생체 외에서 교양된 폐 포 상피 세포에서 할로겐화 가스의 농도 제어 하는 방법

요약

우리 소설을 테스트 하 고 상피 폐 상해에 관련 된 메커니즘에 대 한 우리의 이해를 향상 sevoflurane 또는 isoflurane에서 생체 외에서 의 농도 정확 하 고 제어를 도달 하도록 특별히 설계 된 쉬운 프로토콜 설명 급성 호흡 곤란 증후군에 대 한 요법입니다.

초록

급성 호흡 곤란 증후군 (아즈)은 장애인된 치경 유체 허가와 심한 염증 확산 치경 상해의 증후군. 환자 실 (ICU) 환자의 진정 sevoflurane 등 isoflurane, 할로겐화 대리인의 사용은 가스 교환을 향상, 치경 부 종 감소 고 아즈 동안 염증 감소 수 있습니다. 그러나, 폐 손상을 방지 하거나 치료 중 환자 실에서 지속적인 진정에 대 한 흡입 제의 사용에 대 한 데이터 부족입니다. "생리" 조건 하에서 폐 포 상피 세포에 할로겐화 대리인의 효과 연구, 우리는 공기 액체 인터페이스에 문화 세포에 쉽게 시스템을 설명 하 고 정확한 제어 "공기" 분수를 제공 하는 할로겐화 요원에 게 노출 하 고 이러한 에이전트의 "매체" 농도 우리는 인간의 폐 포 상피 불멸 하 게 셀 접시 sevoflurane 또는 isoflurane 마 취 기계 회로 의해 제공 지속적인 가스 교류를 사용 하 여 정확한, 제어 부분에 노출 될 수 밀봉된 밀폐 챔버 개발. 세포는 24 시간 동안 sevoflurane의 4%와 isoflurane의 1%에 노출 되었다. 가스 질량 분석은 매체에 녹아 할로겐화 대리인의 농도 결정 하기 위해 수행 되었다. 후 첫 번째 시간, sevoflurane 및 매체에서 isoflurane 농도 했다 251 mg/L 및 25 mg/L, 각각. Sevoflurane와 isoflurane의 농도 나타내는 곡선 고원 노출 후 1 시간에 도달와 함께 시간이 지남에, 유사한 과정을 보여 중간에 녹아.

이 프로토콜은 sevoflurane 또는 isoflurane에서 생체 외에서 아즈 중 상피 폐 상해에 관련 된 메커니즘에 대 한 우리의 이해를 개선 하 고 테스트에 대 한 새로운 치료의 농도 정확 하 고 제어를 도달 하도록 특별히 설계 된는 증후군입니다.

서론

급성 호흡 곤란 증후군 (아즈) 확산 치경 부상, 폐 부 종, 그리고 hypoxemic 호흡기 장애를 특징으로하는 임상 증후군 이다. 아즈 환자 실 (ICU) 입원의 10% 이상 및 기계 환기를 필요로 하는 중 환자 실 환자의 약 25%를 나타냅니다, 하지만 그것은 여전히 35-45¹의 병원 사망률과 임상에 대 한 인식 아래 도전. 강렬한 연구에도 불구 하 고 날짜는 효과적인 아즈 약리학 적인 치료 또는 예방의 식별 하지 못했습니다. 아즈에 있는 사망에 기여 하는 두 가지 주요 기능: 장애인 치경 유체 클리어런스 (AFC) (즉, 말 초 폐 일에서 치경 부 종 액체의 바꾸 인된 재흡수) 및 심한 염증². 이후 아즈 사망률 높은 유지, 현재 사업 또한 기본 예방;를 포함 해야 한다 그러나, 핵심 과제 아즈 개발 것입니다 누구에 아즈 했다 방해 하는 경우 도움이 될 것 이라고 누가 위험 환자를 식별 하는.

Sevoflurane 등 isoflurane, 휘발성 할로겐화 마 취약 수술 실에서 전신 마 취를 제공 하기 위해 널리 사용 됩니다. 세계 전반, 주요 수술 시 매년 230 백만 이상 환자 전신 마 취와 기계 환기

프로토콜

1. 폐 포 상피 세포 (hAELVi)의 문화

1. 녹고
   1. 15 mL 플라스틱 튜브에 재배 준비-사용 인간의 폐 포 상피 (huAEC) 매체의 4 mL를 플라스틱 하 고 신속 하 게 따뜻한 물 목욕 (37 ° C)에 유리병을 녹여.
   2. 5 분 동안 200 x g에서 튜브 centrifuging 전에 매체의 4 mL를 포함 하는 15 mL 플라스틱 튜브에 해 동된 세포 현 탁 액을 전송.
   3. 상쾌한 발음 하 고 재배 매체의 5 mL와 함께 셀 펠 릿 resuspend. 다음, T25 플라스 크에 세포를 전송.
   4. (5% CO₂, 95% 습도 공기, 37 ° C) 표준 조건 하에서 세포를 배양
2. 분
   1. 현미경으로 세포의 상태를 확인 합니다. 셀 80-90% 합칠 때, 단계 1.2.2 1.2.10 통해 셀 분할.
   2. 살 균 피 펫 셀의 재배 미디어 발음
   3. 셀 4 mL의 Dulbecco의 인산 염 버퍼 염 분 (DPBS)을 한 번 세척 하 고는 DPBS 발음.
   4. 세포 분리; 시작 될 때까지 3 분 동안 37 ° C에서 배양 하는 이전 세포를 트립 신/EDTA 솔루션 (테) 1 mL를 추가 현미경 분리를 확인....

결과

Sevoflurane 시간이 지남에 매체에 녹아, isoflurane의 농도 각각 표 1 과 표 2에 보고 됩니다.

매체에서 sevoflurane 및 isoflurane 농도의 과정 동안 유사 했다. 할로겐화 대리인의 필요한 농도 설정 된 후에 즉시 농도 1 시간 동안 상승 했다. 고원 다음에 도달 했다는 할로겐화 에이전트의 중지 될 때까지 유지. 관리 중단 후 농도 감소 한 시간 (그림 3).

후 첫 번째 시간, sevoflurane 및 매체에서 isoflurane의 메디아 농도 했다 251 mg/L 및 25 mg/L, 각각. 큰 차이 다른 .......

토론

우리의 프로토콜 sevoflurane isoflurane 등 할로겐화 마 취 에이전트의 정확한 분수를 셀을 노출 하는 쉬운 방법을 설명 합니다. 또한, 우리가 여기에 보고-처음으로-가스 분수와 sevoflurane와 문화 매체 자체 내부 isoflurane의 농도 사이의 엄격한 상관 관계. 지금이 근본적인 단계 안전 하 게 우리의 밀폐 챔버를 사용 하 여 인간의 폐 포 상피 세포의 경작된 단층에 이러한 할로겐화 대리인의 효과 연구 하도록 해줍니다.

현재, 대부분 연구 팀 sevoflurane 치경 세포에서의 효과 공부 처음 할로겐화 가스 포화 상태 이며 다음 봉인 항아리를 사용 합니다. 이 경우 sevoflurane 물질 대사로 변화 될 수 있습니다, 그리고는 휘발성 에이전트의 일부 저하 될 수 있습니다 선형 시간이 지남에, 불안정 한 가스 농도 선도 추측 수 있습니다. 그러나, sevoflurane의 가스 분수와 문화 매체에 있는 그것의 농도 사이의 상관 관계는 문학에서 명확 .......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
Sevoflurane	Baxter		임신 중 sevoflurane 또는 isoflurane을 사용하여 실험을 수행하는 것은 강력히 권장하지 않음
Isoflurane	Virbac		임신 중 sevoflurane 또는 isoflurane을 사용하여 실험을 수행하는 것은 강력히 권장하지 않음
인간 폐포 상피 세포	InScreenex	INS-CI-1015
huAEC 매체( 바로 사용할 수 있음)	InScreenex	INS-ME-1013-500ml
마취기 회로	Dräger	Fabius
가스 분석기	Drageer	Vamos Plus
마취 가스 필터	SedanaMedical	FlurAbsord
가열 휴미기	Fisher& Paykel	MR850
Chamber	Curver	00012-416-00
기체 크로마토그래피와 질량 검출	Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA	Trace 1310 with TSQ 8000evo
Fused-silica column (30 m x 1.4 μ m, 0.25mm ID)	Restek, Lisses, France	Rxi-624Sil MS