Aplicação da tecnologia de Microfluidic Biochip para detectar soro alérgeno-específicas E de imunoglobulina (sIgE)
Summary
Este trabalho apresenta um protocolo para a detecção de imunoglobulina soro específico E com um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluídicos e a avaliação de sua utilidade no diagnóstico de alergia.
Abstract
Doença alérgica é comum em adultos e crianças. Identificação dos alérgenos causadores é significativa na prevenção e gestão de doença. No entanto, um sistema de medição específico de imunoglobulina E (IgE) com uma relação preço-desempenho elevado está faltando na China continental, especialmente nos hospitais de cuidados primários. Este artigo descreve os procedimentos de princípio e operação de usando um sistema de cartucho-baseado da quimioluminescência microfluidic para detectar IgE alérgeno-específicos no soro. Os resultados foram comparados com os do ImmunoCAP (sistema 1), o padrão industrial, e a reprodutibilidade do sistema para detectar pacientes sensibilizados a alérgenos comuns é avaliada. Os resultados mostraram que, em comparação com o ImmunoCAP (sistema 1), o sistema BioIC (sistema 2) tem boa precisão e sensibilidade na detecção de IgE específicos do soro contra vários alérgenos inalantes e alimentos, mas com um custo significativamente menor. Ele pode servir como uma boa alternativa para sistema 1 em hospitais de cuidados primários na China continental, que têm menor disponibilidade financeira.
Introduction
A prevalência de alergias aumentou de forma constante nas últimas décadas e está afetando 20% – 30% da população global1. Identificação dos alérgenos causadores tem um significado importante na gestão das doenças. Na China, uma vez que testes cutâneos de pele in vivo registrado não estão disponíveis no país, determinação in vitro de IgE do soro específico é o mais importante e ferramenta comumente usada para tipo I alergia diagnostica2. Isso é semelhante às práticas no mundo ocidental, mas embora ImmunoCAP sistema (sistema 1), um sistema de base de enzima-lig da imunoabsorção fluorescência, é percebido como o padrão ouro para o diagnóstico de alergia in-vitro3, seu uso na China é muito limitado devido de seu alto preço do equipamento e do reagente. Portanto, é extremamente necessário um novo sistema de diagnóstico de alergia alternativo com uma relação preço-desempenho elevado.
O sistema BioIC (sistema 2) é um sistema baseado em cartucho microfluidic, baseado no princípio da quimioluminescência para multiplexado ensaios de IgE específicos do soro. Com um tamanho de 7 cm x 4 cm, o cartucho microfluídicos é composto de três camadas de plástico moldado por injeção. A parte superior é de 3 mm de espessura em policarbonato transparente que carrega boa estabilidade durante os processos de montagem térmica. Juntamente com a camada de 3 mm de espessura inferior construída a partir de um copolímero de acrilonitrila, butadieno e estireno (ABS), la sanduíches a 0,5 mm de espessura camada média feita de borracha de silicone. Sendo na cor preta, a camada média oferece mais baixo fundo durante a detecção de quimioluminescência. Em cima do gel de silicone, uma fina camada de membrana de nitrocelulose (NC membrana) é pulverizada na posição correspondente à zona de reação, que permite que a mancha de diferentes proteínas alergênicas. O objetivo deste estudo é avaliar o desempenho clínico do sistema microfluidic para determinação de IgE alérgeno-específicos no soro multiplexado.
Protocol
Representative Results
Discussion
Semelhante aos resultados de muitos outros estudos15,16,17, os resultados do sistema microfluidic baseado em soros de 293 pacientes alérgicos mostrou aquela casa ácaros (incluindo d. pteronyssinus, D. farinaee b. tropicalis) são os principais alérgenos inalantes, levando a doenças alérgicas no sul da China, Considerando que para o alimento, leite, amendoim, camarão e caranguejo são os alérgen…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores Obrigado Professor Mei Jiang pela ajuda na análise estatística e Sr. Hammer Tsui na preparação do manuscrito. Este estudo foi suportado por tecnologia Fundação (201804020043) e a ciência de Guangzhou e Nacional Natural Science Foundation da China (NSFC 81572063 e 81802076 NSFC). Grupos de financiamento de acordo com o projeto de estudo, análise de dados, preparação de manuscrito e decisão de publicar. Nenhum outro financiamento foi recebido para este estudo.
Materials
| Agnitio BioIC Analyzer | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | BA-G2000 | |
| BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | DR17A12 | |
| BioIC Cartrideg Placement plate | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | T20SET | |
| BioIC Reagent Dispenser | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | DS-1 | |
| Image two-dimensional barcode machine | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | NLS-HR200 | |
| Software Package, LabIT | Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) | Version 2.4.12 | |
| VORTEX-5 Vortex Mixer | Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd. | VORTEX-5 |
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