적응.

안티 OAcGD2 mAb 8B6 Synergistically 신경 세포 선 성장에 Topotecan의 억제 효과 향상:

하는 약물 및 항 체 농도 성분 topotecan 및 mAb 8B6, 약물 및 항 체 감도 MTT 분석 결과 사용 하 여 신경 세포가 먼저 측정 했다 인간 IMR5의 사이 평가 하는 데 사용할 설정 합니다. MAb 8B6 또는 topotecan 72 h에 대 한 혼자 IMR5 세포 생존 능력 (그림 4A)의 농도 의존 억제 귀착되는. 복용량 응답 곡선_50.......

토론

약물 상호 작용의 효과 예측, 세 가지 방법을 사용할 수 있습니다: isobologram 방법론¹⁷, 비선형 혼합 모형¹⁸그리고 조합 색인¹. 결합 인덱스 분석은 그것의 응용 사용자 컴퓨터 프로그램의 가용성에 의해 간단 하 게 하기 때문에 가장 일반적으로 사용 됩니다. 이 위해 우리는 먼저 MTT 분석 결과¹⁹를 수행 하 여 단독으로 또는 조합으로 사용 하는 각 에이전트의 복용량 효과 응답 특징. 이 방법론을 570 nm¹⁹의 흡수도 최대 색깔 자주색 formazan 제품에서 tetrazolium 소금 줄이기 위해 가능한 세포의 능력에 의존 합니다. 죽음에 셀 formazan로 MTT를 변환 하는 능력을 잃게됩니다. 따라서, 색된 formazan 제품의 수량 문화¹⁹에 실행 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
세포 증식 키트 (MTT)	Roche	11-465-007-001
CompuSyn 소프트웨어	ComboSyn
Electric shaver	Bioseb	BIO-1556
Fetal calf serum	Eurobio	CVFSVFF00-01	10% heat-inactivated fetal calf serum in RPMI 1640
Firefox에서	Mozilla Corporation		Firefox는 http://www.mozilla.org/en-US/firefox/
Heat lamp	. Quartz	4003/1R
인간 신경모세포종 IMR-5 세포주	Accegen Biotechnology	ABC-TC0450	IMR-5는 인간 신경모세포종 세포주 IMR32 5459762의 클론입니다. IMR-5 세포는 Dr. Santos Susin (U.872, Paris, France)
L-glutamine	Gibco	25030-024	2 mM에 의해 RPMI 1640
용해 용액	로슈	11-465-007-001
mAb 8B6	낭트 대학교	N/A
Matrigel	Corning	354248
Multiskan FC	Thermofischer Scientific	N08625
바늘 21G 1 ½	BD Microlance	304432
Needle 25G 1	Terumo	NN-2525R
NSG 마우스	Charles River Laboratories	5557
Nunc MicroWell 96-well microplates	Thermofisher	167008
PBS	VWR	L182-10
PBS, 0,05% EDTA	Sigma-Aldrich	E9884
PC 실행 윈도우 7	마이크로소프트		윈도우 7 http://www.microsoft.com/en-gb/software-download/windows7
페니실린-스트렙토마이신	Gibco	15140-122	100 units/mL 페니실린 및 100 mg/mL 스트렙토마이신에서 구입할 수 있습니다. RPMI 1640
시약 저장기	Thermofischer Scientific	8094
설치류 억제	Bioseb	TV-150-SM
RPMI 1640	Gibco	31870-025
주사기 1mL	Henke Sass Wolf	5010.200V0
Topotecan	Sigma-Aldrich	T2705

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