단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 펩 티 드 배합 금 나노 입자를 사용 하 여

요약

정 맥 합성 펩 티 드, 단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제, 국 소 빈 혈 reperfusion 유발 급성 폐 상해 감소를 제공 하는 골드 나노 펩 티 드 하이브리드를 사용 이전 했습니다. 여기 우리가 약물 배합의 상세한 프로토콜을 보여줍니다. 다른 세포내 펩 티 드 유사 하 게 공식화 될 수 있습니다.

초록

단백질 키 니 아 제 C 델타 억제제 (PKCδi)은 국 소 빈 혈 reperfusion 유도 장기 부상을 방지 하기 위해 유망 약 이다. 그것은 일반적으로 세포 관통 펩 티 드, 문신, 세포내 전달에 활용 됩니다. 그러나, 문신 일반적인 생물 학적 활동을 보이고 있다. 금 나노 입자 (GNPs) 인식된 독성 없이 약물 전달 매개체로 사용할 수 있습니다. 따라서, PKCδi를 제공 하는 한나라당/펩 티 드 하이브리드를 사용 했습니다. 두 개의 짧은 펩 티 드 (P2: CAAAAE 및 p 4: CAAAAW), 95:5 비율로 한나라당의 표면 특성을 수정 하는 데 했다. GNPs PKCδi (한나라당/PKCi)와 함께 활용 된 증류수, 안정는 0.9 %NaCl, 그리고 인산 염 버퍼 식 염 수 (PBS) 소 혈 청 알 부 민 또는 소 태아 혈 청에 포함 된. 한나라당-PKCi의 정 맥 주입 이전 폐의 국 소 빈 혈 reperfusion 상해를 방지 하기 위해 표시 했다. 이 문서는 한나라당/PKCi 공식화 한나라당/PKCi의 physiochemical 속성을 평가 하는 프로토콜을 설명 합니다. 한나라당과 다른 펩 티 드 기반 약물을 공식화 하 유사한 방법을 사용 했습니다. 이 문서 잘하면이 소설 세포내 약물 전달 기술을 vivo에서 응용 프로그램에 더 많은 관심을 그릴 것입니다.

서론

폐 이식 말기 폐 질환¹환자를 저장합니다. 그러나, 폐 이식 후 심각한 합병증 걸림돌이 남아 있다. 폐 이식 다음 초기 단계에서 기본 이식 부전 가장 유해한 합병증¹이며 그 주요 원인이 국 소 빈 혈 reperfusion (IR)-유도 된 급성 폐 손상².

차가운 보존에서 기증자 폐 물질 대사는 매우 낮은 수준으로 제한 됩니다. 그러나, 반응 산소 종 및 산화 질소 합성 혈액 흐름³의 중단으로 인해 활성화 됩니다. 이식 후 혈액 순환을 복원 하 고 반응성 산소 종 및 냉 허 혈 중에 생성 된 산화 질소 염증과 세포 죽음, 조직 상해의 결과 강화 한다.

부상을 방지 하기 위해 IR, 단백질 키 니 아 제 Cδ 억제제 (PKCδi)은 마음, 두뇌 및 폐^4,,56,7,

프로토콜

1입니다. 펩타이드 솔루션의 준비

1. 검색은 펩 티 드 (P2: CAAAAE, P4: CAAAAW, PKCδi: CSFNSYELGSL)-20 ° C 냉장고를 상 온 (RT) 해 동.
   참고: 병은 펩 티 드에 비응축에서 습기를 방지 하기 위해 폐쇄 유지.
2. 한 눈금에 각 펩 티 드의 0.01 g 무게. 별도 50 mL 원뿔 관으로 각 펩 티 드를 넣어.
3. P2 튜브에 이온된 (DI) 수의 18.74 mL를 추가 합니다.
4. P4 튜브를 디 물 16.93 mL를 추가 합니다.
5. PKCδi 튜브를 디 물에 희석 50% 이기의 8.21 mL를 추가 합니다.
6. 소용돌이 짧게 펩 티 드 솔루션. 5 분 동안 sonicator (40 MHz)에서 50 mL 원뿔 튜브를 넣어.
7. Biosafety 캐비닛을 펩 티 드 솔루션을가지고. 준비 하는 모든 펩 티 드 솔루션 1 m m 이어야 한다입니다.
8. 새로운 50 mL 원뿔 튜브에 각 펩 티 드 솔루션의 1 mL를 전송. P2, P4의 튜브에 디 물 19 mL을 추가 하 고 각 솔루션은 50 µ M을 희석 하 고 자체 튜브에 저장 되도록 PKCδi 튜브를 50% 이기의 19 개 mL를 추가.

결과

주의 해야 한나라당/PKCi 하이브리드의 생물 속성을 평가 하기 위해 한나라당 경향으로 용 매에서 집계. 한나라당 집계 되는 경우 솔루션의 색상 분홍색에서 자주색 (그림 1a) 변경 합니다. 대 일 분 광 광도 계 더 민감하게 변화를 감지할 수 있다. 한나라당/PKCi 집계 되지 경우 흡수 피크 525에 있어야 한다 nm (그림 1b). 한나라당은 집계 흡수 피크 오른쪽으로 이동 됩니다. 분석, 집계 ΔOptical 밀도 형성 하는 경우의 대체 방법으로 (ΔOD 525에서 OD = nm-440에서 OD nm) 감소.

토론

적절 한 배합을 보장 하기 위해, 그것은 중요 δPKCi 솔루션 1.6에서 설명 쥡니다 단계를 겪 습입니다. ΔPKCi 펩 티 드 순서는 sonicator 50% 이기 솔루션에서 PKCi를 녹이는 데 도움이 그래서 소수 moieties를 포함 되어 있습니다. 또한, 그것은 매우 꼼꼼하게, 2.7 단계에 설명 된 용 매를 혼합 하는 것이 중요입니다.  다음이 단계는 제대로 하지, 때문에 δPKCi 펩 티 드²³의 집계 경우이 한나라당/PKCi 하이브리드는 하지 잘 공식화 됩니다.
 
한나라당 기반 약물 배합에는 여러 가지 이점을 제공합니다. 첫째, GNPs 종합 될 수 쉽게 몇 나노미터에서 ~ 100에 이르기까지 잘 제어 크기에 nm. 일반적으로, 더 작은 크기의 GNPs 제공할 수 있습니다 약물 세포로 큰 것 작은 것 들 수 쉽게 그들의 대상 지역²⁴로 확산으로 보다 더 효율적으로.  둘째, GNPs는 그들에 게 안전한 약물 수송을.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
음전하를 띤 글루탐산 펩타이드 (P2)	CanPeptide		서열 : CAAAAE-NH2 길이 : 6aa 개질 : C- 말단 아미드 < > 수량 : 50mg 순도 : >95 %
소수성 트립토판 펩티드 (P4)	CanPeptide		서열 : CAAAAW-NH2 길이 : 6aa 수정 : C 말단 아미드 < > 수량 : 50mg 순도 : >95%
&델타; PKCi 펩타이드	CanPeptide		Seqeuence: CSFNSYELGSL-NH2 길이: 11aa 개질: C-terminal amidation 수량: 50mg 순도: >95%
원뿔형 튜브(50ml)	코닝 생명 과학	3582070
원뿔형 튜브(15ml)	코닝 생명 과학	3582096
아세토니트릴	시그마-알드리치	271004-100ML
초음파 발생기	브랜슨 초음파 공사	Branson 2510MTH
마이크로튜브	Diamed.ca	AD 150-N
금 나노 입자 용액	Ted Pella	15705-5	입자 크기는 20nm
록킹 플랫폼 쉐이커	VWR international	40000-304
Microcentrifuge	Eppendorf	5417R
Acryl cuvette	SARSREDT	67.758
UV-Vis 분광 광도계	Agilent	Caty 60 UV-Vis