潜在的な軟骨再生のための脂肪組織由来間質血管分数の生産の臨床プロトコル
Summary
ここでは、脂肪組織由来の間質血管分数と変形性関節症の軟骨様組織の再生によって膝機能の改善への応用を生成するプロトコルを提案する.
Abstract
変形性関節症 (OA) は、最も一般的な衰弱性疾患の一つです。最近では、間葉系幹細胞 (MSCs) の別のフォームを使用して、膝の機能を向上する多数の試みがされました。韓国・濃縮骨髄・臍帯血由来幹細胞は、軟骨再生の韓国食品や薬剤の管理 (KFDA) によって承認されています。さらに、脂肪組織由来の間質血管分数 (SVF) は、人間の患者に関節注射の KFDA によって許可されています。自己脂肪組織由来の SVF では、間葉系幹細胞に加え、細胞外マトリックス (ECM) 含まれています。ECM は、ヒアルロン酸 (HA) と多血小板血漿 (PRP) 塩化カルシウムによって活性化されると共に、MSCs は、軟骨を再生し、膝の機能を向上するさまざまなサイトカインを排泄します。この記事では OA の人間の患者の軟骨様組織の再生によって膝の機能を向上するためのプロトコルを提案します。プロトコルの結果は、いくつかの追加の出版物によって 2011 年に初めて報告されました。プロトコルには、コラゲナーゼを混ぜて自家の成人を取得する脂肪吸引が含まれます。この成人コラゲナーゼの混合物はカットし、注入時に針を詰まらせる可能性があります大規模の線維性組織を除去する均質化します。その後、混合物は、脂肪組織由来の SVF を取得する培養です。HA と組み合わせて、患者の膝に脂肪組織由来 MSCs と ECM の残党を含む結果脂肪組織由来 SVF を注入し、塩化カルシウムは、PRP を活性化します。膝の痛み, 腫れ, と硝子軟骨様組織の MRI 証拠とともに可動域が改善された私たちのプロトコルによる治療を受けた患者の 3 例には含まれます。
Introduction
間葉系幹細胞 (Msc) は、軟骨1,2,3,4,5,6を再生成する機能を持っている知られています。さまざまなソースから簡単に取得することができます: 骨髄、臍帯血、および多くの他の中の脂肪組織。これらのソースの中から脂肪組織は臨床設定7,8で軟骨を再生する文化拡張なし MSCs の十分な数を得ることが、唯一の情報源です。自家骨髄間質血管の分数 (SVF) は、同様に簡単に取得できます。ただし、非文化拡大骨髄に含まれる幹細胞の数は非常に低い7,8です。臍帯血は、MSCs の十分な数を含めることができます。しかし、臍帯血は、自家の SVF の容易に利用可能なソースではありません。
臨床応用には、SVF を取得する処理脂肪組織の多数の方法があります。このうち、コラゲナーゼを使用して脂肪組織から MSCs を得る方法を開発し、Zukらによって確認5,6が非常によく受け入れられます。コラゲナーゼを使用してこのメソッドは、整形外科領域における臨床応用のために変更されています。臨床現場に適用するためにシステムは、利便性を保ちながら、無菌性を維持するためにクローズド システムをする必要があります。この記事で示す 1 つの特定の変更には、成人の均質化が含まれます。小さい大きさで分類された成人は脂肪組織の不均一な破壊の結果として大きいものよりも比較的速く消化されます。また、これらのより大きい大きさで分類された成人関節注射9,10を実行しながら注射器や針を詰まらせることができます線維性の組織を生成可能性があります。成人はこれらの問題を防ぐために、切削し、コラゲナーゼの孵化前に成人をミンチが均質にする可能性があります。結果脂肪組織由来 SVF は、均質化11ではない成人と比較してより均一の細胞外のマトリックス (ECM) を含めることができます。SVF に含まれる壊れた ECM は、足場12として動作可能性があります。
2009 年に韓国食品・医薬品管理 (KFDA) 医師13によって最小限の処理と医療施設内で処理されるとき自家脂肪組織由来 SVF を許可されています。その後、自家脂肪組織由来 SVF は、潜在的再生軟骨様組織10,14,15によって変形性関節症 (OA) 患者の膝関節機能を改善するために潜在的なエージェントとして利用されています。,16,17,18.
2011 年、朴は最初に示した, 脂肪組織由来幹細胞 (Asc) 脂肪組織由来 SVF に含まれる血小板を注射されたとき人間の OA 患者の軟骨のような組織を再生可能性がある膝機能を改善できること血漿 (PRP) 14。さらに、朴らは 2013 含む 91 患者における安全性データを報告しています。この安全性データで報告された平均有効率は 6715だったその後、朴らによる追加研究はメニスカス涙と軟骨軟化症蓋10,16,17 患者の軟骨様組織の再生のために可能性がある改善膝機能を示した ,18。報告の記事に基づいて、それはこの記事で示されるプロトコルによって処理される脂肪組織の 100 g に含まれる幹細胞の数が患者の特性8,によって 1,000,000 40,000, 000 から及ぶかもしれない知られています。19,20,21,22,23。
HA と塩化カルシウムとアクティブ PRP 自家脂肪組織由来 SVF を使用して人間の膝 OA の臨床プロトコルを紹介します。201114に、無菌性を維持するために、手動閉鎖系を含む、この臨床プロトコルの最初のバージョンが報告されました。同一のプロトコル、不妊を維持することに最適化された、2013 と 201610,15で報告されました。ここでは、最適化されたプロトコルが表示されます。プロトコルの概略概観は、図 1で示されます。
図 1: プロトコルの図式的な概観します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
Protocol
Representative Results
Discussion
2001 年、Zukら。コラゲナーゼ6コラーゲン マトリックス分解による脂肪組織から幹細胞を分離。その後、グループは示した証明これらの幹細胞が起源の間葉系軟骨と中胚葉起源の他の組織に脂肪組織由来幹細胞を変えるかもしれないことでしょう。
同様に、この資料に示す手順は、人間の患者に同じような方法を適用する変更されたプロトコルで?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、ミプロ診療・ Jaepil/デヴィッド ・ リーによる図設計のスタッフからのサポートを認めています。この作品はバイオ ・ MSIT (番号 NRF 2017M3A9E4078014) によって資金を供給された NRF の医療の技術開発プログラムからの研究補助金によって支えられました。国立研究財団の韓国 (NRF) 科学 (番号 NRF 2017R1A2B4002315 と NRF 2016R1C1B2010308) ICT 省によって資金を供給します。
Materials
| Material | |||
| 5% Betadine (povidone-iodine) | Firson Co., Ltd. | 657400260 | |
| 2% Lidocaine | Daehan Pharmaceutical Co. | 670603480 | |
| Tumescent solution | Myungmoon Pharm. Co. Ltd. | N01BB01 | The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000. |
| Liberase TL and TM research grade | Roche Applied Science | 5401020001 | |
| D5LR | Dahan Pharm. Co., Ltd. | 645101072 | Dextrose 5% in lactated Ringer's solution |
| Anticoagulant citrate dextrose solution | Fenwal, Inc. | NDC:0942-0641 | The solution was composed of 0.8% citric acid, 0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose. |
| 3% (w/v) Calcium chloride | Choongwae Pharmaceutical Co. | 644902101 | |
| 0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) | Dongkwang pharm. Co., Ltd. | 645902030 | |
| 0.25% Ropivacaine | Huons Co., Ltd. | 670600150 | |
| Equipment | |||
| 3.0 mm Cannula | WOOJU Medical Instruments Co. | ML30200 | |
| 60-mL Luer-Lock syringe | BD (Becton Dickinson) | 309653 | |
| Centrifuge Barrel Kit | CPL Co., Ltd. | 30-0827044 | |
| Tissue homogenizer that contains blades | CPL Co., Ltd. | 30-0827045 | |
| Rotating incubator mixer | Medikan Co., Ltd | MS02060092 | |
| Centrifuge | Hanil Scientific Inc. | CE1133 | |
| Magnetic Resonance Imaging | Philips Medical Systems Inc. | 18068 | |
| Ultrasound Imaging System | Samsung Medison co., Ltd | CT-LK-V10-ICM-09.05.2007 |
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