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Um protocolo personalizáveis para String Assembly gRNA clonagem (STAgR)
JoVE 신문
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JoVE 신문 유전학
A Customizable Protocol for String Assembly gRNA Cloning (STAgR)

Um protocolo personalizáveis para String Assembly gRNA clonagem (STAgR)

DOI:
10.3791/58556-v

•

10:00 min

•

December 26, 2018

•

, , , , ,
1MCN Junior Research Group, Munich Center for Neurosciences,Ludwig Maximilian Universitat, BioMedical Center, 2Institute of Stem Cell Research, Helmholtz Zentrum,German Research Center for Environmental Health, 3Institute of Developmental Genetics, Helmholtz Zentrum,German Research Center for Environmental Health, 4Physiological Genomics,Ludwig Maximilian Universitat, BioMedical Center

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:34Design of STAgR Cloning Primers with Overhangs
  • 01:22Generation of STAgR Cloning Fragments
  • 03:56Gibson Assembly Reaction and Bacterial Transformation
  • 05:50Selecting STAgR Clones by Bacterial Colony PCR
  • 08:08Results: Analysis of String Assembly gRNA Cloning
  • 09:27Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos a sequência montagem gRNA clonagem (STAgR), um método facilmente multiplexar gRNA vetores para CRISPR/Cas9 aproxima-se. STAgR faz a multiplexação de gRNA simples, eficiente e personalizável.

Tags

CRISPR-Cas9GRNA CloningSTAgRMultiplex GRNAGibson AssemblyDNA TemplatePCRMagnetic BeadsDNA Purification

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