Мы описываем разработке худой модели мыши СПКЯ как с дигидротестостерон гранулы для изучения патофизиологии СПКЯ и потомство от этих плотин СПКЯ как.
Hyperandrogenemia играет решающую роль в репродуктивной и метаболические функции женщин и является отличительной чертой polycystic синдром завязи. Разработка худой СПКЯ как мыши модели, которая имитирует женщин с СПКЯ клинически значимым. В этом протоколе мы описываем такой модели. Вставив длиной 4 мм гранулы порошка DHT (дигидротестостерон) кристалл (Общая длина гранул составляет 8 мм), и заменив его ежемесячно, мы в состоянии производить СПКЯ как модель мыши с сыворотка DHT уровней 2 раза выше, чем мышей, не имплантируются с DHT (без Дигидротестостерон). Мы наблюдали репродуктивного и метаболической дисфункцией без изменения веса тела и состава тела. В то время как выставке высокую степень бесплодия, небольшое подмножество этих самок мышей СПКЯ как можно получить супоросыми и их потомство Показать задержка полового созревания и увеличение тестостерона как взрослые. Эта модель СПКЯ как худой мыши является полезным инструментом для изучения патофизиологии СПКЯ и потомство от этих плотин СПКЯ как.
Гиперандрогении является отличительной чертой синдром поликистозных яичников (СПКЯ) критериев NIH и избыток андрогенов и СПКЯ (AE-СПКЯ) общества. Женщин с СПКЯ иметь затруднение получить супоросы и имеют повышенный риск осложнений беременности1. Даже если они забеременеть, потомства женщины имеют неблагоприятные последствия для здоровья по результатам2,3. Животные модели были разработаны с использованием различных стратегий4,5,6,,78,9,10,11 , 12 и экспонирования множество функций с увеличение веса и ожирения, связанные с повышенной Адипоцит вес и размер расширенного Адипоцит СПКЯ (ановуляция, и или ослабленным терпимости глюкозы и инсулина). Существуют две основные стратегии производить Животные модели, которые используются для изучения СПКЯ. Один является лечение с высоким уровнем андрогенов напрямую (экзогенных андрогенов инъекций/вставки) или косвенно (например, блокируя андрогенных конверсия в эстроген с ингибитором ароматазы) после рождения13. Еще одним примером плода hyperexposure андрогенов во время беременности14,15 для изучения потомства. Например женщина потомство от резус16,17, овец18и грызуны, подвержены мужчины уровни андрогенов в период внутриутробного развивать черты СПКЯ как позже в жизни. Эти модели значительно усилить наше понимание повышенных андрогенных эффектов и плода программирование и матки экологические последствия. Однако, эти модели имеют свои собственные ограничения: 1) животных развития ожирения и поэтому трудно отделить последствия hyperandrogenemia от ожирения индуцированной репродуктивного и метаболической дисфункцией; 2) до беременности женщин с СПКЯ уже демонстрируют высокий уровень андрогенов, таким образом ооциты были подвержены андрогенов избыток до оплодотворения; 3) фармакологических дозы тестостерона (T) или дигидротестостерон (ДГТ) используется после рождения или во время беременности может не отражать андрогенов среды СПКЯ. Тестостерон и DHT уровни были измерены в яичников фолликулярной жидкости и/или сыворотки, и тестостерон и уровни DHT 1,5-3,9 раза выше у женщин с СПКЯ5,19,20,21 ,,2223 по сравнению с затрагивает женщин. Мы создали взрослой мыши модель23,24,25 , разрабатывающая репродуктивного и метаболической дисфункцией в течение двух недель начало хронического воздействия DHT от вставки лепешки с длиной 4 мм кристаллический порошок DHT (Общая длина гранул составляет 8 мм). Эта модель производит DHT сыворотке, которые примерно вдвое выше (именуемая 2xDHT) чем у управления мышей без DHT лечения. 2xDHT мышей не демонстрируют изменения базальной сыворотки эстрадиола, тестостерон, LH и делать не развивать ожирения и показывают аналогичные яичников масса, сывороточные уровни холестерина, свободных жирных кислот, лептин, TNFα и IL-623,24, 25 относительно контролирует даже до 3,5 месяцев после DHT вставки23,24,25. Кроме того путем спаривания самок, которые уже разработали функции СПКЯ, мы можем изучить влияние hyperandrogenic материнской среды на метаболические и репродуктивного здоровья потомства15.
Эта новая парадигма (отношение к НИЗ и AE-СПКЯ общества критерии) моделях производства относительно сходные уровни андрогенов для женщин с СПКЯ 2 – 3 раза выше тестостерона или уровни DHT, по сравнению с неизменным женщин болезнь. Однако эта модель поддерживается постоянное экзогенных DHT и не от запрограммированных эндогенного гиперандрогении после вывода DHT. Общая цель этой статьи заключается в том, сосредоточиться на 1) как сделать DHT гранулы; 2) как создать худой СПКЯ как модель мыши; 3) стратегии по оценке потомства от этих плотин. Другие измерения и оценки фенотипы не рассматриваются в этой рукописи, но можно найти в5,15,23,24,25,26.
Гиперандрогении является ключевой особенностью СПКЯ. Уровни DHT сыворотки (два раза выше в DHT мышей чем без Дигидротестостерон мышей), используемые в настоящем Протоколе ниже, чем те, которые сообщили другие следователи в предыдущих исследованиях и калибруются пропорционально имитиров?…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана национальных институтов здравоохранения (гранты R00-HD068130 по с.в.) и исследовательский центр в Балтимор диабет: пилотов и осуществимость Грант (чтобы с.в.).
Crystalline 5α-DHT powder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | ||
Dow Corning Silastic tubing | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter | |
Medical adhesive silicone | Factor II, InC. | A-100 | ||
Goggles, lab coats, gloves and masks. | ||||
10 µL pipette tips without filter | USA Scientific | 11113700 | ||
Microscope slide for smear | Fisher Scientific | 12-550-003 | ||
Diff Quik for staining cells | Fisher Scientific | NC9979740 | ||
Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | ||
3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | ||
attached needle: 20G | BD | 305176 | ||
Ruler: any length than 10cm with milimeter scale. | ||||
Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100mg/ml | |
Ketamine Hydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100mg/ml | |
Surgical staple | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | ||
Insulin syringe | BD | 329461 | 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe | |
Trochar | Innovative Research of America | MP-182 | ||
Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germany | |
Ear punch | Fisher Scientific | 13-812-201 | ||
Testosterone rat/mouse ELISA kit | IBL | B79174 | ||
DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | ||
One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | |||
One touch ultra test stripes | Life Scan, Inc. | |||
Eppendorf tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | ||
Razor blade | Fisher Scientific | 12-640 | ||
Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | ||
surgical underpad | Fisher Scientific | 50587953 | ![]()
|
|
Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | |||
3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) | 3M Science. Applied to Life | |||
Animal tattoo ink paste | Ketchum manufacturing Inc. | Brockville, Ontario, Canada | ||
Scale | Ohaus Corporation | HH120D | Pine Brook, NJ | |
Electronic digital caliper | NEIKO Tools USA | 01407A | available from Amazon |