여기, 우리는 히드로 기반 세포 치료, 섬 이식의 예에 의해 그림의 vivo에서 유효성 검사에 대 한 프로토콜을 제시. h Omental 매트릭스 섬 작성 (귀환) 이식 혈관, 적절 한 변화 환경에서 engraftment를 극대화 하기 위해 가까이 omental 레이어 사이 셀 하이드로 겔 혼합물의 주입 수 있습니다.
세포 치료에 따라 재생 의학 질병 치료에 대 한 새로운 희망을 나타냅니다. 현재 장애물 적절 한 생체 내에서 유효성 검사는 치료의 효율성을 포함 한다. 받는 사람 몸에 전송, 셀 종종 생체 재료, 특히 hydrogels와 결합 될 필요가 있다. 그러나, 이러한 이식의 효능의 유효성 검사는 오른쪽, 오른쪽 히드로 환경과 바로 받는 사이트 필요합니다. omentum 같은 사이트 수 있습니다. 우리 섬 이식 및 생존 향상 omental 레이어 사이 조직 안에 이식의 주입으로 구성 된 귀환 (Omental h 행렬 섬 작성) 기술, 개발 섬 이식의 예에 따라. 이 위해 독도 atraumatic 바늘을 사용 하 여 그것의 주입을 가능 하 게 한 점도와 히드로에 포함 해야 합니다. 주사기는 히드로 독도의 조합으로 로드 됩니다. 여러 가지 주사는 다른 진입점에서 omental 조직 내부 수행 그리고 섬/히드로 혼합물의 증 착 라인을 따라 이루어집니다. 우리는 dextran 비즈를 사용 하 여이 혁신적인 접근의 타당성을 테스트. 구슬 잘 omental 조직, 혈관에 가까운 근접에서에 걸쳐 확산 되었다. 이식의 효능을 테스트 하려면 우리 독도 당뇨병 쥐에 이식 하 고 대사 후속 2 개월 동안 수행. 이식된 독도 주위와 독도, 안으로 다시 vascularization의 높은 비율을 전시 하 고 당뇨병을 반전. 유도 기술을 다른 유형의 세포 높은 신진 대사 활동에 대 한 하이드로 겔 또는 세포 치료에 대 한 적용할 수 있습니다.
세포 치료 뜨거운 주제는 재생 의학에 따라 질병을 치료 하는 것을 목표로 합니다. 생물 재료를 이용한 세포 치료 최근 몇 년 동안, 특히 세포 이식 자주 받는 사람에 게 문화 접시에서 셀의 전송을 위한 운반대를 요구 하기 때문에 점점 공부 되었습니다 했다. 소재 건설 기계는 잠재적으로 귀중 한 셀 사업자 충족 여러 가지 역할1. 유능한 캐리어는 기계적인 긴장에서 세포를 보호 하 고 필수 성장 요인, 대사 폐기물 배설, 영양 물질과 산소2의 교환 호의 베푸는 성장 조건을 제공 해야 합니다.
세포 치료에 사용 되는 생체 재료의 종류 들 사이 hydrogels 많은 이점이 있다. 그들은 생체, 생 분해성, 쉽게 처리 하 고 용이 하 게 산소 보급3입니다. 또한, 현재 기술 세포 생존과 성장 인자 또는 세포 외 매트릭스 단백질4예, 보완과 engraft 수 있도록 hydrogels의 사용을 수 있습니다.
하이드로 겔 사업자 포함 하는 줄기 세포 치료로 주입 수 있습니다 예를 들면, 뼈 재생5 및 신 경계 질환6. Metabolically 활성 세포의 주입이 필요 합니다. 접근의 생체 외에서 확인이 가능, 도구와 기술을 vivo에서 유효성 검사에 대 한 세련 된 것을 남아 있다.
셀 및 히드로 이식 쉽게 수행할 수 있습니다 밖으로 피하 주입에 의해 생체 적합성 테스트를 실시 하는 경우. 그러나, 이식할된 세포는 그들의 신진 대사 활동에 의해 조직 요인 통제 의미,이 피하 지역화 최적의 정 맥 배수7점에서 본질적으로 않습니다. 따라서, 신속, 안전 하 게, 그리고 효율적으로 평가 하이드로 겔의 유익한 효과를 현재 도구가 있다. 호르몬 응답 혈액 포도 당 수준으로 이식에서 혈 류로 출시 될 필요, 섬 이식의 예에 따라 우리 vivo에서 세포/히드로 이식 위한 새로운 방법을 개발.
첫 번째 단계 셀 하이드로 겔을 받아들일 수 있는 수락자 이식 사이트를 식별 하는 것 이었다. 위한 큰 공간을 제공 하는 omentum 주입, 높은 플라스틱 이며 그것의 조밀한 vascularization 복 설정을 함께 공부 하는 데 높은 신진 대사 활동8셀에 대 한 흥미로운. 우리는 다음 수술 기법에는 omentum 전지와 히드로의 전송 허용 설정 필요 합니다. Lipofilling 성형 수술9에서 사용에 의해 영감, 우리 개발 (귀환) 접근을 채우는 h Omental 매트릭스 섬. 하이드로 겔에 포함 된 독도 omental 조직 안에 주입 됩니다. 기술은 또한 omental 조직, 혈관의 많은 수는 또한 이식 산소 향상으로 셀과 히드로 혼합물의 여러 증언을 활용 하 여 최대 engraftment를 제공 목적.
현재 연구에서 우리는 섬 이식 혈관에 가장 가까운 지방 조직 내부 omental 시트 사이 대 한 간단 하 고 혁신적인 기술을 설명합니다. 이 마이크로-수술, 복 강경 수술에서 완료 될 수 있는 지방 조직으로는 하이드로 겔에 포함 된 독도의 주입으로 이루어져 있다. 이 기술은에서 테스트 하는 데 필요한 모든 히드로 및 셀 조합에 쉽게 적용 가능 하다는 metabolically 기능 환경에서.
이 프로토콜에 몇 가지 중요 한 단계를 강조 수 있습니다. 첫째, 그것은 깨지기 쉬운 사람이 수술을 수행 하 고 조직 조작 지방 조직으로 섬세 한 수 있어야 합니다. 분쇄 또는 손상 된 omentum 피할 필요가 있다. 방어 조직으로 omentum, 대 식 세포 및 다른 백혈구에 농축입니다. 이러한 면역 세포 과도 한 조작에 의해 활성화 될 수 있다 고는 이식에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 둘째, 이식 (섬-히드로 혼합물) 로드은 또한 중요 합니다. 절차를 수행 하는 사람 죽은 볼륨을 피해 야 한다 그리고 모든 히드로 섬 혼합물의 주입 장치 로드 해야 합니다. 이 단계 후에 즉시 또 다른 중요 한 포인트는 주입 자체 이다. 주사 치료, 그리고 섬세 하 게 천천히, 수행 되어야 합니다. 주사기는 모든 나머지 독도 검색을 처음 로드 하는 빈 히드로에서 플러시됩니다 해야 합니다. 셋째, 봉합 이루어져야 합니다 신중 하 고 2 단계에서. 근육 계획 해야 될 봉합 먼저, 근육, omentum 봉합 하지 않도록 주의 복용 하 고 피부를 별도로 봉합 한다. Omental 이식에 대 한 explantation 절차에 대하여 특별 한 주의 때 위 (gastroepiploic 동맥)에 가까운 동맥 베는 순간에 취해야 한다. 그것은 몇 일 내의 동물 죽음에 어떤 지속적인 출혈 리드로 동물을 봉합 하기 전에 그들을 중지 발생 하는 모든 출혈에 주의 해야 합니다.
문제 해결 필요할 수 있습니다 매체에 관한 운반 독도; 하이드로 겔의 선택은 히드로 주 사용으로 실험, 최대입니다. 다른 재료를 사용 하 여 변수에서 발생할 수 있습니다 (또는 보충, 예 제외) 기능을 접목. 여기 설명 하는 방법을 7660 IEQ/kg의 섬 비율로 불활성 공동 이식 재료의 효율을 입증 했다.
현재 메서드 omental 크기와 히드로 속성에 의해 제한 될 수 있습니다. 당뇨병 쥐 모델을 사용 하려면 인슐린 치료는 충분 한 접목 영역을 제공 하기 위해 섬 이식 전에 필수입니다. 당뇨병 설치류 무게와 STZ 유도 당뇨병으로 인해 체 지방 량을 많이 잃게됩니다. 이 연구에 등록 하는 동물의 작은 무게, 고려도 작은 영역에 접목 수는 없습니다.
(전에 이식 펠 릿을 사용 하 여 그리고 그 후 오랫동안 행동 인슐린을 사용 하 여) 적절 한 glycemia 관리의 절약은 필수입니다. 여기, 우리가 여러 가지 이유로 이식의 날까지 인슐린 펠 릿을 보존 하기로 결정 했다. 첫째, 적절 한 glycemic 통제의 유지 보수 상당히 섬 이식11 해로운 수 있는 연속의 집중적인 인슐린 치료 및 받는 사람 수 받는 사람 기관에서 당뇨병에 의해 유도 된 산화 스트레스를 감소 클리닉12에서 관찰 하는 준비. 둘째, 우리는 쥐에 대 한 마 취 절차의 최대 수를 제한 하 고 싶었다. 긴-연기 인슐린을 사용 하 여 신진 대사 후속 동안 인슐린 치료의 구현에 관한 사용 되는 체계 피해 대규모 합병증 “진짜” glycemia 값을 절약 하 고 glucotoxicity (이식 파괴할 수 있다)이 때문.
이식 효율을 모니터링 하려면 glycemia 되지 않습니다 관련 매개 변수는 처음 몇 일에 쥐 펠 릿을 사용 하 여 인슐린 치료를 받고 있다. 이 때문에 C-펩 티 드 여러 번 이전 이식 하는 필수 검사입니다. 이 시대는 STZ 주입 후 동물을 선택 하는 연구의 시작과 다음 그냥 이식, 쥐 당뇨병 유지 하 고 재생은 최소한의 앞에 포함 됩니다.
하이드로 겔 속성은 또한 중요 하다. 액체 히드로 omental 조직에서 누출 됩니다 하 고 높은 점성 하이드로 겔 주 사용 되지 않습니다. 하이드로 겔 점도 injectability는 사용 하기 전에 테스트를 하지만 또한 섬 또는 생체 외에서 다른 세포 생존의 평가 의해 직접 재료를 테스트 필수 나타납니다. 여기, 독도 hypoxia과 높은 점성 캐리어의 사용에 매우 민감한 산소 보급을 발생할 수 있습니다.
기존의 방법에 대해 설명 하는 방법의 중요성의 측면에서이 내부-조직 이식 기술 재현성의 기간에서 장점이 있습니다. 또한 조직에 대 한 atraumatic 이며, 외 혈관 위치, 출혈 및 혈전 증 위험을 피 한다. 또한, 섬 이식 때, 인스턴트 혈액 중재 염증 반응은 피할된14이다. 또한, 유도 간 기능15점에서 위험 포즈 간으로 이식 달리 비 중요 한 장기로 독도 이식 수 있습니다.
최적의 성능, 생산 하는 하이드로 겔 수행 한다 하는 셀에 적용할 수 있다. 성장 인자 또는 특정 단백질의 사용은 이식된 세포16,17에 긍정적인 영향을 가질 수 있습니다.
결론,이 기술을 사용할 수 있습니다 다른 세포 유형에 하이드로 겔의 vivo에서 유효성 검사를 위해 독도 관해서는 활성 대사 환경 필요 하는 경우에 특히. 또한,이 수술 기술은 여러 응용 프로그램에 적용 됩니다 그리고 급속 하 게 인 간에 게 양도 그것 실행 될 수 있다 쉽게 강경을 사용 하 여 미래에 있을 수 있습니다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 지구의 알자스, CQDM-BioArtMAtrix-Pôle 알자스 Biovalley;에 의해 투자 되었다 53/14/C1입니다. 저자는이 혁신적인 기술 개발을 돕는 Hôpitaux Universitaires de 스트라스부르에서 팀의 홍보 Bruant-Rodier 감사.
Alginate (PRONOVA UP LMV) | Novamatrix | 4200206 | Hydrogel carrier |
Atraumatic needle (Blunt) | B.Braun | 9180109 | |
CMRL without FBS | Gibco | 11500576 | |
C-peptide ELISA kit | Mercodia | 10-1172-01 | |
Eosin | Leica Microsystems | 3801592E | |
Ethilon 4/0isoflo | Ethicon | F2414 | Surgical suture |
Hematoxylin | Leica Microsystems | 3801562E | |
Insulin pellets | Linshin | INS-B14 | |
Isofluorane | Centravet | ISO007 | |
Lantus (Insulin-Glargin) | Sanofi Adventis | Lantus SoloStar | Long acting insulin |
Metacam | Boehringer Ingelheim | MET019 | Anti-inflammatory drug |
NaCl (for saline 0.9%) | Sigma | 10112640 | |
Needle 26G | TERUMO | 050101B | |
Oxygen | Linde | 2010152 | For isoflurane use |
Pentobarbital sodique | Vetoquinol | Dolethal | For euthanasia |
Steranios 2% | Anios | 11764046 | |
Streptozotocin | Santa-Cruz | SC-200719A | |
Syringe – Injekt-F | B.Braun | 9166017V | |
Trocar & stylet (linshin) | Linshin | G12-SS | For pellet insertion |