המנגנונים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן באמצעות מבודד את Perfused המעי הדק עכברוש
Summary
כאן, אנו מציגים מודל פיזיולוגיים ועוצמתי כדי לחקור את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת הבטן, הספיגה במעיים – המעי הדק מבודד עכברוש perfused.
Abstract
הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים המווסתים צריכת התיאבון ומזון, עיכול, ספיגת התזונתי, הפצה, וטיולים גלוקוז מים אחרונים. הבנת המנגנון המולקולרי המסדירים את הפרשת הורמון תחושת הבטן היא היסוד עבור הבנה ותרגום בטן הורמון פיזיולוגיה. באופן מסורתי, המנגנונים הפרשת הורמון בטן גם נלמדים ויוו (של חיות ניסוי או בני אדם) או באמצעות הבטן מפריש הורמון ראשי הרירית תא תרבויות או תא קווים. כאן, אנחנו מציגים של המעי הדק מבודד עכברוש perfused שיטה חלופית ללמוד הפרשת הורמון תחושת הבטן. המעלות של מודל זה זה מסתמך על הבטן ללא פגע, כלומר זה recapitulates רוב הפרמטרים החשובים מבחינה פיזיולוגית אחראי על הפרשת במחקרים ויוו, לרבות קיטוב הרירית, יחסים paracrine, דרכי חשיפה זלוף/גירוי. בנוסף, ולהבדיל מחקרים ויוו, המעי הדק מבודד עכברוש perfused מאפשר שליטה ניסויית כמעט מלאה והערכה ישירה של הפרשה. בניגוד מחקרים במבחנה, זה אפשרי ללמוד את סדר הגודל והן את הדינמיקה של הפרשת וכדי שאלות חשובות כתובות, כגון איזה גירויים לגרום הפרשת הורמונים שונים בבטן, באיזה צד של המעיים (luminal או כלי דם) הוא הפרשת גירוי, ולנתח את פירוט סנסורים המולקולרי שבבסיס התגובה הפרשה. בנוסף, ההכנה הוא מודל חזק לחקר הספיגה במעיים ופרטים לגבי הדינמיקה של הספיגה במעיים כולל אחראי למעליות.
Introduction
הבטן הוא האיבר הגדול ביותר האנדוקרינית של הגוף, לייצר יותר מ-15 שונים פפטיד ההורמונים לווסת את ספיגת התזונתי ואת תכונותיהם מזין, צמיחה מעיים, לווסת התיאבון1. הבטן הורמונים, לכן, מעורבים תהליכים פיזיולוגיים בסיסיים רבים, והוא להבנת הדפוסים הללו של הפרשת ופרטי מולקולרית הקובעות את הפרשת ההורמונים המתאימים לכן חשוב עבור טירונות פיזיולוגיים הבנה, למיעון היבטים translational מפעולות הורמון תחושת הבטן; אבל איך אחד יכול ללמוד את חישה. המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת הורמון תחושת בטן? באופן כללי, הפרשת הורמון יכול להילמד אורגניזמים שלמים (בני אדם או חיות ניסוי), ההכנות בטן מבודד או מתרבויות התא הראשי בטן מפריש הורמון או מונצחים תא תרבויות2,3, 4 , 5 , 6. שלנו המודל המועדף הוא המעי הדק מבודד עכברוש perfused, אשר הוא מודל רלוונטי מבחינה פיזיולוגית המאפשר הפרשת הורמונים בטן שילמדו בפירוט עם הזמן האופטימלי רזולוציה (הפרשת המחירים יכול להיקבע עם עת הבסיס עד השנייה), והתוצאות הן הסבירות להעברה המצב ויוו7. כאן, אנו מספקים פרוטוקול מפורט על איך לבצע הליך זה, אך תחילה נדון בשיטות אחרות ללמוד הפרשת הורמון תחושת הבטן, כולל על יתרונותיה וחסרונותיה של מודלים אלה בהשוואה המעי הדק מבודד עכברוש perfused.
אם אדם רוצה להקים אם מתחם מסוים המווסת את הפרשת הורמונים מסוימים במעיים, מחקרים בבני אדם הם המטרה הסופית. לפיכך, אם תרכובת מציג נהדר אפקטים על הפרשת הורמונים בטן אחד או כמה מכרסמים (in vivo או perfusions) או מ הורמון הפרשת תאי (שורות תאים או תאים ראשי), אפקט זה רלוונטית רק לרפואה ופיזיולוגיה האנושית אם זה יכול להיות אישרו אצל בני אדם. עם זאת, ישנם גבולות ברורים עבור הסוג של מחקרים שניתן לבצע אצל בני אדם ולאחר מחקרים ויוו על חיות ניסוי לעיתים, לכן, האפשרות השנייה הכי טובה עבור מחקרים כאלה. עכברים וחולדות הם החיות ניסיוני שנמצאות בשימוש תכוף ביותר ככל הנראה בשל גודלם נוח, בעלות נמוכה ואת האפשרות גנטית לשנות את הגנים בחשד למעורבות של שאלות מחקר ספציפי (למשל, לדפוק נהג מסוים או קולטן). באופן כללי, מודלים ויוו ליהנות מלהיות שלם מבחינה פיזיולוגית, אך יש גם מספר מגבלות. והכי חשוב, גודל קטן של מכרסמים, עכברים במיוחד, הוא גורם מגביל, כמו רוב מבחני על הבטן הורמון כימות דורשים לפחות 20 µL פלזמה (ועוד לעיתים קרובות הרבה יותר), כלומר לפחות 100 µL הדם חייב להיות מופנמים כדי לשכפל כימות. לכן, זה רק ניתן לקבל מעט מאוד המתאים בסיסית דוגמאות ודוגמאות דגימות גירוי פוסט אחד או שניים (נפח הדם הכולל עכבר של 20 גרם הוא ~1.4 מ”ל). כתוצאה מכך, תגובות הפרשה פוטנציאליים (לדוגמה, במהירות או מאוחר המתרחשים התגובות) ולכן עשויים לפספס.
במודל זלוף, להתגבר על בעיה זו, כמו מדגם גדולים מתקבלים כרכים (קצב הזרימה: 7.5 mL/min), ניתן להתאים את המרווחים אוסף לפי הצורך כדי להבטיח כי התגובות מהיר ולא לטווח קצר ולא החמיצה (אנחנו אוספים דגימות כל מין)7 . בעיה נוספת עם vivo מחקרים בחולדות כי רוב ההורמונים בטן הם אפילו יותר מסולק במהירות או מטבוליזם מאשר בני8,9,10, אשר עלול לסבך את הניתוח הביוכימי עוקבות. למשל, הראינו כי GLP-1 עובר מטבוליזם בעכברים בקצב אפילו מהר יותר מאשר אצל בני אדם (כאשר T1/2 הוא 1-2 דקות11) ו, וחשוב, המערבת המחשוף של GLP-1 בעכברים, בנוסף N-מסוף ביקוע על ידי dipeptidyl-peptidase-4 (DPP4) (שהוא האנזים העיקרי של משפילים GLP-1 אצל בני אדם), לקדם ביקוע על ידי אנזים endopeptidase נייטרלית 24.1112. כתוצאה מכך, מבחני המסחרי הנוכחי עבור כימות של GLP-1, אשר גם מבוססים על איזופורם ללא פגע GLP-1 (7-36amide) או את isoform DPP-4 ביקע (9-39amide), במידה רבה אל תזלזל GLP-1 הפרשת בעכברים וגוררים מטעה תוצאות 12. במעי הדק מבודד עכברוש perfused, רוב החומרים של הורמונים מופרשים לסלק או מופחת במידה ניכרת, שכן השפלה בתיווך פלזמה הוא נמנע, חילוץ הכבד/כליות/ריאות/השפלה מנועה (כי perfusate נאסף כשהוא עוזב את הבטן).
כמובן, תובנה חשובה יכול להיווצר על ידי שימוש בבעלי חיים מהונדסים, למשל, נתרן-גלוקוז טרנספורטר-1 נוקאאוט עכברים13, אבל דורש הערכה מפורטת של חיישנים מולקולריים מעורב הפרשת לעיתים קרובות השיקול של מספר אתרי מולקולרית, החל מן מובילי מולקולרית יון ערוצי ומן שונים G-חלבון בשילוב קולטנים חלבונים תאיים. למשל, שסימנו את הפעילות של תשעה אתרים מולקולריים שונים כאשר להתיר את החיישנים המולקולרי האחראי על גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-17. חקירת דומה לא יהיה אפשרי ויוו כי כמה של תרכובות בשימוש לא ספציפי או תופעות מזיקות/קטלני. לדוגמה, בעת שימוש הבטן perfused, שזה אפשרי להעריך את התפקיד של מטבוליזם הגלוקוז התוך תאית על ההפרשה של GLP-1 ו- neurotensin על-ידי חסימת היווצרות ATP עם 2-4-dinitrophenol7,14 , כמו גם את התפקיד של ערוצי סידן ממותגת מתח לחומצת מרה מגורה GLP-1, NT ו PYY הפרשת3. אכן, טטרודוטוקסין חוסם הערוץ נתרן רעיל מאוד ניתן להחיל בהצלחה בלימודים זלוף. בסופו של דבר, במודל זלוף זה יכול להיות ישירות מוערך איפה בבטן תרכובת מסוימת מעוררת הפרשת הורמון מסוים, החוקר יכול פשוט לבחור ולהכין את האזור הרצוי כדי perfuse, באותו זמן זה יכול ייחקרו גירוי הפרשת גורם על-ידי הפעלה של חיישנים מולקולריים מהצד luminal או כלי הדם של המעי3,ה-15,16.
מנגנוני הפרשה הפרשת הורמון בטן כבסיס עשויים גם להילמד על ידי שימוש חתיכות רקמה בטן (כולל רקמה אנושית), ראשי מעיים (בדרך כלל של תרבויות עכברים), מונצחים הורמון הפרשת שורות תאים (של העכבר או ממקור אנושי), על ידי הבטן רקמות רכוב בתאי Ussing או על-ידי organoids (הן לרוב של עכברים)2,3,4,5,6,17,18. בהשוואה perfusions מעיים, מחקרים על הבטן האנושית חתיכות, תרביות תאים ראשי שורות תאים טכנית קל יותר לבצע הם דרך זולה יותר ומהירה של יצירת נתונים, אך כמובן המחקר של הבטן חתיכות דורש גישה טריים בטן האדם דגימות. אולם, במודלים אלה קיטוב תאים נורמליים של המעיים הוא מטבעו אבודה, כלומר כי מודלים אלה לא ניתן להשתמש כדי להעריך את ההפעלה הרגילה של חיישנים מולקולריים, תהליכי הקליטה גם לא ניתן לחקור. יתר על כן, מחקרים כאלה בדרך כלל מעסיקים incubations סטטי (עבור עד כמה ש) אשר מאוד שאינם-פיזיולוגיים, יש מה לעשות עם דינמיקה הפרשה נורמלית התאים, כי המוצר מופרשים לא מוסר ולא ובכך עשויים להשפיע משוב הפרשת הורמונים. לעומת זאת, במעי perfused, מולקולות המופרש והוא נספג ביעילות יוסרו על ידי microcirculation הרירית כפי שהם ויוו, המבטיח כי מעברי הצבע transmucosal נשמרים כך הקליטה והפרשת יכול להתרחש בקצב נורמלי. יתר על כן, יש dedifferentiated תרביות תאים של מוצאם תא enteroendocrine מקורי, כלומר כי הם כבר לא נציג של תאים מקורית מבחינת התוכן פפטיד וביטוי של חיישנים מולקולריים, למרות שיהיו עדיין להפריש את ההורמון המדובר. זהו, למשל, במקרה של GLP-1 מפרישים תאי שורות19.
לכן זה, לדעתנו כי התא הראשי תרבויות או תא קו מחקרים מתאימים ביותר לסינון למטרות, לביצוע ניסויים סוגים שלא ניתן שבוצעו ויוו או בבטן perfused מבודדים. למשל, כוח אמיתי של תרביות תאים הראשי, תרביות תאים קו הוא את התוך תאית משני שליחים (למשל Ca2 +, מחנה, NAD(P)H) ניתן לנטר בזמן אמת, וניתן איתות חשמלי של ההורמון מפריש תאים חקר20,21,22. בנוסף, נוקאאוט siRNA יכול להיעשות, אשר הוא שימושי במיוחד אם מעכבי מסוימים אינם זמינים20,21,22,23,24. הבטן רקמת עכברים רכוב בתאי Ussing שימש לאחרונה ללמוד את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשת GLP-1 מגורה חומצות מרה, בעוד organoids מעיים (מתוך עכברים) ואת הבטן האנושית חתיכות היו בשימוש גם ללמוד פרטים מולקולרית של הבטן הורמון הפרשת17,25. ואילו היתרונות לשעבר להיות מקוטב2 כל של מודלים אלה כרוכים incubations סטטי. מחקרים על חתיכות הבטן האנושית, לעומת זאת, להפיק תועלת משימוש רקמה אנושית, ולא מכרסמים, אשר חשוב מאז מינים ההבדל בביטוי רקמות של קולטני 7TM והוא מובילי מולקולרית עלול לגרום במשעולים חישה שונים מולקולרי בין מינים. למעשה, רוב הנתונים בשדה זה נוצר על ידי מחקרים על חזירים, עכברים או חולדות, והוא נותר חמקמק אם ממצאים אלה יועברו בני אדם. היא, לעומת זאת, מרגיע חישה המנגנונים המולקולריים העומדים בבסיס גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 מופיעים דומה בין עכבר, עכבר, אדם, ו transcriptomic, peptidomic יצירת פרופילים של עכבר ו- L-תאים אנושיים חשף חזק גלובלית קווי דמיון בין26,2718,7,שני מינים.
המעי הדק מבודד עכברוש perfused, עם זאת, יש גם כמה מגבלות הנחשבות. והכי חשוב, זה בלתי אפשרי לקבוע אם תגובה הפרשה נתון נובעת הפעלה ישירה על ידי החומר מבחן של תאים מייצרי ההורמונים יישוב או ליתר דיוק נגרמת על ידי מנגנון עקיף. למשל, אשלגן כלורי באופן מיידי מגביר הפרשת GLP-1 המעי perfused7, אבל זה נשאר לא ידוע אם זו תוצאה של דפולריזציה ישירה של L-התא, או נובעת דפולריזציה של נוירונים קרוב L-התאים או השפעות במקביל פרסמה תכשירים/מעכבי paracrine. הנתונים הנובעים מחקרים באמצעות המעי perfused שמטרתם להבהיר את המנגנונים המולקולריים שבבסיס הפרשה צריכה, לכן, תמיד להכניס ההקשר עם נתונים המתקבלים דגמים אחרים ספציפיים יותר כדי להגדיל את היכולת ליצור סיבתיות. למשל, גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 GLP-1 שורת התאים מפרישים28,GLUTag29 ומן העכבר הראשי L-תאים תלויים הפעילות של למעליות גלוקוז (SGLT1 ו- GLUT2). חסימת אלה מובילים במעי הדק עכברוש perfused נחלש גם הפרשת20, כלומר, הוא סביר כי גלוקוז-המרצת הפרשת GLP-1 במידה רבה מתווך על ידי פעולות ישירות של גלוקוז על L-התא. הגבלה חשובה נוספת של המעי perfused מבודדים היא חלק של ליפידים הם שקשה ללמוד בשל hydrophobicity שלהם. למרות שניתן לחקור המוצרים הסופיים של עיכול השומנים (חומצות שומן, diacyl glycerols, lysophosphatidylglycerols, וכו ‘), ולמרות ההכנה ייתכן שניתן יהיה מחדש esterify ליפידים, intra-cellularly, ואולי לארוז אותם לתוך chylomicrons, הובלת chylomicrons התאים ואת ספיגת עוקבות שלהם על ידי lacteals של villi משובשת, שכן אין אפשרות לאבטח את זרימת הלימפה בבטן מבודד. סביר להניח, לכן, ספיגת השומנים נעצרו לאחר המוצרים נספג להתחיל לצבור בתאים. המערכות תא במבחנה מתאימים פחות ללימודי השומנים בשל היעדרם של קיטוב. ברור, מגבלה זו רלוונטי רק עבור שומנים כי הם נספג מועבר דרך lacteals, ואילו אלה נספג דרך כלי הדם במעיים נוטים להיות מטופלים בדרך כלל.
Protocol
Representative Results
Discussion
המעי הדק מבודד עכברוש perfused הוא כלי מחקר רב עוצמה המאפשר את הדינמיקה ואת המנגנונים המולקולריים שבבסיס בטן הפרשת הורמון שילמדו בפירוט. השלב הקריטי ביותר לייצור מוצלחת של נתונים עם מודל זה הוא הפעולה הכירורגית. טיפול של המעיים באופן בלתי נמנע יגרום נזק אל המעי, לכן ולמורה כדי אבסולוטי מינימל…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי גרנט מוגבל ל פרופסור Jens Juul הולסט מהמרכז נובו נורדיסק למחקר בסיסי מטבולית (נובו נורדיסק קרן, דנמרק), מענק נפרד מן הקרן נובו נורדיסק עושה מחקרים זלוף מכרסמים (מענק. לא. NNF15OC0016574), מענק הולסט פרופסור מן המועצה האירופית למחקר (גרנט no.695069) ו theEuropean האיחוד הוא תכנית המסגרת השביעית למחקר, TechnologicalDevelopment של פעילויות הדגמה (מענק מס 266408), כמו גם של פוסט דוקטורט להעניק לרון אי Kuhre של הקרן לונדבק (R264-2017-3492). אנו מודים ג’נה אי האנט, קרולין פ דיקון להגהת זהיר.
Materials
| Chemicals for perfusion buffer | |||
| Bovine serum albumin (BSA) | Merck | 1.12018.0500 | |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2 x 2 H2O) | Merck | 102382 | |
| Dextran 70 | Pharmacosmos | 40014 | |
| Fumaric acid disodium salt (C4H2Na2O4) | Sigma Aldrich | F9642 | |
| Glucose (C6H12O6) | Merck | 108342 | |
| Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4) | Merck | 105886 | |
| Potasium chloride (KCl) | Merck | 104936 | |
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | Merck | 104873 | |
| Pyruvic acid sodium salt (C3H3NaO4) | Merck | 106619 | |
| Sodium bicarbonate (NaHCO3) | Merck | ||
| Sodium chloride (NaCl) | Merck | 106404 | |
| Sodium L-glutamate monohydrate (C5H8NNaO4 x H2O) | Merck | 106445 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Perfusion equitment | |||
| Universial perfusion system | Harvard Bioscience, Inc. | 732316 | |
| BASIC UNIT UNIPER UP-100, TYPE 834 | Harvard Bioscience, Inc. | ||
| Roller Pump, with four channels | Harvard Bioscience, Inc. | 730100 | |
| Windkessel | Harvard Bioscience, Inc. | 732068 | |
| Thermostatic Circulator,Bath Volume 3L, 230V/50Hz | Harvard Bioscience, Inc. | 730125 | |
| Operating table, heated on tripod stand, type 873 | Harvard Bioscience, Inc. | 733776 | |
| Cannula with basked, OD= 2.0mm, ID= 1.0mm | Harvard Bioscience, Inc. | 733313 |
References
- Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. The "normal" endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences. Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).
- Brighton, C. A., et al. Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors. Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).
- Kuhre, R. E., et al. Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas. Molecular Metabolism. , (2018).
- Roberge, J. N., Brubacker, P. L. Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients. Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).
- Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line. Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).
- Jacobsen, S., et al. Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects. Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).
- Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine. Diabetes. 64, 370 (2014).
- Svendsen, B., Holst, J. J. Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines. Peptides. 77, 47-53 (2016).
- Ratner, C., et al. Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery. Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).
- Wewer Albrechtsen, N. J., et al. Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes. American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).
- Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects. The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).
- Windelov, J. A., et al. Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?. Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).
- Gorboulev, V., et al. Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion. Diabetes. 61, 187-196 (2012).
- Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx. American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).
- Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat. Physiological Reports. 5, (2017).
- Svendsen, B., et al. An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine. Endocrinology. 156, 847-857 (2015).
- Goldspink, D. A., et al. Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells. Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).
- Sun, E. W., et al. Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine. Diabetes. , (2017).
- Kuhre, R. E., et al. Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells. Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11 (2016).
- Reimann, F., et al. Glucose sensing in L cells: a primary cell study. Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).
- Reimann, F., et al. Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line. The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).
- Kuhre, R. E., et al. Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans. American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).
- Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation. Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).
- Parker, H. E., et al. Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion. British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).
- Petersen, N., et al. Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids. Diabetes. 63, 410-420 (2014).
- Parker, H., et al. Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion. Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).
- Roberts, G. P., et al. Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling. Diabetes. , (2019).
- Reimann, F., Gribble, F. M. Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells. Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).
- Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line. Molecular Endocrinology. 8, 1646-1655 (1994).
- Svendsen, B., et al. GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness. The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).
- Bak, M. J., et al. Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies. Diabetes, Obesity & Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).
- Jacobsen, S. H., et al. Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals. Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).
