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방법 논문

대뇌 피 질의 로컬 필드 전위 및 응답 Nociceptive 레이저 자극으로 자유롭게 이동 하는 쥐에서 Electrocorticograms의 동시 녹음

8.3K 조회수

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DOI:

10.3791/58686

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2019년 1월 7일

 ,  ,  ,  , 

이 논문에서

요약

우리는 동시에 응답 nociceptive 레이저 자극으로 자유롭게 이동 하는 쥐에서 electrocorticography와 로컬 필드 전위를 기록 하는 기술을 개발 했다. 이 기술은 nociceptive 정보를 뇌에서 처리 조사를 용이 하 게 electrocortical 신호는 생체 및 거시적인 수준에서의 직접적인 관계를 설정 하는 데 도움이 됩니다.

초록

Electrocortical 응답, nociceptive 무료 신경 엔딩을 선택적으로 활성화 하는 레이저 열 펄스에 의해 elicited nociceptive 정보 대뇌 피 질의 처리를 조사 하는 많은 인간과 동물 연구에서 널리 사용 됩니다. 여러 과도 응답 시간 고정 레이저 자극의 발병에는 이러한 레이저 갖는 뇌 전위 (LEPs)에 의하여 이루어져 있다. 그러나, LEP 응답의 기능 특성 아직도 크게 알려지지 않은, 동시에 피 (즉, electrocorticogram [ECoG]과 두 피 표면에 신경 활동을 기록할 수 있는 샘플링 기법 부족 [두 피 뇌 파] 뇌 파)와 (즉, 로컬 필드 가능성 [LFP]) 뇌 내부. 이 문제를 해결 하려면 선물이 여기 자유롭게 움직이는 쥐를 사용 하 여 동물 프로토콜. 이 프로토콜은 세 가지 주요 절차의 구성: (1) 동물 준비 및 수술 절차, (2) 동시 녹음 ECoG 및 LFP nociceptive 레이저 자극, 그리고 (3) 데이터 분석 및 기능 추출에 대 한 응답에서. 특히, 3D 인쇄 보호 쉘의 도움으로, 쥐의 두개골에서 이식 ECoG와 LFP 전극 함께 안전 하 게 개최 했다. 데이터 수집 하는 동안 레이저 펄스는 때 동물 자발적인 고 요함에 챔버 바닥에 있는 간격을 통해 쥐의 forepaws에 전달 되었다. 지속적인 백색 잡음 청각 시스템의 정품 인증 피하기 위해 레이저에서 생성 된 초음파에 의해 연주 되었다. 결과적으로, nociceptive 응답만 선택적으로 기록 되었다. 우리 LEPs 높은 신호 대 잡음 비율을 보여주는 결과 얻은 (예를 들어, 대역 통과 필터링, epoch 추출, 및 기준선 보정) 두뇌 자극 관련 응답을 추출 하 표준 분석 절차를 사용 하 여, ECoG 및 LFP 전극에서 동시에 기록 했다. 이 방법론 ECoG LFP 활동의 동시 녹음을 가능 하 게, 생체 및 거시적인 수준에서 electrocortical 신호에 따라서 nociceptive 정보 처리의 조사를 촉진의 다리를 제공 하 두뇌.

서론

뇌 파 진동 뇌 활동은 뇌에 뉴런의 수천의 동기화 된 활동에 의해 생성 된 전기 잠재력을 기록 하는 기술입니다. 그것은 많은 기초 연구와 임상 응용1,2에 널리 사용 된다. 예를 들어, 뇌 파 응답 강렬한 레이저 펄스 (즉, LEPs) 열 nociceptive 감각 입력된3,,45의 주변 및 중앙 처리 조사에 널리 채택 된다. 인간에서는, LEPs 주로 이루어져 세 가지 심한: somatotopically 조직과 가능성이6기본 somatosensory 피 (S1) 활동을 반영 하는 초기 구성 요소 (N1) 그리고 늦은 구성 요소 (n 2와 P2) 중앙 분산 하 고 보조 somatosensory 피 질, insula, 및 이전 대상 피 질7,8의 활동을 반영 하기 위해 가능성이. 이전 연구9,

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프로토콜

(400-450 g 무게) 성인 남성 Sprague-Dawley 쥐 실험에서 사용 되었다. 모든 수술 및 실험 절차 관리 및 건강의 국가 학회의 실험실 동물의 사용에 대 한 가이드를 따라. 절차는 심리학, 중국 과학원의 연구소에서 연구 윤리 위원회에 의해 승인 되었다.

1. 전극 이식

  1. 수술 전에 1 L/min의 공기 흐름 속도와 5 %isoflurane 챔버에 쥐 anesthetize
  2. Stereotaxic 기구를 사용 하 여 마 취 마스크에 그것의 코를 가진 쥐의 머리를 수정 합니다. Isoflurane 통해 수술 중 마 취 깊이 유지 하기 위해 0.5 L/분의 공기 흐름 속도 2%의 농도에서 마 취 마스크 관리 하는 Note 외과 공차 쥐 발가락 곤란에 응답 하지 못할 때 이루어집니다.
  3. 각 막 건조를 피하기 위해 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.
  4. 표준 면도기를 사용 하 여 쥐 두 피 위쪽 면도.
  5. 요오드를 제거 하려면 의료 iodophor 살 균 솔루션 및 75% 알코올을 사용 하 여 두 피 소독.
  6. Lidocaine (2%) 지역 진통에 대 한 두 피에 주사. 아트로핀 (0.2 mL i.p.) 호흡기 hypersecret....

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결과

대표적인 실험에서 5 쥐에서 electrophysiological 데이터 기록 되었다. 레이저 자극과 20 번 각 쥐의 오른쪽 forepaw 전달 되었고 > 40 s interstimulus 간격. 응답 ECoG 나사 깊이 와이어와 깊이 와이어를 사용 하 여 기록 된 레이저 갖는 뇌 양자 기본 somatosensory 외피가 (S1) 및 기본 모터 외피가 (M1)에 이식 되었다.

그림 1에 요약 된 대로 두 개의 ECoGs (블랙에서 표시)와 깊이 와이어 전극 (색상, 각 4 개 지역 5 전선 표시) (표현 Bregma, 참조 하는 다음 위치에서 stereotaxic 좌표에 따라 배치 했다 mm; 양수 X 및 Y 축 값 표시 오른쪽 및 앞쪽 위치, 각각): 왼쪽된 ECoG에서 X =-1.5와 Y = 1.7.......

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토론

현재 연구에서 우리는 ECoGs 및 대뇌 피 질의 LFP 응답 nociceptive 레이저 자극에서 쥐를 자유롭게 이동 하 여 elicited 동시에 기록 하는 기법을 설명. 결과 LEP 응답 ECoG 및 LFP 신호에 레이저 자극의 발병 후 명확 하 게 검출 될 수는 나타났다. ECoG 및 대뇌 피 질의 LFP 신호 동시 녹음에는 더 나은 이해 LEP 구성 요소에 신경 활동의 기여에 대 한 그들의 관계를 조사 하는 과학자 수 있게 된다.

5 중요 한 단계는 제안 된 기술에 주목 해야 한다. 첫째, 있는지 확인 하는 두개골의 표면 청결 하 고 건조 치과 아크릴을 사용 하 여 그것에, 보호 쉘 기본을 고정 하기 전에 중요 하다. 이 단계는 보호 쉘 기반 안정적으로 고정 되어 있습니다. 둘째, ECoG 나사의 직경 보다 약간 큰 그는 구멍의 초기 나사 운전 확대 합니다 스크류 스레드를 구멍 때문. 현재 연구에서 텅스텐 와이어 구멍와 ECoG 나사 구멍 사이의 거리는 매우 작은 (

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공개 사항

저자는 선언할 수 없다.

감사의 글

이 작품은 CA 키 실험실의 정신 건강, 심리학의 연구소, 중국 (31671141 및 31822025)의 국가 자연과학 기초에 의해 지원 되었다, 13회 (XXH13506), 과학의 중국 아카데미의 정보화 5 개 년 계획 그리고 심리학의 연구소, 중국 과학 아카데미 (Y6CX021008)의 과학 재단 프로젝트.

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재료

이 논문에 사용된 재료 목록
이름회사카탈로그 번호댓글
수컷 Sprague-Drawley 쥐Vital River
IsofluraneRWD 생명 과학
소동물 이소 플루란 마취 시스템RWD 생명 과학쥐 용 마취 방독면을 포함
입체 요법 장치RWD 생명 과학
ECoG 및 LFP 전극이 결합 된 장치이 장치는 ECoG 및 깊이 와이어 전극을 커넥터 모듈
3D 인쇄 보호 쉘쉘의 질감은 폴리락틱이며 쉘은 집에서 만든 것으로 베이스, 벽 및 캡의 세 부분으로 구성됩니다. 벽은 패러데이 케이지로 구성하기 위해 구리 테이퍼로 덮여
텅스텐 와이어 (직경 : 50mm)California Fine Wires Company피질 LFP 기록용 전극
  스테인레스 스틸 나사
(직경 : 0.6 mm)
ECoG 기록 용 전극
전기 두개골 드릴RWD Life Science
  드릴 비트 (직경: 0.5 mm)RWD 생명 과학드릴은 ECoG 나사의 구멍을 드릴링하는 데 사용됩니다
  드릴 비트 (직경: 0.2 mm)RWD 생명 과학드릴은 깊이 와이어의 구멍을 드릴링하는 데 사용됩니다 
치과 아릴 파우더SNC 치과
아릴 액체SNC 치과
파라핀Fisher Scientific이 혼합물은 마이크로 와이어 어레이의 다음 움직임을 보장하기 위해 개두술을 밀봉하는 데 사용됩니다.
미네랄 오일피셔 사이언티픽
전기 응고기 Bovie medical Corporation
RHD2132 앰프 보드 Intan Technologies32채널 헤드스테이지
RHD2000 시스템 IntanTechnologies데이터 수집 시스템
적외선 네오디뮴 이트륨 알루미늄 페로브스카이트(Nd:YAP) 레이저 발생기전자 공학
Matlab R2016bThe MathWorks 
에 조립하는 집에서 만든 것입니다 있습니다

참고문헌

  1. Klimesch, W., Doppelmayr, M., Schwaiger, J., Winkler, T., Gruber, W. Theta oscillations and the ERP old/new effect: independent phenomena? Clinical Neurophysiology. 111 (5), 781-793 (2000).
  2. Peng, W., et al. Brain oscillations reflecting pain-related behavi....

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재인쇄 및 허가

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