제 브라 피시에서 선천적인 스트레스를 연구 하는 행동 접근법

요약

이 원고는 성인 제 브라 피시에서 행동 하는 스트레스를 측정 하는 간단한 방법을 설명 합니다. 이 접근법은 zebrafish가 스트레스가 많은 상태일 때 탱크의 아래쪽 절반을 선호 하는 타고 난 경향을 활용 합니다. 우리는 또한 약리학으로 분석을 결합 하는 방법을 설명 합니다.

초록

스트레스 자극에 적절 하 게 대응 하는 것은 유 기체의 생존을 위해 필수적입니다. 광범위 한 연구는 스트레스 관련 질병 및 정신 질환의 넓은 스펙트럼에 이루어졌다, 그러나 스트레스의 유전 및 신경 조절에 대 한 추가 연구는 여전히 더 나은 치료법을 개발 하는 데 필요한. Zebrafish는 돌연변이 및 형질 전환 라인의 큰 컬렉션이 존재 하기 때문에 스트레스의 신경 기초가 되는 것을 조사 하기 위한 강력한 유전 모델을 제공 합니다. 또한, 약리학은 쉽게 제 브라 피쉬에 적용 할 수 있습니다, 대부분의 약물은 물에 직접 추가 할 수 있습니다. 우리는 여기에서 ' 소설 탱크 테스트 '를 사용 하 여 zebrafish에서 선천적인 스트레스 반응을 연구 하 고 분석 법을 사용 하 여 잠재적인 완화 약물을 검증할 수 있는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 쉽게 zebrafish 라인과 결합 될 수 있다 유전자 돌연변이를 품고, 또는 정확한 신경 회로를 조작 하기 위한 트랜스 제 닉 접근이 사용 되는 그. 분석은 또한 다른 물고기 모형에서 사용 될 수 있습니다. 함께, 설명 된 프로토콜은 다른 실험실에이 간단한 분석의 채택을 촉진 한다.

서론

스트레스 반응은 잠재적으로 유해한 또는 회피 자극으로 인해 변경 된 행동 및 생리 적 상태입니다. 스트레스 반응은 동물의 왕국 전체에 걸쳐 보존 되 고, 유기 체¹의 생존에 중요 하다. 수십 년의 연구는 스트레스 상태를 기본으로 하는 유전 및 신경 메커니즘의 일부에 대 한 우리의 지식을 크게 확장 했습니다. 오늘, 복숭아 류 및 striatum와 같은 뇌의 영역², 및 글 루 코 코르 티코 이드 (gr) 및 mineralocorticoid 수용 체 와 같은 유전적 요인 ( 씨)는 광범위 하 게 연구 되었다³,⁵,⁶. 이러한 중요 한 결과에도 불구 하 고, 많은 스트레스의 유전 및 신경 조절에 대 한 알려지지 않은 남아. 이와 같이, 많은 스트레스 관련 장애는 치료제의 부족으로 고통.

유전적으로 amendable 모형 유기 체는 행동의....

프로토콜

이 의정서는 제도적 동물 관리에 의해 승인 되었으며, 플로리다 대서양 대학에 커 먹 잇을 사용 합니다.

1. 준비

1. 행동 연구를 수행 하기 위한 고립 된 방을 지정 하거나 고립 되어 있도록 룸의 섹션을 닫습니다.
   참고: 객실은 방해 받지 않고 물고기의 정상적인 행동을 방해 하지 않도록 트래픽이 낮습니다.
2. 다음과 같은 재료와 장비를 행동 실에 옮깁니다: (i) 카메라와 렌즈, 렌즈에 부착할 수 있는 적외선 필터 (iii) 카메라를 장착 하는 컴퓨터에 카메라를 장착 하는 소프트웨어, (v)에는 견고 하 고 안정적인 테이블 분석을 수행 하는 (vi) 적외선 조명 (IR 조명, 850 nm 또는 940 nm), (vii) 기록 탱크의 길이 보다 긴 백색 아크릴 디퓨저 (viii) 1.8 L 사다리꼴 플라스틱 분석 탱크 (' 신규 탱크 ' 라 함) 여기에 사용 되는 것은 12 x 18 인치) 및 (ix) 물고기 시스템 물 양동이.
   참고: 새로운 탱크의 경우, 우리의 실험실은 사다리꼴 모양의 상용 플라스틱 용기를 사용 합니다. 탱크의 치수는 대략 6 x 9에 있습니다 (상세 치수는 그림 1A에 나와 있습니다). 우리가 사용 하....

결과

제 브라 피시에서의 스트레스 검사
야생 형 제 브라 피시에서 시간이 지남에 따라 스트레스 거동을 검사 하기 위해, 우리는 새로운 탱크 테스트에서 AB 스트레인²⁴ 에서 성인 물고기를 테스트 했습니다. AB 성인은 상기와 같은 프로토콜을 실시 하였다. 간단히, 물고기는 행동 실에 있는 탱크에서 1-h 순응 기간을 받았다. 개인은 10 분 동안 비 커에 넣고 신선한 시스템 물로 채워진 익숙하지 않은 탱크 (소설 탱크)에 부드럽게 배치 되었습니다. 운동 활동은 10 분 동안 기록 되었고, 추적은 상업적으로 이용 가능한 소프트웨어를 사용 하 여 오프 라인으로 수행 되었다. 첫 번째 및 마지막 분 사이의 운동 활동의 비교는 극적인 차이를 보였다 (그림 2a, B). 처음으로 탱크에 투입 될 때, 어류는 바닥에서 대부분의 시간을 보냈다.......

토론

제 브라 피시는 새로운 탱크에서 강력한 스트레스 반응을 보입니다.
여기서, 우리는 성인 zebrafish에서 스트레스 응답을 검사 하기 위한 간단한 행동 접근법을 설명 하 고 약리학을 사용 하 여 스트레스의 간단한 측정으로 접근 방식을 검증 합니다.

새로운 탱크 시험은 제 브라 피시와 다른 종의 물고기^12,14,21,35,³⁶및 제 브라 피쉬의 타고 난 스트레스를 검사 하는 데 널리 사용 되는 테스트로 서 강력한 불안 관련 약물의 약리 효과를 검사 하는 모델. 인간과 유사 하 게, 이러한 연구는 부 피 라 네, 니코틴, 부정맥 및 scopolamine.......

재료

이 논문에 사용된 재료 목록

이름	회사	카탈로그 번호	댓글
카메라			우리는 Edmund Optics의 렌즈가 장착된 Point Grey Grasshopper3 USB 카메라를 사용합니다.
적외선 필터	Edmund Optics
Video Acquisition Program			획득 프레임 속도를 설정할 수 있으므로 Virtualdub 또는 FlyCapture와 같은 프로그램을 사용하십시오.
적외선 LED 조명
분석 탱크	Aquaneering	부품 번호 ZT180	크기 : M3 1.8 리터
스탠드 및 클램프 또는 카메라
250mL 비커
추적 소프트웨어			Noldus Information Technology Buspirone chloride의 Ethovision XT 13을 사용합니다
	Sigma-Aldrich	B7148
무작위 시행 계산기			Microsoft Excel에서 RANDBETWEEN 함수를 사용합니다.

용 표준 삼각대.