Virülans ve Aeromonas enfeksiyon Caenorhabditis elegans modelindeki patogenezinde değerlendirilmesi
Summary
Burada, C. elegansenfeksiyonunda Aeromonas çalışmaya üç farklı deneyler tanıtmak. Bu uygun yöntemler kullanarak, arasında ve Aeromonas türleri içinde toksisitesi değerlendirmek kolaydır.
Abstract
İnsan patojen Aeromonas klinik olarak gastroenterit, yara enfeksiyonları, septisemi ve idrar yolu enfeksiyonu neden olduğu gösterilmiştir. En insan hastalıkları bakteri dört türleri ile ilişkili olduğu bildirilmiştir: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniive Aeromonas caviae. Model organizma Caenorhabditis elegans mükemmel enfeksiyon modeli hangi Aeromonasbakteriyel patogenezi okumaya sağlar bacterivore olduğunu. Burada, hayatta kalma, sıvı toksisite ve kas nekrozu deneyleri gibi bir C. elegans modeli kullanarak Aeromonas enfeksiyon çalışmaya üç farklı deneyler tanıtmak. Aeromonas virülans belirleyen üç yöntem sonuçları tutarlı edildi. A. dhakensis klinik enfeksiyonlar neden 4 büyük Aeromonas türler arasında en zehirli olduğu gösterilmiştir. Bu yöntemler arasında ve Aeromonas türleri içinde toksisitesi değerlendirmek ve Aeromonas enfeksiyon patogenezi bilgimizi katkıda bulunmak için uygun bir yol olarak gösterilmektedir.
Introduction
İnsan patojen Aeromonas, klinik olarak gastroenterit, yara enfeksiyonları, septisemi ve idrar yolu enfeksiyonları1,2neden olduğu gösterilmiştir. En ilişkili insan hastalıkları dört bakteriyel türler ile ilişkili olduğu bildirilmiştir: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veroniive Aeromonas caviae 2,3 , 4 , 5. Aeromonas bulaşıcı hastalıklar arasında yumuşak doku enfeksiyonları ciddi morbidite ve mortalite insanlarda neden olabilir. Not, kas nekrozu yumuşak doku enfeksiyonu6en ağır şeklidir. Gözlem hayatta kalma ve Caenorhabditis elegans kas nekrozu enfeksiyon sonra Aeromonastoksisite spekülasyon kullanılacak uygun bir yöntemdir.
Bilim adamları zaten bakteriyel enfeksiyonlar çalışmaya çok sayıda model organizmalar geliştirdik. Önceki çalışmalarda, fareler, zebrafishes ve Nematodlar patogenez ve virülans Aeromonas6,7,8çalışmaya hayvan modelleri olarak kullanılmıştır. Her hayvan modeli vardır onun ‘ avantajları ve uygulamaları. Model organizma, Caenorhabditis elegans, bacterivorous Yuvarlak solucanlar hangi alımı bakteri foodnaturally değil. C. elegansevrimi boyunca bakteriyel enfeksiyona karşı karmaşık bir doğuştan gelen bağışıklık sistemi geliştirmiştir. Bakteriyel enfeksiyon stres altında C. elegans Aeromonas6,7,9 ve diğer patojenleri bakteriyel patogenezi okumaya bir mükemmel enfeksiyon model olmak kanıtlanmıştır mantar10 ve enterohaemorrhagic Escherichia coli O157: H711gibi. Ancak, hala C. elegans Aeromonasvirülans eğitimi için bir model olarak kullanarak metodoloji üzerinde duruluyor hiçbir yayın yoktur.
Burada, Aeromonas enfeksiyon C. elegans hayvan bir model olarak kullanarak eğitim için üç farklı deneyler tanıtmak: hayatta kalma, sıvı toksisite ve kas nekrozu deneyleri. Bu yöntemler arasında ve Aeromonas türleri içinde toksisitesi değerlendirmek ve Aeromonaspatogenezinde anlayış geliştirmek için uygun bir yoldur.
Protocol
Representative Results
Discussion
C. elegans olduğunu bacterivorous Yuvarlak solucanlar bu doğal gıda alımı bakteri ve bakteri için karmaşık bir doğuştan gelen bağışıklık onun evrim sürecinde geliştirmiştir. İki önemli organları korumak ve bağışıklığı destekleyici epidermis ve bağırsak9,13vardır. Epidermis ve C. elegans kas bantları memeliler ve insanlar6‘ yumuşak doku yapıları benzer. Bu özellikleri nedeniyle, C. e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Tayvan ve tanılama Mikrobiyoloji için C. elegans çekirdek tesisinden yardım için minnettarız ve antimikrobiyal direnç laboratuvar, Ulusal Cheng Kung Üniversitesi Aeromonas sağlamak için hastane izole ediyor. Ayrıca Caenorhabditis genetik Merkezi (CGC) ve WormBase kabul edersiniz. Biz de Savana Moore el yazması düzenleme için teşekkür ederiz.
Bu çalışmada kısmen Bilim Bakanlığı ve Tayvan teknoloji (en 105-2628-B-006-017-MY3) ve Ulusal Cheng Kung Üniversitesi Hastanesi (NCKUH-10705001) dan gelen hibe için P.L. Chen tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Shaker incubator | YIH DER | LM-570R | Bacteria incubation |
| K2HPO4 | J.T.Baker | MP021519455 | Culture medium preparation |
| KH2PO4 | J.T.Baker | 3246-05 | Culture medium preparation |
| Na2HPO4 | J.T.Baker | MP021914405 | Culture medium preparation |
| NaCl | SIGMA | 31434 | Culture medium preparation |
| MgSO4 | SIGMA | M7506 | Culture medium preparation |
| agar | Difco | 214530 | Culture medium preparation |
| CaCl2 | SIGMA | C1016 | Culture medium preparation |
| cholesterol | SIGMA | C8503 | Culture medium preparation |
| ethanol | SIGMA | 32205 | Culture medium preparation |
| KOH | SIGMA | P5958 | Culture medium preparation |
| 6 cm petri plate | ALPHA PLUS | 46 | agar plate preparation |
| 96-well plate | FALCON | 353072 | liquid assay |
| bacterial peptone | Affymetrix/USB | AAJ20048P2 | Culture medium preparation |
| yeast extract | SIGMA | 92144 | Culture medium preparation |
| citric acid•H2O | SIGMA | C1909 | Culture medium preparation |
| tri-potassium citrate•H2O | SIGMA | 104956 | Culture medium preparation |
| FudR | SIGMA | 1271008 | Culture medium preparation |
| disodium EDTA | SIGMA | E1644 | Culture medium preparation |
| FeSO4•7 H2O | SIGMA | 215422 | Culture medium preparation |
| MnCl2•4 H2O | SIGMA | 221279 | Culture medium preparation |
| ZnSO4•7 H2O | SIGMA | 204986 | Culture medium preparation |
| CuSO4•5 H2O | SIGMA | C8027 | Culture medium preparation |
| tryptone | SIGMA | 16922 | Culture medium preparation |
| Microscope system | Nikon | Eclipase Ti inverted | microscope imaging |
| Scientific CCD Camera | QImaging | Retiga-2000R Fast 1394 | microscope imaging |
References
- Parker, J. L., Shaw, J. G. Aeromonas spp. clinical microbiology and disease. Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. Biliary tract infections caused by Aeromonas species. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).
- Chuang, H. C., et al. Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia. Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).
- Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).
- Chen, P. L., et al. A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).
- Chen, P. L., et al. Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences. PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).
- Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila. Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).
- Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans. Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).
- Powell, J. R., Ausubel, F. M. Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens. Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).
- Chou, T. C., et al. Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans. Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).
- Stiernagle, T. Maintenance of C. elegans. WormBook. , 1-11 (2006).
- Engelmann, I., Pujol, N. Innate immunity in C. elegans. Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).
- Feinbaum, R. L., et al. Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model. PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).
