여기서, 우리는 비파괴 샘플링 절차를 사용하여 꽃꽃에서 꽃 향기 휘발성을 수집하기위한 프로토콜을 제시한다.
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방법 논문
GC-MS 열 탈착 샘플링을 위한 헤드스페이스 휘발성 수집 기법을 사용한 신속한 플로랄 향수 휘발성 수집
이 논문에서
요약
초록
많은 꽃 가문의 향기가 샘플링되고 휘발성 물질분석되었습니다. 향기를 구성하는 화합물을 아는 것은 위협적이거나 멸종 위기에 처한 꽃을 보존하는 중요한 단계가 될 수 있습니다. 꽃 향기는 꽃가루를 유치하는 데 매우 중요하기 때문에이 방법은 수분을 더 잘 이해하거나 향상시키는 데 사용할 수 있습니다. 우리는 휴대용 숯 공기 필터와 진공을 사용하여 꽃 향기 휘발성을 수집하는 프로토콜을 제시한 다음 GC-MS에 의해 분석됩니다. 이 방법을 사용하면 쉽게 운반할 수 있는 기계를 사용하여 무파괴 방법을 사용하여 향수 휘발성을 샘플링할 수 있습니다. 이 방법론은 빠른 샘플링 절차를 사용하여 샘플링 시간을 2-3시간에서 약 10분으로 단축합니다. GC-MS를 사용하여, 향수 화합물은 본격적인 기준에 따라 개별적으로 식별 될 수있다. 재료 설정에서 데이터 출력 수집에 이르기까지 향기 및 제어 데이터를 수집하는 데 사용되는 단계가 표시됩니다.
서론
꽃은 일반적으로 수분 공급자를 유치하는 데 사용되는 향기를 생산하고 있습니다. 이 향기는 모두 꽃 혼합1,2,3로함께 작용하는 많은 화학 화합물로 구성되어 있습니다. 이러한 향기가 없다면 꽃은 꽃가루를 사용하여 유전 정보를 전달할 가능성이 적습니다. 꽃 향기는 많은 꽃 식물 가족에 문서화되어 있으며, 오키다과는 4연구 된 일반적인 가족 중 하나입니다. 수분에서 꽃 향기의 역할을 이해하려면, 비파괴적으로 수집하고 하루 중 다른 시간에 꽃에서 방출되는 화학 화합물을 분석하는 것이 중요하다 몇 일에서 몇 주 동안 꽃이 열려, 향기는 시간이 지남에 따라 다를 수 있기 때문에5.
이러한 종류의 샘플링에 대한 초기 프로토콜은 히스와 마누키안6에의해 개발되었습니다. 그들의 샘플링 방법의 목표는 연구되는 표본 (예를 들어, 식물, 곤충)에 대한 스트레스를 줄이는 것이었습니다. 이전 논문은 향기를 수집하기 위해 꽃꽃을 제거하는 등 식물에 파괴적인 절차....
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프로토콜
참고: 향수 나 향이 나는 로션 및 제품은 이러한 절차 중 착용해서는 안됩니다.
1. 꽃 선택
참고: 사용되는 꽃은 자연적으로 환경에서 자라거나 인공 환경 조건하에서 보관될 수 있습니다. 수집 중 온도, 습도 및 조명 수준은 사용되는 특정 꽃 종과 수집되는 데이터의 유형에 따라 달라질 수 있습니다. 예를 들어, 같은 꽃에 대해 낮과 밤에 데이터를 수집하여 향기가 하루 중 시간에 따라 달라지는지 확인하고, 현장에서 온실 꽃에서 수집되었습니다.
- 처음에 개봉되지 않은 꽃을 선택하여 샘플 수집 시간을 표준화합니다. 이것은 시간이 지남에 따라 향기를 변화하는 꽃에 대한 제어합니다.
- 개화 시간의 지속 시간에 따라 가능하면, 모든 샘플에 대한 표준 시간을 설정, 샘플을 수집하기 위해 개화 후 적어도 24 시간을 기다립니다.
- 식물에 여러 개의 꽃이 피는 경우, 같은 꽃의 반복 샘플링을 보장하기 위해 플래그 테이프 또는 유사한 것과 함께 사용되는 꽃을 표시합니다.
2. 재료 준비
- 오븐 백 (약 40.5 cm × 44.5 cm)과 골판지 PTFE 튜브를 사용합니다.
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결과
GC-MS의 대표적인 데이터는 도 1에서크로마토그램으로 나타내고 있다. 크로마토그램 외에도 결과의 데이터 파일도 제공됩니다(보충파일 1). 이 데이터 파일은 각 피크(RT)에 대한 보존 시간을 제공하고 해당 피크가 어떤 화합물인지 식별합니다(라이브러리/ID). 10:00에서 15:00 분 사이의 피크는화합물10의분자량으로 인해 꽃 휘발성이다. 피크 위의 숫자는 결과의 데이터 파일을 참조하는 식별 된 화합물의 보존 시간을 의미합니다(보충 파일 1). 각 향기 샘플에 대한 크로마토그램 및 데이터 파일을 획득함으로써, 화합물을 비교할 수 있고 각 꽃 샘플에 대해 재발하는 화합물을 식별할 수 있습니다. 컬렉션은 샘플링된 꽃을 나타내는 이름인 "샘플" 범주, 컬렉션의 시간 및 날짜(예: UF1 8AM 03/16/15)에서 이 문서에서 식별할 수 있습니다. 본 문서의 1페이지는 또한 .......
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토론
이 기술은 샘플링 속도와 휴대성에 매우 유용하지만, 한 가지 제한은 epiphytic 종, 또는 나무에서 자라는 것을 위해 그것을 사용하는 것이지 땅에서 자라지 않습니다. 본래 의10에서,샘플링된 꽃 중 하나는 골상이었다. 기계가 너무 무거워서 자유롭게 걸 수 없기 때문에 샘플링을 위해 안정적이고 높은 베이스를 만들어야 합니다. 또한 기기를 전기 콘센트또는 배터리 전원에 연결할 수 있으므로 필드 샘플링이 길어지면 기기를 사용하지 않을 때 배터리를 충전할 전원이 있어야 합니다.
여기서 의 방법을 사용하면 빠른 반복 샘플링과 훨씬 더 빠른 샘플링 시간으로 내부 비파괴 샘플링을 할 수 있습니다. 일부 꽃 향기 연구는 한 샘플에 대해 2-3 시간 동안 수집되는 향기를 필요로하지만, 제시 된 방법은 유리에 사용되는 수집 물질 (다공성 폴리머 흡착제)으로 인해 약 10 분 에서 휘발성 물질을 정확하게 수집 할 수 있습니다. 필터.
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공개 사항
저자는 이해 상충을 선언하지 않습니다.
감사의 글
USDA-ARS 연구 프로젝트 번호 6036-22000-028-00D. 이 출판물에서 거래, 회사 또는 법인 이름을 사용하는 것은 독자의 정보와 편의를 위한 것입니다. 이러한 사용은 미국 농무부 또는 농업 연구 서비스에서 적합할 수 있는 다른 제품 또는 서비스를 배제하는 공식적인 승인 또는 승인을 구성하지 않습니다. 또한, 플로리다 생물학 부 루이스와 발리나 본 교제의 대학 난초 생물학 (2017), 플로리다 대학 대학원 연구 펠로우십 (2014-2018) 뿐만 아니라 자금을 제공. 우리는 또한이 비디오의 촬영 중에 사용되는 오키드 식물에 대한 Stetson 대학에서 신디 베닝턴 감사합니다.
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재료
| 이름 | 회사 | 카탈로그 번호 | 댓글 |
|---|---|---|---|
| 벌크헤드 유니온 | Cole-Palmer | UX-06390-10 | |
| FEP 튜빙 | Cole-Palmer | UX-06407-60 | |
| 가스 크로마토그래피 | Hewlett Packard | 6890 | |
| 유리솜, 실란화된 | Sigma-Aldrich | 20411 | |
| 입구 라이너 | Agilent | 5062-3587 | |
| 질량 분석기 | Hewlett Packard | 5973 | |
| 레이놀즈 오븐 백 | Reynolds Consumer Products | 터키 크기 | |
| Tenax 다공성 폴리머 흡착제 | Sigma-Aldrich | 11982 |
참고문헌
- Knudsen, J. T., Tollsten, L., Bergstrom, L. G. Floral scents- A checklist of volatile compounds isolated by head-space techniques. Phytochemistry. 33, 253-280 (1993).
- Dudareva, N. A., Pichersky, E. Biology of floral scent. , CRC Taylor and Francis. Boca Raton, FL. (2006).
- Altenburger, R., Matile, ....
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재인쇄 및 허가
