여기, 우리 3 성인 zebrafish 부상 모델 및 면역 억제 약물 치료와 결합 된 그들의 사용을 설명합니다. 우리는 거기에 뼈 강화 작용을 감지 및 조직 재생의 이미징에 지침을 제공 합니다.
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이 논문에서
요약
초록
Zebrafish 절단 후 부속 (핀)를 포함 하 여 다양 한 장기를 다시 생성할 수 있습니다. 이 부상 후 약 2 주 이내 regrows 뼈의 재생을 포함 한다. 또한, zebrafish trepanation는 두개골의 후 뼈를 빠르게 치유 하 고 복구 zebrafish 뼈 탄 미 익 광선에 쉽게 도입 될 수 있는 골절 수 있습니다. 이러한 상해 분석 빠르게 뼈 형성에 관리 약물의 효과 테스트 가능한 실험 패러다임을 나타냅니다. 여기, 우리는 이러한 3 부상 모델의 사용과 뼈 억제 하 고 면역 억제 효과 미치는 조직의 glucocorticoid 치료와 함께 그들의 결합된 사용 설명. 우리 성인 zebrafish에 면역 억제 치료에 대 한 준비, 지 느 러 미 절단, calvarial 뼈와 지 느 러 미 골절의 trepanation 수행 하는 방법을 설명 하 고 스테로이드 제제의 사용에 미치는 두 뼈 형성을 설명 하는 방법에 대 한 워크플로우를 제공 osteoblasts 그리고 뼈 조직에 있는 타고 난 면제의 일부로 monocyte/대 식 세포 계보의 세포.
서론
Zebrafish는 척추 개발 및 질병 연구에 강력한 동물 모델을 나타냅니다. 그들은 매우 잘 번 식 하는 작은 동물 및 그들의 게놈은 완전히 시퀀스이 고 조작1의무가 있다는 사실 때문입니다. 다른 장점은 지속적인된 라이브 이미징 vivo에서 화상 진 찰 성인 zebrafish2, 및 높은 처리량 약 스크린 zebrafish 애벌레3에서 수행할 수 있는 능력을 포함 한 여러 단계에서 수행 하는 옵션을 포함 합니다. 또한, zebrafish 장기와 조직, 뼈 등의 다양 한에서 높은 재생 능력을 보유 하 고 따라서 골격 질환을 연구 하 고 수리4,5유용한 시스템 역할.
Glucocorticoid 골다공증 (GIO) 예 천식이 나 류 마티스 관절염과 같은 자가 면역 질환 치료 과정에서 스테로이드 제제와 장기 치료에서 결과 질병 이다. GIO는 glucocorticoid 치료 환자의 약 30%에서 개발 하 고 주요 건강 문제6;를 나타냅니다. 따라서, 그것은 훌....
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프로토콜
여기에 설명 된 모든 방법 Landesdirektion 드레스덴에 의해 승인 (허가 번호: AZ 24 D-9168.11-1/2008-1, AZ 24-9168.11-1/2011-52, AZ 24-9168.11-1/2013-5, AZ 24-9168.11-1/2013-14, AZ DD24.1-5131/354/87).
1입니다. 재료 및 솔루션의 준비
참고: Prednisolone, 다른 스테로이드 제제와 같은 이끌어 낸다 면역 억제. 따라서, 실험 기간 동안 치료 동물에 감염을 방지 하기 위해 예방 조치를가지고 한다. 하이 엔드, 압력솥 유리 도자기 '물 물고기' (즉, 성인 zebrafish 후면에 사용 되는 물) 실험을 시작 하기 전에.
- 실험에 사용 될 zebrafish의 수를 계산 합니다. 개인 컨트롤 역할을 포함 해야 합니다.
- 압력솥 600 mL 유리 커 고압 테이프와 알루미늄 호 일로 덮여 있다. Zebrafish는 개별적으로 처리 됩니다, 그리고 따라서 1 유리 비 커 zebrafish 당 필요 합니다.
- 물고기 물 실험에 필요한 금액을 계산 합니다. 300 mL는 개인과 일 당 필요 합니다. 실험의 길이 고려 (....
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결과
여기에 제시 된 프로토콜 zebrafish 지 느 러 미와 두개골10,,1116의 재생 과정에서 급속 한 골 형성을 유도 하기 위해 반복적으로 사용 되었습니다. 함께 제시 방법의 prednisolone 관리, 뼈 재생 동안 prednisolone의 효과 대 한 연구를 추구 수 있습니다. 예를 들어 뼈 형성과 재생성에서 강화에 대 한 연구를 수행할 수 있습니다. Prednisolone, 다른 스테로이드 제제19,20, 지 느 러 미 재생, 뼈 형성, 알리자린 붉은 꼬리 지 느 러 미 조직 (그림 3A) 고정에 얼룩에 의해 검출 등의 전반적인 억제 리드.......
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토론
Zebrafish는 많은 관계에서 골격 연구에 유용한 입증 했다. 선택 된 돌연변이 모방 골 imperfecta 등 관절염23,,2425,26,27, 인간 질병의 측면 그리고 애벌레 뿐만 아니라 저울에 사용 되 고 있습니다. 작은 분자 스크린7,,2829뼈 근육 강화 화합물을 식별 합니다. Zebrafish 임상 연습에 적용 되는 약물의 치료는 또한 적합 예 뼈 조직에에서 상 상속 역효과 공부 합니다. 이러한 맥락에서 급속 하 게 뼈를 회생의 존재 약물 유도 뼈 결함의 기본 .......
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공개 사항
저자는 공개 없다.
감사의 글
이 연구는 센터의 재생 치료 드레스덴의 ("Zebrafish 모델 glucocorticoid 유발 뼈 손실의 메커니즘을 해명 하기") 교부 금에 의해 그리고 또한 도이치 가운데 (Transregio 67, 프로젝트의 교부 금에 의해 지원 되었다 387653785) FK를. 우리는 그들의 지도 원조 뼈 다 귀 탄 미 익 광선에 calvariae 및 골절의 trepanation 수행에 대 한 1 월 Kaslin를 Avinash Chekuru 매우 감사. 실험 설계, 수행 되었고 KG와 FK에 의해 분석. FK 원고를 썼다. 우리 또한 카트린 램버트, 니콜 Cudak와 기술 지원 및 토론을 위한 Knopf와 브랜드 연구소의 다른 회원 들에 게 감사 하 고 싶습니다. 우리의 감사는 또한 Henriette Knopf와 원고를 교정에 대 한 조 쉬 커리 마리카 피셔와 훌륭한 물고기에 대 한 Jitka Michling을 갑니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 프레드니솔론 | , 시그마-알드리치 | P6004 | |
| 디메틸설폭시드(DMSO) | 시그마-알드리치 | D8418 | |
| 에틸-3-아미노벤조에이트, 메탄설포네이트(MS-222) | 시그마-알드리치 | A5040 | |
| 무딘 집게 | Aesculap | BD027R | |
| , 미세 집게 | Dumont | 91150-20 | |
| 메스 | Braun | 5518059 | |
| Agarose | Biozym | 840004 | |
| 주사 바늘 (0.3 mm x 13 mm) | BD Beckton Dickinson | 30400 | |
| Micro drill | Cell Point Scientific | 67-1000 | ><> |
| Steel burrs (0.5 µ m 직경) | Fine Science tools | 19007-05 | |
| Artemia ssp. | Sanders | 425GR | |
| 파스퇴르 피펫 (플라스틱, 파스텟) | Alpha Labs | LW4111 | |
| 파라포름알데히드 | 시그마-알드리치 158127 | ||
| 알리자린 레드 S 파우더 | 시그마-알드리치 | A5533 | |
| 알시안 블루 8 GX | Sigma-Aldrich | A5268 | |
| Calcein | Sigma-Aldrich | C0875 | |
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T7409 | |
| 실체현미경 | Leica | MZ16 FA | QIMAGING RETIGA-SRV 카메라 |
| 실체현미경 | Olympus | MVX10 | Olympus DP71 또는 DP80 카메라 |
참고문헌
- Westerfield, M. The Zebrafish Book. A Guide for The Laboratory Use of Zebrafish (Danio rerio). 385, (2000).
- Xu, C., Volkery, S., Siekmann, A. F. Intubation-based anesthesia for long-term time-lapse imaging of adult zebrafish. Nature Protocols.
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재인쇄 및 허가
