Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Esam S.B. Salem; Kazutoshi Murakami; Toshimasa Takahashi; Elise Bernhard; Vishnupriya Borra; Mridula Bethi; Takahisa Nakamura

doi:10.3791/58323

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Isolamento dos hepatócitos primários de rato para análise de síntese de proteína nascente pelo método de rotulagem não-radioativo L-azidohomoalanine

JoVE 신문
의학

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Isolation of Primary Mouse Hepatocytes for Nascent Protein Synthesis Analysis by Non-radioactive L-azidohomoalanine Labeling Method

Isolamento dos hepatócitos primários de rato para análise de síntese de proteína nascente pelo método de rotulagem não-radioativo L-azidohomoalanine

DOI:

10.3791/58323-v

•

08:04 min

•

October 23, 2018

•

Esam S.B. Salem*^1,2, Kazutoshi Murakami*², Toshimasa Takahashi, Elise Bernhard, Vishnupriya Borra, Mridula Bethi, Takahisa Nakamura^3,4

¹Department of Pharmacology and Systems Physiology, College of Medicine,University of Cincinnati, ²Division of Endocrinology,Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, ³Division of Developmental Biology,Cincinnati Children’s Hospital Medical Center, ⁴Department of Pediatrics, College of Medicine,University of Cincinnati

Chapters

00:04Title
00:47Liver Perfusion and Extraction
02:45Primary Mouse Hepatocyte Isolation
04:07Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) Analysis
06:06Results: Representative Nascent Protein Expression Analyses
07:31Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo para a isolação dos hepatócitos saudável e funcional principal do rato. Instruções para a detecção de síntese hepática da proteína nascente por substrato de rotulagem não-radioativo foram fornecidas para ajudar a compreender os mecanismos subjacentes a síntese de proteínas no contexto da homeostase do metabolismo energético no fígado.

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