Échographie de haute fréquence pour l’analyse du développement foetale et placentaire In Vivo
Summary
Nous décrivons ici la technique des ultrasons de haute fréquence pour l’analyse in vivo du foetus chez les souris. Cette méthode permet le suivi des fœtus et l’analyse des paramètres placentaires ainsi que le débit sanguin maternel et fœtal pendant toute la grossesse.
Abstract
L’échographie est une méthode largement utilisée pour détecter des anomalies de l’orgue et des tumeurs dans les tissus humains et animaux. La méthode est non invasif, indolore et inoffensif, et l’application est facile, rapide et peut être faite n’importe où, même avec les appareils mobiles. Pendant la grossesse, l’échographie sert habituellement à suivre de près le développement du foetus. La technique est importante pour évaluer la restriction de croissance intra-utérine (RCIU), une complication de la grossesse à court et à long terme des conséquences santé pour la mère et le fœtus. Comprendre le processus de RCIU est indispensable pour élaborer des stratégies thérapeutiques efficaces.
Le système à ultrasons utilisé dans ce manuscrit est un appareil d’échographie produit pour l’analyse des petits animaux et peut être utilisé dans divers domaines de recherche, y compris la recherche de la grossesse. Nous décrivons ici l’utilisation du système pour l’analyse in vivo des fœtus de natural killer (NK) cellule/mastocytes (MC)-les mères déficientes qui donnent naissance à des petits restreint la croissance. Le protocole comprend la préparation du système, manipulation des souris avant et Pendant les mesures et l’utilisation du B-mode, couleur mode doppler et mode doppler-l’onde du pouls. Taille foetus, taille placentaire et approvisionnement en sang au foetus ont été analysés. Nous avons trouvé réduit l’implantation tailles et petits placentas souris NK/MC-déficientes du milieu de la gestation à partir. En outre, MC/NK-insuffisance a été associée à l’absence et inversé le flux diastolique bout dans foetus Arteria umbilicalis(UmA) et un index de résistance élevée. Les méthodes décrites dans le protocole facilement utilisable pour les thèmes de recherche liés et non liés.
Introduction
Les ultrasons sont des ondes sonores avec des fréquences au-dessus de la gamme audible de l’oreille humaine, supérieure à 20 kHz,1. Animaux comme les chauves-souris, au pays de Galles, dauphins2,3,4de la souris, rats5et lémuriens souris6 tous utiliser d’ultrasons pour l’orientation et de la communication. Homme Profitez des ultrasons pour plusieurs applications techniques et médicales. Un appareil d’échographie est capable de créer l’onde sonore et distribuer et représenter le signal. Si l’échographie rencontre un obstacle, le son est réfléchie, absorbée ou peut passer par là. L’application des ultrasons comme une méthode d’imagerie, appelée échographie, est utilisée pour l’analyse des tissus organiques chez l’homme ou de la médecine vétérinaire comme le cœur (échocardiographie)7,8,9de poumon, thyroïde10 , reins11et12,de tractus urinaire et reproductif13; détection des calculs biliaires14 et tumeurs15; et l’évaluation de la perfusion des organes ou des vaisseaux sanguins16,17. L’échographie est une méthode standard dans les soins prénatals pendant la grossesse, et déficience foetale ou déficiences peuvent être reconnus dès le début. Plus précisément, la croissance d’un foetus est étroitement surveillée à intervalles réguliers pour reconnaître un RCIU possible. Enfin, la circulation sanguine foetale peut être surveillée, car cela peut souligner la croissance restrictions18,19,20,21.
Un avantage majeur de l’échographie par rapport aux autres méthodes comme la radiographie est l’innocuité de son des tissus à analyser. Cette méthode simple et rapide est non invasif, indolore et peut être utilisé plusieurs fois. La dépense initiale d’un appareil d’échographie est cher ; Cependant, les matières consommables nécessaires sont bon marchés. Le système à ultrasons utilisé dans ce manuscrit est adapté à un éventail de modèles animaux (c.-à-d., souris et poissons) tandis que pour les humains, un appareil d’échographie exige une fréquence de 3 à 15 mHz, une fréquence de 15 à 70 mHz est requise pour les souris.
Le présent manuscrit décrit un protocole pour l’utilisation de B-mode, mode doppler couleur et mode doppler-l’onde du pouls. La description comprend la préparation de la souris ainsi que performance, acquisition de données et stockage. Cette méthode a été souches de souris avec succès appliqué à différents jours de gestation à tous et peut être utilisée pour étudier le développement foetal et placentaire ainsi que les paramètres sanguins maternels et foetaux. Ici, toutes les applications sont expliquées basé sur nos études employant des souris enceintes MC/NK-déficientes et contrôle.
Protocol
Representative Results
Discussion
En utilisant notre système d’échographie, nous avons démontré de gd10 restriction de croissance foetale chez les mères MC/NK-déficient sur. En outre, à gd10 et 12, nous avons observé des dimensions réduites placentaires et à gd14 l’absence ou l’inversion du flux diastolique de bout dans l’UmAs de certains fœtus de souris uMC/uNK-déficientes. Ce signe de la mauvaise vascularisation était associé à un index de résistance significative des artères indiquant RCIU. Les résultats confirment le rôle i…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Un grand Merci à la société de l’Instrument d’imagerie (surtout à Magdalena Steiner, Katrin Suppelt et Sandra Meyer) pour leur soutien agréable et rapide et pour répondre à toutes nos questions concernant le système d’imagerie et son usage rapidement et complètement. Nous sommes reconnaissants à Prof. Hans-Reimer Rodewald et Dr Thorsten Feyerabend (DKFZ Heidelberg, Allemagne) pour la fourniture de la colonie de Cpa3. En outre, nous remercions Stefanie Langwisch, qui dirigeait le service des colonies de souris et qui produit les images dans la Figure 1.
Le travail et le système d’imagerie ont été financés par des subventions de la Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) à A.C.Z. (ZE526/6-1 et AZ526/6-2) qui ont des projets intégrés dans le DFG priorité programme 1394 « mastocytes in health and disease. »
Materials
| LEAF anti-Maus CD122 (IL-2Rb) | BioLegend | 123204 | Klon TM-β1; 500 µg |
| Vevo 2100 System | FujiFilm VisualSonics Inc. | Transducer MS550D-0421 | |
| Vevo LAB Software | FujiFilm VisualSonics Inc. | ||
| Isoflurane | Baxter | PZN: 6497131 | |
| Electrode gel | Parker | 12_8 | |
| Surgical tape | 3M Transpore | 1527-1 | |
| Eye cream | Bayer | PZN: 1578675 | |
| Cotton tipped applicators | Raucotupf | 11969 | 100 pieces |
| Depilatory cream | Reckitt Benckiser | 2077626 | |
| Compresses | Nobamed Paul Danz AG | 856110 | 10 x 10 cm |
| Ultrasound gel | Gello GmbH | 246000 |
References
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